Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

Анализ ассоциации полиморфных генов основных цитокинов с синдромом раздраженного кишечника

В статье представлены результаты исследования иммуногенетической составляющей синдрома раз­драженного кишечника. Установлены особенности частот встречаемости аллелей и генотипов генов цитокинов IL-1Ra, IL-1b, IL-4, TNFa у больных СРК. Проведен иерархический логлинейный анализ для выявления ассоциации комбинаций генотипов с предрасположенностью к синдрому раздраженно­го кишечника. Установлены комбинации генотипов генов цитокинов, обладающие протекторными свойствами при СРК: внутригенная комбинация -308G/G- -863 C/A гена TNFa и межгенная комбина­ция провоспалительных цитокинов IL-1b+3953 C/C- -863C/A TNFa. Выявлены гендерные различия в распределении полиморфизма цитокинов у больных СРК.

Синдром раздраженного кишечника (СРК) является одной из наиболее актуальных проблем со­временной гастроэнтерологии. Особенностями проблемы СРК являются: высокая распространен­ность полисистемных жалоб, отсутствие четких диагностических маркеров, ограничение спектра эф­фективных методов лечения, направленных на биологические дефекты. В большинстве работ СРК рассматривается как хронический абдоминальный симптомокомплекс [1].

Распространенность СРК в большинстве стран мира составляет в среднем 20 %, варьируя от 9 до 48 % [2]. В развитых странах Европы, Америки, в Японии, Китае обращаемость высока и распростра­ненность заболевания достигает 30 %; в Таиланде — 5 %, в Иране — 3,4 %. Пик заболеваемости при­ходится на трудоспособный возраст — 30-40 лет. Соотношение женщин и мужчин среди больных, по разным данным, варьирует от 1:1 до 2:1. Средний возраст пациентов составляет 24-41 год [2].

Развитию СРК могут предшествовать личностные особенности, обусловленные генетически или сформировавшиеся под влиянием окружающей среды [3]. В качестве генетической составляющей СРК изучаются генетический полиморфизм, вовлеченный в обмен серотонина, адренэргической и опиоидной систем, а также гены, кодирующие белки с иммуномодулирующими и/или нейромоду-лирующими свойствами. Среди генов-кандидатов СРК в зарубежных источниках рассматриваются: SLC6A4 — ген серотонин-транпспортера, ген а-2адренэргического рецептора, СОМР-ген катехол-о-метилтрансферазы, GNB3 — ген Р3 субъединицы G-белка и т.д. [3].

Сегодняшние представления о патофизиологии СРК позволяют предположить, что в основе за­пуска или усиления патологического процесса лежит комбинация факторов — недостаточная или избыточная активация иммунной системы и дисбиоз кишечника. Участие цитокинов в патофизиоло­гических процессах при СРК подтверждают данные лабораторных исследований: снижена экспрес­сия иммунорегуляторных цитокинов и повышена экспрессия провоспалительных цитокинов [4-6].

В связи с тем, что продукция цитокинов находится под генетическим контролем, то можно предположить, что генетические полиморфизмы определенных цитокинов могут выступать в качест­ве факторов, определяющих чувствительность персоны к развитию патологии и влияющих на вариа­бельность клинических проявлений СРК.

Цель: установить распределение частот аллелей, генотипов и сочетаний генотипов генов основ­ных цитокинов IL-1Ra, IL-1b, IL-4, TNFa у больных синдромом раздраженного кишечника европео­идного происхождения, проживающих на территории Челябинской области.

Задачи:

  1. Оценить частоты встречаемости аллелей и генотиповIL-1Ra, IL-1b, IL-4, TNFa у больных СРК в сравнении с условно-здоровыми представителями русской популяции.
  2. Выявить особенности распределения полиморфизма геновIL-1Ra, IL-1b, IL-4, TNFa в зависи­мости от пола у больных СРК.
  3. Оценить ассоциацию межгенных и внутригенных взаимодействий L-1Ra, IL-1b, IL-4, TNFa в виде сочетаний генотипов генов цитокинов с восприимчивостью к СРК.

