Микробиологическое состояние и ферментативная активность нефтезагрязненных почв

В статье приведены результаты по изучению микробиологического состояния и активности почвенных ферментов в почвах трех месторождений Атырауской области в разной степени загрязненных нефтью. В результате проведенных исследований установлено что в сильнозагрязненной нефтью почве происходит ингибирование активности почвенных ферментов каталазы, инвертазы, целлюлазы, урезы, за исключением дегидрогеназы, и подавляется численность актиномицетов и мицелиальных грибов; более устойчивыми оказались бактериальные культуры микроорганизмов. 

Казахстан на длительную перспективу предусматривает увеличение добычи «черного золота», а это, в свою очередь, ведет к расширению сети трубопроводов, возрастает количество перевозок неф­ти и нефтепродуктов и, как следствие, невозможность полностью исключить вероятность новых ава­рий, разливов нефти и нефтепродуктов. Попадая в почву, углеводороды нефти влияют не только на количество органического вещества, но и на его качественный состав. Количество органического уг­лерода в гумусовом горизонте загрязненного участка возрастает в несколько раз [1].

Действие такого антропогенного фактора, как нефть не может быть однозначным, оно опреде­ленным образом распространяется на всю изучаемую почвенную экосистему [2]. При нефтяном за­грязнении изменяется состав почвенных сообществ и микробиологических популяций, поддержи­вающих гомеостаз в почве. Все процессы в почве, в том числе микробиологические, взаимосвязаны, взаимообусловлены и тесно скоординированы, обеспечивая равновесие экосистем. Основную долю в микробоценозе почв составляют гетеротрофные бактерии, которые могут составлять 99,7 % от обще­го числа микроорганизмов. Количество микроскопических грибов — до 5,9 %, актиномицетов — до 28,2 %, углеводородокисляющих бактерий — не более 0,01 %. Жизнедеятельность микроорганизмов является одним из важнейших факторов образования почвы и ее плодородия, а также способности самоочищения от загрязняющих органических веществ [3]. Попадая в почву, углеводороды нефти оказывают токсическое воздействие на ее микрофлору, замедляют развитие или вызывают гибель. По данным некоторых авторов [4, 5], при нефтяном загрязнении спорообразующие бактерии и актино-мицеты испытывают угнетение, значительно снижается численность целлюлозоразрушающих мик­роорганизмов, нитрификаторов. Загрязнение почв нефтью и продуктами ее переработки приводит к заметному сдвигу в составе биоты и определяется ее концентрацией. Известно [6, 7], что в низких концентрациях нефть оказывает стимулирующее действие на почвенную биоту, так как является энергетическим субстратом для большой группы почвенных микроорганизмов и содержит вещества, стимулирующие их рост и развитие. Например, нефть стимулирует рост некоторых почвенных гри­бов (Paecilomyces, Fusarium), некоторые виды ^luobasidium обнаружены только в почве, насыщен­ной нефтепродуктами [7].

С другой стороны, массивное нефтяное загрязнение почвы, возникающее при аварийных разли­вах, сопровождается острым токсическим действием нефти на живые организмы. Последнее проявля­ется наиболее ярко сразу же после попадания загрязнителя в почву. Микробная система почв при разного рода антропогенных загрязнениях реагирует сходным образом путем изменения состава ак­тивно функционирующих популяций, входящих в сообщество микроорганизмов. Реакция микроорга­низмов зависит от количества и качества загрязнителя [8, 9].

Опасность нефти заключается в том, что она включает почти 3000 ингредиентов, большинство из которых легкоокисляемы. В нефти различного происхождения выделяют легкие, средние и тяже­лые фракции. Большой процент в нефти составляют углеводороды тяжелых фракций (плотностью от 0,86 до 1,05 г/см³). К ним относят ароматические и полиароматические углеводороды, смолистые ве­щества. Тяжелые углероды, вследствие низкой растворимости в воде и высокой температуры кипе­ния, накапливаются в почве и ухудшают водный режим почвы и ее физические свойства. Они резко снижают содержание подвижных соединений азота и фосфора и оказывают токсичное воздействие на рост растений. В результате этого усиливаются эрозия почв и их деградация [10].

