Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

Определение мутагенной активности производных тиазола и бензотиазола

В статье представлены данные об изучении потенциальных лекарственных препаратов. Проведен ана­лиз 2-амино-4-фенилтиазола и 7-бром-2-аминобензотиазола на предмет обнаружения мутагенной ак­тивности с применением теста Эймса. Для выявления мутации замены пар оснований и сдвига рамки считывания использовались штаммы Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100. В ходе эксперимента не выявлено мутагенной активности исследуемых веществ при использовании обоих штаммов.

Появление новых химических соединений требует проведения исследований для определения свойств, с целью дальнейшего их использования в качестве фармацевтических препаратов. В связи с быстрыми темпами развития фармакологической науки во всем мире значительно увеличился инте­рес к органической химии как основному источнику биологически активных веществ. Значительный интерес представляет химия гетероциклических соединений. Это связано с целым рядом особых свойств, проявляющихся у подобных веществ. К данным свойствам можно отнести различные виды фунгицидной, акарицидной, фармакологической активности, новые оптические свойства получаемых органических соединений, возможность их применения во многих отраслях человеческой деятельно­сти. Изучение мутагенной активности вновь синтезированных химических соединений необходимо для возможного их применения в качестве лекарственных препаратов.

Для определения мутагенного действия новых веществ в настоящее время используются мето­ды, позволяющие определить возникновение генных и хромосомных мутаций. Тест, выявляющий наличие генных мутаций, разработан в лаборатории доктора Эймса. Он основан на определении ре-вертантных колоний штаммов S.typhimurium, ауксотрофных по гистидину, к прототрофности. В рабо­те использованы два штамма S.typhimurium ТА 98 и ТА 100, позволяющие определить мутации двух типов: замены пар оснований и сдвига рамки считывания. Тестирование с применением этих двух штаммов позволяет всесторонне анализировать возможное мутагенное действие исследуемых ве­ществ. В настоящее время в цитогенетических лабораториях также используется микроядерный тест, позволяющий без больших материальных и временных затрат определить хромосомные мутации в мазках крови лабораторных животных в качестве модельных объектов [1, 2].

С целью выявления возможного мутагенного влияния веществ, синтезированных учеными хи­мического факультета КарГУ имени Е.А.Букетова, использовали методики, позволяющие оценить мутагенную активность. На сегодняшний день известны экспресс-методы для определения генных и хромосомных мутаций. Эти методы позволяют в короткие сроки, без больших материальных и вре­менных затрат и в то же время с высокой степенью достоверности определить мутагенную актив­ность испытуемых веществ.

В лаборатории молекулярной генетики исследовательского парка биотехнологии и экомониторинга биолого-географического факультета КарГУ имени Е.А.Букетова имеются штаммы Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100. Штаммы приобретены из Республиканской коллекции микроорганиз­мов. Из-за специально вызванных мутаций в гистидиновом опероне эти штаммы являются ауксотро-фами по гистидину. Но под влиянием мутагена происходит реверсия к прототрофности, и штаммы обретают способность синтезировать гистидин. Использованные в настоящей работе культуры харак­теризуются наличием плазмиды рКМ 101, которая увеличивает вклад ошибочной репарации ДНК в общий процесс восстановления после мутагенного воздействия, тем самым значительно повышает чувствительность метода. Кроме того, эта плазмида придает штаммам устойчивость к ампициллину, что облегчает их хранение на чашках с питательными средами. Причем штамм ТА 98 ревертирует к прототрофности путем сдвига рамки считывания, а штамм ТА 100 — путем замены пар основа­ний [3].

В ходе эксперимента тестировали производные тиазола и бензотиазола, а именно 2-амино-4-фенилтиазола и 7-бром-2 аминобензотиазола. Следуя рекомендациям методики, вещества испытывали в концентрациях 0,1000 мг/мл, 0,0100 мг/мл, 0,0010 мг/мл. В качестве позитивного контроля исполь­зовали циклофосфан (500 мг/чашку) для штамма ТА 100 и бромистый этидий (10 мг/мл) для штамма ТА 98. В качестве негативного контроля применяли стерильную дистиллированную воду, а также диметилсульфоксид, который являлся растворителем исследуемых соединений.