Материал и методы

В исследование включен 81 человек русской этнической группы с диагнозом СРК. Пациенты находились на лечении в гастроэнтерологическом отделении Дорожной клинической больницы МПС на станции «Челябинск» в период с 2001 по 2007 гг. Для диагностики заболевания использовались Римские критерии III (2007). Средний возраст начала заболевания составил 32,8±1,4 лет, длитель­ность заболевания в среднем от 3 до 10 лет у половины пациентов. Обследования пациентов прово­дились по утвержденным Медико-экономическим стандартам Министерства здравоохранения 1998 г.

Контрольную группу составляли потенциальные доноры костного мозга ОГУП «Челябинская областная станция переливания крови»: 213 человек, из них мужчин — 119 (55,9 %), женщин — 94 (44,1 %). Средний возраст составил 34,6±0,75 лет. Этническая принадлежность больных СРК и здоровых лиц определялась согласно рекомендациям Международного Уоркшопа (1980 г., Лос-Анджелес, США). Демографическая характеристика обследуемых групп представлена в таблице.

Таблица

Демографическая характеристика обследуемых групп

Демографическая характеристика обследуемых групп 

Характеристика исследуемых полиморфизмов. Гены IL-1b и IL-1Rа расположены на второй хромосоме в районе 2q12 [7, 8]. Для исследования полиморфизма по одному нуклеотиду (SNP) в 5 экзоне гена IL-1b (положение +3953) использовали разновидность ПЦР - ПДРФ - анализ поли­морфизма длины рестрикционных фрагментов. В основе метода лежит ПЦР, с последующей обра­боткой ампликонов ферментом эндонуклеазой рестрикции Taq I при температуре +65 °С в течение 8 часов.

При гидролизе амплификационного фрагмента гена IL-1b выявлялось три фрагмента размером 550 п.н., 146 п.н. и 404 п.н. Фрагмент 550 п.н. соответствует амплификационному фрагменту, не под­вергнувшемуся гидролизу, что указывает на наличие аллеля IL-1b (+3953) Т, гомозиготное состояние обозначено m/m (сокращение от mutant — мутантный аллель). При наличии аллеля C происходит разрезание ампликона на два фрагмента — 146 п.н. и 404 п.н., гомозиготность по этому аллелю обо­значена w/w (сокращение от wild — аллель дикого типа), а гетерозиготное состояние С/Т в данном исследовании обозначено как w/m [8, 9]. Для определения полиморфизма типа варьирующего числа тандемных повторов (VNTR) в гене IL-1Ra использовали ПЦР с праймерами, фланкирующими поли­морфный регион в пределах второго интрона, в котором находится VNTR участка длиной 86 п.н. В результате амплификации мы идентифицировали фрагменты ДНК размером 438, 524, 610, и 696 н.п., соответственно с 2, 3, 4 и 5 копиями тандемных повторов [8-10]. Эти аллели были обозначе­ны как 2R, 3R, 4R и 5R в данном исследовании.

Ген IL-4 расположен на длинном плече 5 хромосомы [8, 9]. Для исследования VNTR IL-4 прово­дили ПЦР с праймерами, фланкирующими полиморфный регион в пределах 3-го интрона, в котором находится вариабельное количество тандемных повторов размером 70 н.п. В результате амплифика­ции идентифицировали фрагменты ДНК размерами 255 и 325 н.п. соответственно, с 2 и 3 копиями тандемных повторов. Эти аллели были обозначены как 2R и 3R [9]. Наборы для типирования генов цитокинов синтезированы группой фармакогеномики Института химической биологии и фундамен­тальной медицины (ИХБФМ СО РАН). Детекция полученных ампликонов проводилась методом вер­тикального электрофореза в 8 %-ном полиакриламидном геле.