Острая токсичность высоких доз нефти (50-300 мл/кг почвы) для микробиоты определяется главным образом наличием в ней летучих ароматических углеводородов (толуола, ксилола, бензола), нафталинов и зависит во многом от свойств ее отдельных фракций. Легкие летучие фракции нефти (бензин, керосин) проявляют биологический эффект сразу же после контакта с клетками микроорга­низмов. Эти соединения сравнительно быстро и легко улетучиваются из почвы или разрушаются. По­этому период острого токсического действия нефти на почвенную биоту является относительно ко­ротким [11]. При загрязнении почвы легкими фракциями нефти гидрофобность почвы практически не изменяется.

Эффект тяжелых компонентов нефти проявляется позже, при котором значительно увеличивает­ся гидрофобность почвы. Подавляющая часть внесенной нефти оказалась сосредоточенной в самом верхнем слое почвы. Подобный характер распространения поступившей нефти в почве связан с ее механической задержкой в верхней части профиля в результате большой вязкости нефти и запечаты­вания пор почвенных агрегатов, что также приводит к потере способности почвы впитывать и удер­живать влагу. В процессе загрязнения почвенного покрова нефтью происходят адсорбция его токси­ческих и канцерогенных углеводородов, склеивание структурных отдельностей, нарушается аэрация, снижается скорость транспирации влаги через вышележащий слой загрязненной нефтью почвы, соз­даются анаэробные условия [10].

Все эти изменения отрицательно сказываются на жизнедеятельности почвенных микроорганизмов, приводя к изменению естественных колебаний численности микроорганизмов. Кроме того, повышение количества органического вещества загрязненного участка также неблагоприятно влияет на микроорга­низмы почвы из-за токсичности углеводородов, но после преобразования нефтепродуктов в процессе выветривания может стать важным фактором, способствующим восстановлению плодородия почвы. При исследовании влияния антропогенных загрязнений на плодородие почвы показатели её биологиче­ской активности входят в состав мероприятий по охране окружающей среды во многих странах [11]. Начиная с 80-х годов прошлого столетия ведется поиск универсальных коэффициентов определения плодородия почв по ферментативной активности почвы. Было предложено множество тестов [12, 13], наиболее интересными из которых, на наш взгляд, являются тесты, основанные на определении актив­ностей ферментов полифенолоксидазы и пероксидазы, уреазы и инвертазы, дегидрогеназы и кислой и щелочной фосфатазы. В связи с этим целью данного исследования являлось изучение влияния нефтя­ного загрязнения на численность групп почвенных микроорганизмов и биологическую активность почв месторождений Жанаталап, Терен-Узек и С.Балгимбаев Атырауской области.

Объекты и методы исследования

Объектами исследований являлись почва месторождений С.Балгимбаев, Жанаталап и Терен-Узек Атырауской области, загрязненная в разной степени нефтью, и физиологические группы поч­венных микроорганизмов, в том числе и углеводородокисляющие микроорганизмы.

Для определения современного состояния почвы были отобраны образцы. Отбор проб почвы для микробиологического анализа, определения численности почвенных микроорганизмов проводили общепринятыми в микробиологии методами [14].

Содержание нефти определено гравиметрическим методом [15].

Активность почвенных ферментов (каталазы, инвертазы, дегидрогеназы, целлюлазы и уреазы) определяли методами, предложенными в [16].

Математическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета прикладных про­грамм Excel на персональном компьютере «Pentium-IV».