Для проведения эксперимента первоначально определяли соответствие штаммов генотипам. Для этого высевали их на чашки Петри с эндо агаром, способствующим росту микроорганизмов группы энтеробактерий, к которым относятся и штаммы Salmonella typhimurium. В среду добавляли ампициллин в концентрации 100 мкг/мл. Для определения ауксотрофности по гистидину выращивали ночную культуру, высевали на чашки Петри с минимальной средой с целью получения газона бакте­риальной культуры. Затем наносили гистидин и стерильную воду на стерильный диск фильтроваль­ной бумаги, помещенный в середину чашки [4].

После определения генотипов штаммов Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100 проводили ис­следования на определение генных мутаций испытуемых веществ.

С каждым штаммом проводили эксперимент по 10 раз. Каждый раз определяли титр бактери­альной культуры. Для этого ночную культуру подращивали в 100 мл питательной среды (мясопеп-тонном бульоне) при непрерывном покачивании в шейкере. Для определения титра культуры прово­дили серию десятикратных разведений в стерильной дистиллированной воде. Затем шпателировани-ем высевали культуру на чашки со средой эндо с 6 и 7 разведениями. Выращивали штаммы в термо­стате при температуре 37 °С в течение 18-24 часов. Затем подсчитывали количество выросших коло­ний на чашках с соответствующим разведением культуры. Титр культуры Salmonella typhimurium ТА 98 составлял 2,2-2,7^109, Salmonella typhimurium ТА 100 — 2,5-3,1^109.

Рост колоний Salmonella typhimurium ТА 98 из седьмого разведения

Фотография одного из экспериментов представлена на рисунке.

Рисунок демонстрирует количество колоний, выросших после серий десятикратных разведений. Процедура необходима для определения титра бактериальной культуры с целью анализа данных, по­лученных в результате эксперимента.

Большое количество бактериальных клеток, составляющее в наших экспериментах 109, необхо­димо для определения возможной мутагенной активности тестируемых веществ. Учитывая, что спон­танные мутации возникают с частотой 1 на 106-107 клеток, нам удалось вырастить индикаторные штаммы до нужной степени.

С полученной суспензией штаммов Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100 проводили после­дующие манипуляции. Для этого вносили в пробирки с верхним полужидким агаром последователь­но тестируемое вещество, биотин, гистидин и один из используемых штаммов. Чтобы не застыл агар и в то же время не погибла культура микроорганизмов, поддерживали температуру среды 45 °С. По­сле наслоения верхнего агара на нижний минимальный 1,5 %-ный агар чашки подсушивали в течение 30-40 минут, ставили в термостат на 37 °С. Количество колоний-ревертантов подсчитывали через 48 часов.

В экспериментах со штаммами Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100 использовали по 3 чашки для каждой концентрации тестируемого вещества.

Для оценки степени мутагенности использовали шкалу, предложенную Эймсом, Фонштейном. Согласно ей возможны результаты, приведенные ниже:

  1. Количество колоний на опытных и контрольных чашках различается более чем в 2,5 раза. Следовательно, в данном эксперименте мутагенной активности не выявлено, проставляли индекс му­тагенности (-).
  2. Число колоний на опытных чашках превышает контрольное в 2,5-10 раз. Выявлена слабая степень мутагенной активности. Индекс мутагенности (+).
  3. Число ревертантных колоний на опытных чашках на один — два порядка превышает кон­трольное. Выявлена средняя степень мутагенной активности. Индекс мутагенности (++).
  4. Число колоний на опытных чашках более чем в 100 раз превышает показатель числа колоний на чашках с чистым контролем. Выявлена сильная степень мутагенной активности. Индекс мутаген­ности (+++). [5]

Уровень колоний-ревертантов штаммов Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100, выросших под действием 2-амино-4-фенилтиазола

Результаты анализа мутагенной активности 2-амино-4-фенилтиазола приведены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, количество колоний-ревертантов на чашках с 2-амино-4-фенилтиазолом соизмеримо с уровнем бактерий на среде с добавлением отрицательных контрольных образцов: сте­рильной воды и диметилсульфоксида. Полученные результаты свидетельствуют об отсутствии мута­генной активности испытуемого соединения. Не обнаружено увеличения количества ревертантных колоний Salmonella typhimurium ни в случае со штаммом ТА 98, ни при использовании штамма ТА 100. Следовательно, амино-4-фенилтиазол не вызывает генных мутаций ни с заменой пар основа­ний, ни со сдвигом рамки считывания.