Ген TNFa располагается в пределах главного комплекса гистосовместимости МНС и относится к генам HLA III класса. Он отстоит на 600 кДа от локуса HLA-В и характеризуется высоким количест­вом SNPs в промоторной области, наиболее известными являются положения -308, -238. Однако есть и другие полиморфизмы типа SNP, например, -863, способные также влиять на экспрессию TNFa [7, 11]. Типирование SNPs в гене TNFa - ПДРФ - анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов: амплификация с последующей обработкой ампликонов эндонуклеазами рестрикции NcoI (37 °С в течение 16 часов) для положения -308 (G/A), TaiI для положения -863 (65 °С в течение 8 часов). Детекция результатов — электрофорез в 8 % ПААГе.

Статистическая обработка. В работе использовались стандартные иммуногенетические крите­рии: критерий X2 — для 1 степени свободы и выше, критерий X2 с поправкой Йетса на непрерывность применялся для одной степени свободы, когда абсолютные частоты были меньше 10, критерий Фи­шера использовался при абсолютных частотах меньше 5. Для анализа ассоциации комбинаций гено­типов с восприимчивостью к СРК применялся иерархический логлинейный анализ, в котором рас­считывался критерий максимального правдоподобия (G) и отклонения Фримана-Тьюки. Для оценки вероятности возникновения признака (заболевания или какой-то клинической характеристики) в за­висимости от генетического варианта (аллеля, генотипа, комбинации генотипов) применялся крите­рий отношения шансов (OR) с расчетом 95 %-ного доверительного интервала (CI) — отношение шансов в одной группе к шансам этого же события в другой группе. Во всех случаях различия счита­ли статистически значимыми при р < 0,05, незначимыми при р > 0,10; для промежуточных значений р (0,05 <р < 0,10) обсуждали тенденцию к различиям [12].

Результаты и их обсуждение

  1. На первом этапе был проведен анализ распределения частот встречаемости аллелей и геноти­пов генов исследуемых цитокинов в группах больных СРК и условно-здоровых лиц русской популя­ции Челябинской области. Частоты встречаемости аллелей и генотипов геновIL-1Ra, IL-1b, IL-4, -308G/ATNFa не отличались между исследуемыми выборками. Различия были установлены только для частот аллелей и генотипов в точке -863TNFa (на уровне тенденции).

Группа больных СРК характеризовалась сниженной частотой аллеля с заменой -863* А, связан­ного с повышением продукции TNFa [11] и повышенной частотой другого — частого аллеля -863*С (на уровне тенденции X2 = 3,23, p = 0,0722 для одной степени свободы), но по критерию отношения шансов (OR) такое перераспределение частот аллелей не имеет диагностической значимости (OR = 0,57 95 %CI 0,3-1,06).

Больные СРК также отличались от условно-здоровых лиц повышенной частотой генотипа -863 СС TNFa (82,5 % против 72,8 %, X2 = 2,97, p = 0,0848 для одной степени свободы, на уровне тенден­ции), но как маркер предрасположенности к СРК данный генотип выступать, вероятно, не может, так как расчет критерия OR показал, что его доверительный интервал находится в диапазоне, захваты­вающем единицу: OR = 1,76 95 %CI 0,92-3,39.

Таким образом, установленные изменения частот аллелей и генотипа СС полиморфного сайта -863 промоторной области гена TNFa могут быть особенностью группы больных СРК, но не являют­ся маркерами группы риска СРК.

  1. Вторая задача посвящена рассмотрению наличия или отсутствия изменений в частотах встре­чаемости аллелей и генотипов генов цитокинов у больных СРК в зависимости от пола. У женщин, больных СРК, выявлены следующие особенности.

IL-1Ra. Повышена частота аллеля 2R IL-1Ra (на уровне тенденции, X2 = 2,82, p = 0,093 OR = 1,54, 95 % CI 0,93-2,5) за счет увеличения количества носителей гомозиготного генотипа 2r/2r (p = 0,09 OR = 2,64, 95 % CI 0,88-7,9). Однако общий эффект взаимодействия между частотами алле­лей и генотипов IL-1Ra и предрасположенностью к СРК у женщин оказался незначительным.