Результаты исследований и их обсуждение

На месторождениях Атырауской области распространены солончаки. Здесь встречаются солон­чаки приморские, луговые, соровые. В солончаках отмечается высокое засоление всего профиля. Со­лончаки приморские и соровые в большинстве относятся к типу хлоридно-натриевых и сульфатно-хлоридных, солончаки луговые — к хлоридно-сульфатному типу засоления. Помимо этого, в техно-генно-нарушенных почвах наблюдаются высокая степень распыления пылевато-иловатого состава гумусового горизонта почв и возрастание степени карбонатности. На сильно нарушенных участках обнажается карбонатно-иллювиальный горизонт, образуются такыровидные и такырные поверхно­сти, усиливаются процессы засоления. Установлено, что на объектах нефтедобычи АО «Эмбамунай-газ», «Тенгизмунайгаз», «Жаикнефть» нарушения обнаружены на 9023 га из обследованных 58 711,4 га земель. По видам нарушений наибольший удельный вес (68 %) приходится на нарушение почвенного покрова, 14 % территории замазучено и загрязнено нефтью и 3 % занято водой [17]. До­бываемая на месторождениях нефть по химическому составу относится в основном к типу нафтено-парафиновых, с повышенным содержанием смол, асфальтенов и сероводорода, характеризуется не­высокой вязкостью. Высокое содержание селикагелевых смол и парафинов является главным факто­ром формирования в профиле почвы битумных кор. Они мало подвижны и поэтому создают очаги устойчивого загрязнения окружающей среды.

Загрязнение почв нефтью приводит к изменениям, которые создают крайне неблагоприятные эдафические условия для жизнедеятельности почвенных микроорганизмов, нарушается режим их азотного и фосфорного питания, интенсивность окислительно-восстановительных и ферментативных процессов. Изменение экологических параметров при нефтяном загрязнении влияет на численность и физиологическое состояние почвенных микроорганизмов и тем самым непосредственно и косвенно определяет поступление ферментов в почву. Способность почвы осуществлять процессы детоксика-ции и минерализации углеводородов нефти находится в зависимости от времени контактирования с ними и степени загрязнения. Чем выше степень загрязнения, тем ниже активность ферментов и тем меньше «активный» слой почвы [18].

Проведенный ферментный анализ почв месторождений Атырауской области ex situ с различной степенью загрязнения нефтью показал, что активность почвенных ферментов ингибируется, за ис­ключением дегидрогеназы (табл. 1). Показатели биологической активности сравнивали с контроль­ным вариантом без загрязнения.

Проведенный гравиметрический анализ содержания нефтепродуктов в почвах месторождений показал, что наибольшее содержание нефти отмечено в почве месторождения Терен-Узек — 34155 мг/кг почвы, наименьшее — в почве месторождения Жанаталап — 5451 мг/кг почвы. Если сравнить содержание нефти в почве месторождений, то к наиболее загрязненным можно отнести почвы месторождения Терен-Узек. По литературным данным [19] содержание нефти в почве до 1500 мг/кг позволяет отнести их к незагрязненным, от 1000 до 5000 мг/кг — к слабозагрязненным, от 5000 до 13000 мг/кг — к средне-, от 13000 мг/кг и выше — к сильно загрязненным нефтью.

При загрязнении почвы нефтью активность инвертазы резко снижается — в 2-5 раз по сравне­нию с контролем, тогда как активность дегидрогеназы находится в прямой зависимости от дозы неф­ти. С увеличением нефти в почве увеличивается и показатель активности дегидрогеназы — по срав­нению с контролем активность дегидрогеназы увеличивается в 2,7-3,0 раза.

Отмечается снижение активности каталазы с увеличением концентрации нефти в почве в 1,2-1,6 раза по сравнению с контролем. Это подтверждается и данными Киреевой [18], хотя имеются и про­тивоположные мнения [1]. По-видимому, снижение или увеличение активности каталазы зависит от компонентного состава нефти, наличия в ней токсичных компонентов и возможности кислорода по­ступать в загрязненную почву.

Изучение активности целлюлазы показало, что биодеструкция целлюлозы в загрязненных нефтью почвах резко падает, в зависимости от степени загрязнения. Так, в сильнозагрязненных почвах место­рождений наблюдалось снижение активности целлюлазы по сравнению с контролем в 15-27 раз.

Активность уреазы также снижается в нефтезагрязненных почвах. Так, высокое содержание нефти в почве ингибирует ее активность в 4-7 раз по сравнению с незагрязненной почвой.