С целью определения мутагенной активности 7-бром-2-аминобензотиазола проводили исследо­вания, аналогичные описанным выше при тестировании 2-амино-4-фенилтиазола. Определяли мута­ции замены пар оснований и сдвига рамки считывания. Выращивали культуры штаммов Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100 до плотности 106-107. Освежали их, помещая в колбы с мясопептонным бульоном и продолжали выращивать при температуре 37 °С с покачиванием. После центрифугирова­ния и промывания в фосфатном буфере ресуспендировали клетки, доводя плотность культуры до 109. Для определения титра бактериальных культур Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100 проводили серию десятикратных разведений в стерильной воде. С целью определения титра бактериальной культуры высевали на чашки с 6 и 7 разведениями. Количество бактериальных клеток в 1 мл в сред­нем составляло: для штамма Salmonella typhimurium ТА 98 — 109, для штамма Salmonella typhimurium ТА 100 — 109.

Как и в случае с тестированием 2-амино-4-фенилтиазола, в экспериментах со штаммами Salmo­nella typhimurium ТА 98 и ТА 100 использовали по 3 чашки для каждой концентрации тестируемого вещества. Каждый эксперимент выполняли в десяти повторностях. Подсчитывали количество коло­ний с обратными мутациями от ауксотрофности по гистидину к прототрофности. Средние данные по количеству колоний-ревертантов, выросших при тестировании 7-бром-2-аминобензотиазола, поло­жительных и отрицательных контрольных образцов, представлены в таблице 2.

Уровень колоний-ревертантов штаммов Salmonella typhimurium ТА 98 и ТА 100, выросших под действием 7-бром-2-аминобензотиазола

Данные таблицы 2 демонстрируют отсутствие мутагенной активности 7-бром-2-аминобензо-тиазола, поскольку количество ревертантных колоний, выросших на минимальной среде при добав­лении тестируемого вещества, а также отрицательных контрольных образцов стерильной воды и ди-метилсульфоксида оказалось приблизительно одинаковым при использовании обоих штаммов — как Salmonella typhimurium ТА 98, так и Salmonella typhimurium ТА 100. Этот факт доказывает, что 7-бром-2-аминобензотиазол не вызывает ни мутации типа сдвига рамки считывания, ни замены пар оснований.

В среднем титр бактериальной культуры составил у штамма Salmonella typhimurium ТА 98 — 2,2х109. В 6-м разведении — от 118 колоний до 270, в 7-м — от 13 до 36 колоний. Для штамма Sal­monella typhimurium ТА 100 — 2,7х109. В 6-м разведении — от 170 колоний до 310, в 7-м — от 26 до 35 колоний.

Дальнейшие исследования предполагают расширение спектра тестируемых соединений с потен­циальной фармацевтической активностью, а также продолжение тестирования 2-амино-4-фенил-тиазола и 7-бром-2-аминобензотиазола в микробиологоческом тесте Эймса с метаболической актива­цией in vivo in vitro. 

 

Список литературы

  1. Харбиев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.М.: Медицина, 2005.— 832 с.
  2. Мутагены (скрининг и фармакологическая профилактика воздействий) / А.Д.Дурнев, С.Б.Середенин. — М.: Меди­цина, 1998. — 328 с.
  3. Оценка мутагенности новых лекарственных средств: Метод. рекомендации. — М., 1994. — 20 с.
  4. Bahrami K., Khodae M.M., Naali F. Mild and Highly Efficient Method for the Synthesis of 2-Arylbenzimidazoles and 2-Arylbenzothiazoles // J. Org. Chem. — 2008. — 73. — P. 6835-6837.
  5. Гуськова Т.Д. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения // Хим.-фарм. журн.— № 7. — С. 10-15.

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.