IL-1b. В ходе анализа был показан вклад +3953 SNP IL-1P в предрасположенность к СРК у жен­щин (G = 6,64, df = 2, p = 0,036). Обнаружено, что статистически значимый эффект достигался за счет изменения частоты генотипа T/T (0 % против 9,57 % в контроле, р = 0,013).

TNFa -308 G/A. Еще одной особенностью являлось изменение частот генотипов SNP -308 G/A TNFa у практически здоровых и больных СРК женщин (на уровне тенденции). Группа больных СРК характеризовалась повышенной частотой гетерозиготного генотипа -308G/A (33,9 % против 20,21 %, X2 = 3,57 p = 0,06, OR = 2,02 95 %CI 0,96-4,26) и пониженной частотой гомозиготного генотипа G/G -308 TNFa (64,41 % против 77,66 %, X2 = 3,20p = 0,07, OR = 0,52 95 %CI 0,25-1,08). Однако по крите­рию отношения шансов такое изменение частот не имело прогностического значения для расчета ве­роятности развития предрасположенности к СРК у женщин.

Частоты аллелей и генотипов IL-4, -863 C/A TNFa не различались между исследуемыми группами.

Несмотря на то, что группа мужчин, страдающих СРК, была значительно меньше группы жен­щин, анализ распределения частот встречаемости аллелей и генотипов генов цитокинов у практиче­ски здоровых и больных СРК мужчин позволил выявить различия в частотах встречаемости аллелей и генотипов IL-1Ra и гомозиготного генотипа по редкому аллелю -308 A/A TNFa. У мужчин, стра­дающих СРК, чаще встречался генотип -308 A/A TNFa (9,09 % против 0,84 %, p = 0,064, OR = 11,8 95 % CI 0,99-139,2), несмотря на то, что благодаря такому распределению частот общий эффект оказался значим на уровне тенденции.

Более информативными были различия в распределении частот встречаемости аллелей и гено­типов IL-1Ra. У мужчин, страдающих СРК, снижены частоты аллеля 2R и его гетерозиготного гено­типа 4R/2R по сравнению с контролем. Согласно критерию отношения шансов носительство аллеля с 2-кратным повтором уменьшает вероятность возникновения СРК по сравнению с носительством других аллелей IL-1Ra (OR=0,38 95 % CI 0,15-0,94), но только в гетерозиготном состоянии вместе с аллелем 4R (OR=0,31 95 % CI 0,097-0,97). В свою очередь присутствие аллеля 4R в гомозиготном состоянии повышает вероятность развития СРК у мужчин: для носительства аллеля 4R коэффициент OR составил 2,4 95 % CI 1,012-5,62, для генотипа 4R/4R — OR = 3 95 % CI 1,09-8,27.

Таким образом, выделение групп больных по полу позволило установить маркеры предрасполо­женности к СРК среди исследуемых генов цитокинов отдельно для женщин и мужчин, тогда как при объединении в общую выборку установленные различия нивелировались.

  1. Оценка ассоциации межгенных и внутригенных взаимодействий с предрасположенностью / устойчивостью к СРК проводилась с помощью иерархического логлинейного анализа.

Установлена значимость следующих комбинаций генотипов: протекторными свойствами обла­дали комбинации генотипов SNPs TNFa -308G/G- -863 C/A (11,25 % vs 23,0 % X2 = 4,35, p = 0,0371, OR = 0,57 95 %CI 0,19-0,91), IL-1b+3953 C/C- - 863C/A TNFa (6,25 % vs 16,43 X2 = 4,29, p = 0,0384 OR = 0,34 95 %CI 0,13-0,9). По нашему мнению, ведущее значение в данных комбинациях отводится гетерозиготному генотипу — 863C/A TNFa.

Выводы

  1. Особенность больных СРК европеоидного происхождения — повышенная частота гомозигот­ного генотипа -863С/С генаTNFa.
  2. Установлены маркеры, снижающие вероятность развития СРК: у женщин — гомозиготный генотип Т/Т +3953 IL-1b, у мужчин — аллель 2r и генотип 4r/2r генаIL-1Ra.
  3. Выявлены комбинации генотипов генов цитокинов, обладающие протекторными свойствами при СРК: внутригенная комбинация -308G/G- -863 C/A генаTNFa и межгенная комбинация генов провоспалительных цитокиновIL-1b+3953 C/C — - 863C/ATNFa.