Нефтяное загрязнение снижает активность целлюлазы [20, 21] и в значительно меньшей степени каталазы и уреазы, что находит подтверждение в литературе [22, 23]. Изменение показателей актив­ности почвенных ферментов, таких как инвертаза, уреаза и целлюлаза, можно использовать в качест­ве теста при изучении степени загрязнения почв нефтью.

В районах нефтегазовых месторождений даже слабое загрязнение углеводородами приводит к снижению количества микроорганизмов, которые играют основную роль в процессе самоочищения почвы от загрязнения. Поступление нефти и нефтепродуктов в почву вызывает экологическую сукце-сию-репрессию функциональной активности флоры и фауны, приводит в движение все компоненты микробного сообщества, находящегося в состоянии гомеостаза: изменяются структура почвенного микробиоценоза, характер трофических связей, активность биоценоза, направленность и скорость биохимических реакций. Действие нефти на живые организмы почвы в значительной степени опре­деляется ее концентрацией. Известно, что в низких концентрациях нефть оказывает стимулирующее действие на почвенную биоту, так как является энергетическим субстратом для большой группы микроорганизмов и содержит вещества, стимулирующие их рост и развитие [1, 3].

С другой стороны, массивное нефтяное загрязнение почвы, возникающее при аварийных разли­вах, сопровождается острым токсическим действием нефти на живые организмы, которое проявляет­ся наиболее ярко сразу же после попадания загрязнителя в почву [4].

С целью получения сведений о численности основных групп микроорганизмов для оценки состояния почв в районах нефтедобычи Атырауской области нами были проанализированы отобранные пробы почв с разной степенью загрязнения. Микробиологический анализ загрязненных нефтью почв месторождения С.Балгимбаев Атырауской области показал снижение численности микроорганизмов (табл. 2).

Так, общая численность микроорганизмов в образцах сильнозагрязненных почв на 2 порядка, среднезагрязненных почв на 1 порядок ниже значений численности микроорганизмов контрольного образца почвы. Количество клеток микроорганизмов при этом в образцах сильнозагрязненных почв составило 2,04х10⁵ КОЕ/г почвы, в образцах среднезагрязненных почв — 1,92х10⁴ КОЕ/г почвы про­тив 6,53х10⁶ КОЕ/г почвы в контроле.

Результаты микробиологического анализа почв месторождения С.Балгимбаев показали, что в за­грязненных нефтью почвах довольно значительную часть комплекса почвенных микроорганизмов составляют спорообразующие бактерии. На долю спорообразующих бактерий в контрольных (неза­грязненных) образцах почв приходится 1,3 % от общего числа микроорганизмов. В образцах почв, в различной степени загрязненных нефтью, это значение составляет 11,7 и 4,21 % соответственно. Присутствие спорообразующих бактерий в неблагоприятных условиях обитания связано с их способ­ностью переходить в форму спор, в виде которых они переживают любое стрессовое воздействие и которые позволяют давать вспышку роста при улучшении условий обитания [11].

Как известно, в микробиоценозах ведущая роль в разрушении нефти принадлежит углеводо-родокисляющим микроорганизмам, основным экологически важным свойством которых является их способность усваивать углеводороды нефти и нефтепродуктов. Углеводородокисляющие микроорга­низмы широко распространены в природе в различных биоценозах и играют важную роль в экоси­стемах. Поэтому при микробиологическом изучении нефтезагрязненной почвы на фоне численности всей микрофлоры особое внимание уделялось этой группе микроорганизмов.

По данным некоторых авторов [24], численность углеводородокисляющих бактерий в загряз­ненных почвах на несколько порядков превышает значения контрольных почв. Данные, полученные нами, показывают обратное. Численность углеводородокисляющих микроорганизмов в фоновом об­разце почвы 1,20х10⁶, что составляет 18,4 % от общего числа микроорганизмов. Численность углево-дородокисляющих бактерий в среднезагрязненных почвах ниже значений контрольных образцов почв на 1 порядок, их доля составляет 7,5 %, а в сильнозагрязненных почвах — на 3 порядка, и на их долю приходится 49,5 % от общего числа микроорганизмов. Это еще раз свидетельствует о том, что почва испытывает неблагоприятные антропогенные воздействия. Общеизвестно, что количество уг-леводородокисляющих микроорганизмов, а также их активность в определенной мере отражают ин­тенсивность процессов окисления нефти. Следовательно, в данном случае низкая численность этой группы микроорганизмов в загрязненных почвах из-за нарушения физико-химических условий среды и высокого содержания нефти — 29675 мг/кг почвы приводит к снижению интенсивности процессов окисления нефти в почве. Кроме того, наиболее важными условиями активной деятельности микро­флоры в присутствии нефтяных загрязнений также являются влажность и температура почвы [25], а в аридных почвах Атырауской области и всего Казахстана лимитирующим деятельность микроорга­низмов фактором выступает недостаток влаги в почве.

Велика роль актиномицетов и микромицетов в деструкции нефти. По данным авторов [18, 26], численность микромицетов при нефтяном загрязнении повышается, что указывает на их устойчи­вость и огромную роль в начальных этапах трансформации нефти [27, 28]. Среди мицелиальных гри­бов наиболее устойчивыми являются Penicillum и Aspergillus, а среди актиномицетов высокой дест­руктивной активностью по отношению к нефти и нефтепродуктам обладают стрептомицеты [29]. Од­нако изучение численности почвенных грибов показало, что в образцах среднезагрязненных нефтью почв обнаружено 1,11х10² КОЕ/г почвы, а актиномицетов — 1,18х10² КОЕ/г почвы, тогда как в об­разцах сильнозагрязненных нефтью почв обе группы микроорганизмов встречаются единично, что указывает на высокую чувствительность актиномицетов и мицелиальных грибов к нефтяному загряз­нению.

Кроме того, следует отметить, что в загрязненных нефтью образцах почв снижено видовое раз­нообразие микроорганизмов. На питательных средах в чашках Петри вырастают преимущественно однотипные по морфологии колонии микроорганизмов. На месторождении Жанаталап при проведе­нии микробиологического анализа нами отмечена такая же картина, как на месторождении С.Балгимбаев. Результаты анализа представлены в таблице 3.

Как показали результаты исследований, для незагрязненной почвы характерна высокая общая численность микроорганизмов (общий титр КОЕ в почве, 10⁵).

В среднезагрязненных почвах отмечается снижение углеводородокисляющих микроорганизмов на два порядка по сравнению с контролем и на один порядок — численность актиномицетов. Числен­ность спорообразующих и мицелиальных грибов при сравнении с контролем практически не изменя­ется и составляет 1,55х10⁴ и 0,83х10³ КОЕ/г почвы соответственно.

В сильнозагрязненных почвах на два порядка снижается численность спорообразующих, чис­ленность же углеводородокисляющих несколько выше по сравнению с среднезагрязненными почва­ми, тогда как численность актиномицетов и мицелиальных грибов единична.

При высеве на чашках Петри отмечается преобладание бактерий, образующих мелкие пигмен­тированные колонии.

При исследовании проб почвы с месторождения Терен-Узек нами отмечено снижение на поря­док общей микробной численности в среднезагрязненных и на два порядка — в сильнозагрязненных нефтью почвах. Значительную часть в комплексе почвенных микроорганизмов сильнозагрязненных почв составляют спорообразующие бактерии — 6,9 % от общей численности микроорганизмов. Од­нако с увеличением степени загрязнения почвы нефтью отмечается снижение их численности на один и два порядка по сравнению с контролем (табл. 4).

Численность углеводородокисляющих микроорганизмов в среднезагрязненных нефтью почвах составила всего 1-2 клетки, тогда как в сильнозагрязненных нефтью почвах они не были обнаруже­ны. Вероятно, это связано с качественным составом нефти (высокое содержание селикагелевых смол и асфальтенов), нарушением водно-воздушного режима почвы, высокой засоленностью почв и близ­ким залеганием грунтовых вод.

Данные таблицы 4 показывают сильное угнетение почвенной микрофлоры месторождения Те-рен-Узек. Отмечена элиминация таких физиологических групп микроорганизмов, как актиномицеты и мицелиальные грибы.