Заключение

В патогенез каждого заболевания вовлекается много разных функционально взаимосвязанных генов той или иной локальной генной сети. Наряду с главными генами, провоцирующими начало бо­лезни, всегда присутствуют другие, второстепенные, в том числе многочисленные гены-модифи­каторы, фенотипические эффекты которых во многом определяются средовыми факторами. К таким генам относятся гены воспаления, в частности гены цитокинов. Их идентификация, выявление харак­тера функциональных поломок на уровне локальных генных сетей, особенностей ген-генных взаимо­действий при мультифакторной патологии являются важными задачами постгеномной информатики и персонализированной медицины. Наше исследование вносит вклад в развитие представлений об иммуногенетической компоненте синдрома раздраженного кишечника. 

 

Список литературы

  1. Бурмистрова А.Л. Иммунный гомеостаз и микросимбиоценоз. Метаморфозы и пути развития воспалительных забо­леваний. — Челябинск: Челябинский Дом печати, 1997. — 216 с.
  2. Ивашкин В. Т., Шептулин А.А. Избранные лекции по гастроэнтерологии. — М.: Медпресс-информ, 2002. — 85 с.
  3. Hotoleanu C., Popp R., Trifa A.P., Nedelcu T., Dumitrascu D.T. Genetic determination of irritable bowel syndrome // World Journal of Gastroenterology. — 2008. — 14, No. 43. — P. 6636-6640.
  4. Родионова О.Н., Бабаева А.Р. Патогенетическая роль сывороточных цитокинов при синдроме раздраженного ки­шечника // Цитокины и воспаление. — 2011. — Т. 10., № 3. — С. 45-48.
  5. Oscar R.-F., Hernandez-Ruiz J., Schmulson M. From cytokines to toll-like receptors and beyond — current knowledge and future research needs in irritable bowel syndrome // Journal of Neurogastroenterology and Motility. — 2010. — 16. — P. 363­373.
  6. Saito Y.A., Talley N.J. Genetics of Irritable bowel syndrome // American Journal of Gastroenterology. — 2008. — 103.2100-2104.
  7. Рыдловская А.В., Симбирцев А.С. Функциональный полиморфизм генаTNFa и патология // Цитокины и воспаление.
  8. — Т. 4, № 3. — С. 4-10.
  9. Шабалдин А.В., Филипенко М.Л., Воронина Е.Н., Глушков А.Н., Симонова Т.А. Полиморфизм генов антагониста ре­цептора инерлейкина-1 и интрерлейкина-4 при репродуктивных нарушениях // Иммунология. — 2005. — № 1. — С. 6-9.
  10. Бурмистрова А.Л., Сташкевич Д.С., Суслова Т.А., Девальд И.В., Исаканова А.О., Димчева О.Н. Молекулярно-генетический анализ полиморфизмов генов цитокинов — интерлейкина-1р, рецептора антагониста интерлейкина-1 и интер-лейкина-4 у больных ревматоидным артритом башкирской этнической группы, проживающих в Челябинской области // Медицинская иммунология. — СПб.: Человек, 2007. — Т. 9, № 6. — С. 631-634.
  11. Carreira P.E., Gonzalez-Crespo M.R., Ciruelo E. et al. Polymorphism of the Interleukin-1 Receptor antagonist gene a factor in susceptibility to rheumatoid arthritis in a Spanish population // Arthritis & — 2005. — Vol. 52. — P. 3015-3019.
  12. Heesen M., Kunz D., Wessiepe M. et al. Rapid genotyping for tumor necrosis factor-a (TNFa) -863C/A promoter polymor­phism that determines TNF-a response // Clinical Chemistry. — 2004. — 50. — P. 226-228.
  13. R., Rolf F.J. Biometry: the principles and practice of statistics in biological research. — N.Y.: Freeman & Co, 1995.
  14. 850

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.