Различная устойчивость компонентов микробного сообщества почвы к антропогенному прес­сингу приводит к выпадению наиболее чувствительных звеньев, нарушению естественного равнове­сия между отдельными группами микрофлоры. В свою очередь это меняет интенсивность отдельных стадий процессов круговорота биогенных элементов и ведет к деградации почв, минерализации гу­муса, нарушению экологических функций почвы. По данным Д.Г.Звягинцева и др. [30], такое состоя­ние почвы соответствует высокому уровню загрязнения почв нефтью. Снижение численности, видо­вого разнообразия и активности почвенных микроорганизмов может стать причиной увеличения сро­ка естественного очищения почвы от нефтяного загрязнения и восстановления ее плодородия.

Таким образом, проведенные исследования ex situ показали, что содержание нефти свыше 27 994 мг/кг почвы резко угнетает активность ферментов азотного и углеродного цикла в почве, и это в дальнейшем негативно скажется на её плодородии. Наиболее чувствительными к загрязнению поч­вы нефтью оказались инвертаза, уреаза и целлюлаза. Также сильно нарушен микробный баланс поч­вы нефтедобывающего региона Атырауской области, а микробоценоз почвы находится в угнетенном состоянии, снижено видовое разнообразие микроорганизмов. Показатели микробиологической оцен­ки антропогенно нарушенных почв можно применять в индикации загрязнения их поллютантами. Так, повышенной чувствительностью к нефтяному загрязнению обладают актиномицеты и мицели-альные грибы, так как высокие концентрации нефти оказывают на них подавляющее воздействие. Более устойчивыми являются бактериальные культуры микроорганизмов, участвующие в процессах окислительной трансформации нефтяных углеводородов в почве. 

Список литературы

1. Исмаилов Н.М. Нефтяное загрязнение и биологическая активность почвы // Добыча полезных ископаемых и геохи­мия природных экосистем. — М.: Наука, 1992. — С. 227-235.
2. Оборин А.А., Калачникова И.Г. и др. Нефтяное загрязнение почв и способы рекультивации // Влияние промышлен­ных предприятий на окружающую среду. — Пущино, 1987. — С. 284-287.
3. Ильин Н.П., Калачникова И.Г. и др. Наблюдение за самоочищением почв от нефти в Средней и Южной тайге // До­быча полезных ископаемых и геохимия природных экосистем. — М.: Наука, 1992. — С. 245-258.
4. Оборин А.А., Колесникова Н.М. и др. Трансформация нефтяных углеводородов почв, загрязненных нефтью // Влия­ние промышленных предприятий на окружающую среду. — Пущино, 1987. — С. 139-1
5. Колесникова Н.М., Плещева О.В. Микробоценоз почвы в условиях нефтяного загрязнения // Микробиологические методы защиты окружающей среды (5-7 апреля, 1988, Пущино): Тезисы докл. — Пущино, 1988. — С. 144-145.
6. Гузев В.С., Левин С.В. и др. Роль почвенной микробиоты в рекультивации нефтезагрязненных почв // Микроорганиз­мы и охрана почв. — М.: Наука, 1989. — С. 129-150.
7. БабьеваИ.П., Зенова Г.М. Биология почв. — М.: Изд-во МГУ, 1983. — 248 с.
8. Звягинцев Д.Г., Голимбет В.Е. Биомасса микроорганизмов в почве и их активность // Сельскохозяйственная биоло­гия. — Пущино, 1983. — № 12. — С. 112-116.
9. ЗвягинцевД.Г. Почва и микроорганизмы. — М.: Изд-во МГУ, 1987. — 256 с.
10. Методы контроля качества почвы / Под. ред. А.П.Воронина. — Воронеж, 2007. — 106 с.
11. Устинов М.Т., Казанцев В.А. и др. Мониторинг территорий нефтегазовых промыслов методом почвотестирования // Исследования эколого-географических проблем природопользования для обеспечения территориальной организации и ус­тойчивости развития нефтегазовых регионов России: Теория, методы и практика. — Нижневартовск, 2000. — С. 197-199.
12. АбрамянA.Изменение ферментативной активности почвы под воздействием естественных и антропогенных фак­торов // Почвоведение. — 1992. — № 7. — С. 70-82.
13. Шемелина Т.Н., Новоселова Е.И. и др. Диагностирование степени загрязненности почв нефтью по показателям фер­ментативной активности // Вестник Оренбургского гос. ун-та. — 2007. — № 75. — Окт. — С. 432-434.
14. Практикум по микробиологии // Под ред. Н.С.Егорова. — М.: Изд-во Моск. ун-та, 1976. — 307 с.
15. БогомоловА.И. Современные методы исследования нефтей. — Л.: Недра, 1984. — 431 с.
16. Звягинцев Д.Г. Методы почвенной микробиологии и биохимии. — М.: Изд-во МГУ, 1991. — 231 с.
17. Гилажов Е.Г., Диаров М.Д., Муликов Р.Р. Экология и нефтегазовый комплекс. — Алматы: Ғылым, — Т. 4 —832 с.
18. Киреева Н.А., Галимзянова Н.Ф. Влияние загрязнения почв нефтью и нефтепродуктами на численность и видовой состав микромицетов // Почвоведение. — 1995 — № 3-4. — С. 20-27.
19. Давыдова С.Л., Тагасов В.И. Нефть и нефтепродукты в окружающей среде. — М.: Изд-во РУДН, 2004. — 163 с.
20. Хазиев Ф.Х., Фатхиев Ф. Ф. Изменение биохимических процессов в почвах при нефтяном загрязнении и активация разложения нефти // Агрохимия. — 1988. — № 2. — С. 56-61.
21. Абрамян С.А. Изменение ферментативной активности почвы под воздействием естественных и антропогенных фак­торов // Почвоведение. — 1992. — № 7. — С. 70-82.
22. Кочетков И.А., Лазарева И.О. Влияние некоторых загрязнителей на показатели биологической активности почв // Вопросы экологии и охраны природы в лесостепной и степной зонах: Сб. науч. тр. — Самара: Изд-во СГУ, 1999. — С. 160­
23. Рахимова Э.Р., Гарусов А.В., Зарипова С.К. Биологическая активность нефтезагрязненной почвы при засолении // Почвоведение. — 2005. — № 4. — С. 481-485.
24. Краснопевцева Н.В., Крашенинникова Т.К. и др. Разработка технологий получения биодеградантов нефти для очист­ки мест добычи и переработки // Экология 2002: эстафета поколений: Материалы II Путинской междунар. школы-семинара по экологии, 23-26 апреля 2002 г. — Пущино, 2002. — С. 50-51.
25. Капотина Л.Н., Морщакова Г.Н. Биологическая деструкция нефти и нефтепродуктов, загрязняющих почву и воду // Биотехнология. — 1998. — № 1. — С. 85-92.
26. Киреева Н.А. Микроскопические грибы-биодеструкторы нефтяных углеводородов в почве // Ботанические исследо­вания на Урале. Информационные материалы. — Свердловск, 1990. — С. 41.
27. Кузнецов В.Д., Зайцева Т.А. и др.Streptomyces albiaxialis sp. nov. — новый вид термо- и голотолерантного стрептоми-цета, разлагающего углеводороды нефти // Микробиология. — 1984. — Т. 53. — № — С. 116-121.
28. Заборина О.Е., Барышникова Л.М. и др. Разложение пентахлорфенола в почве интродуцированным штаммом Streptomyces rochei303 и активированной почвенной микрофлорой // Микробиология. — 1997. — Т. 66. — № 5. — С. 661­
29. Rhykerd R.L., Weaver R.W., Mclnnes K.J. Influence of salinity on bioremediation of oil in soil // Environ. Pollut. — 1995. — 90. — № 1. — P. 127-130.
30. Звягинцев Д.Г., Гузев В.С. и др. Диагностические признаки различных уровней загрязнения почв нефтью // Почвове­дение. — 1989. — № 1. — С. 72-78.