Устойчивость BACILLUS к физическим и химическим факторам

Аэробные спорообразующие микроорганизмы составляют обширную группу, они широко распространенены в природе и играют большую роль в различных биологических процессах. Среди этой группы бактерий сибиреязвенные бациллы являются патогеным для человека и животных. Благодаря способности образовывать споры, обладающие большой устойчивостью к внешним воздействиям, возбудитель сибирской язвы остается жизнеспособным при самых неблагоприятных условиях. Устойчивость споробразующих микроорганизмов к высокой температуре и химическим веществам исследовалась многими авторами [1,2,3]. При этом отмечено, что устойчивость к температурному фактору и химическим десредствам колеблется в широких пределах не только среди различных видов микроорганизмов, но и среди разных штаммов одного вида. Поэтому, для исследования бактерицидных и спорицидных свойств дезинфектантов, а также методов обеззараживания существенное значение имеет подбор соответствующих микроорганизмов, по отношению к которым проводится дезинфекция.

В связи с этим, в задачи наших исследований входило определение устойчивости ряда сапрофитных  споробразующих  микроорганизмов и  вакцинных штаммов сибирской язвы с целью подбора тест-культуры для первичной оценки спорицидности дезинфицирующих препаратов.

Материалы и методы. Исследования проводили в лаборатории противовирозной биотехнологии кафедры эпизоотологии и организации ветеринарного дела КазНАУ и на базе в научно-производственном предприятии «Антиген». В качестве тест-микроор- ганизмов в опытах были использованы следующие споровые культуры: Bac. рseudoanthracis (№16-2), Bac. cereus (№96-4), Bac. anthracoides (№212), Bac.  anthracoides (№ 96) и вакцинные штаммы сибирской язвы СТИ-1 и ВНИИВВ и М – 55. Для получения споровой культуры бацилл, суточную культуру высевали на пшеничный или картофельный агар. Посевы выдерживали в термостате при температуре 37 0 С в течение 2-3 суток и не менее 7-10 суток при комнатной температуре в темноте. Спорообразование контролировали микроскопией мазков, окрашеных по Пешкову. После установления в популяции испытуемого микроорганизма не менее 90-95 % споровых клеток, готовили смыв агаровой культуры на стерильном физиологическом растворе, осаждали центрифугированием при 1200 об/мин в течение 20 минут. Затем дважды отмывали в стерильном физиологическом растворе (с последующим центрифугированием при 1200 об/мин – 20 минут) и хранили при температуре 4 0 С. Содержание жизнеспособных спор  в 1 см3 суспензии определяли приготовлением восьми последовательных десятикратных разведеий, затем производили высевы на чашки Петри с МПА и через 24 часа подсчитывали количество выросших колоний. В опытах (in vitro) использовали 2 млрд споровую взвесь. Контролем служили споровые культуры испытуемого штамма.

Первым этапом работы было испытание устойчивых споровых культур микроорганизмов к температурному фактору. Так как этот показатель является основным критерием при оценке пригодности спорообразующих культур для изучения спорицидной активности новых дезинфицирующих препаратов.

Резистентность спор к высокой температуре (1000С) проверяли в терморегулируемой водяной бане путем прогревания 2 млрд суспензии, разлитой по 20-25 см3 в стерильные колбы. Отсчет экспозиции начинали с момента достижения 1000С в контрольной колбе с термометром. Пароустойчивость (98-990С) спор определяли методом обеззараживания бязевых тест-объектов (5х10), инфицированных 2 млрд суспензиями спор, в аппарате Ойль-Мюллера. Опыты проводили в сооветствии с «Методическими указаниями о порядке первичной апробации новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики».

Устойчивость микроорганизмов к действию дезинфицирующих средств проверяли в опытах на бязевых тест-объектах в соответствии с «Инструкцией по определению бактерицидных и спорицидных свойств новых дезинфицирующих средств». Всего было исследовано 1480 проб. Результаты исследований отработаны статически по методике Н.В.Садовского [4].

Результаты исследований и обсуждение. Результаты по устойчивости споробра- зующих микроорганизмов к высокой температуре  представлены в таблице 1.

Как видно из данных таблицы 1, устойчивость культур вакцинных штаммов сибирской язвы и сапрофитных спорообразующих микроорганизмов Bacillus к высокой температуре (100 0 С) колеблется в широких пределах, а именно сапрофитные культуры от 143±23,7 до 283±73,5, вакцинные штаммы от 91±2,5 до 98±0,5 минут. При этом из сапрофитных культур наибольшей устойчивостью к высокой температуре обладают Bac. anthracoides (№96) и  Bac. cereus (№96-4).

Таблица 1. Результаты  опытов  по     оценке  устойчивости  споровой культуры  к высокой температуре

  Результаты  опытов  по     оценке  устойчивости  споровой культуры  к высокой температуре

Примечание: - обеззаражено; + рост исходной культуры.

Следующим этапом работы было изучение устойчивости споробразующих культур к текучему пару (98-99 0 С) воздействия. Результаты опытов приведены в таблице 2. 

Таблица 2. Результаты оценки устойчивости микроорганизмов к действию текучего   пара (98-990С)

 Результаты оценки устойчивости микроорганизмов к действию текучего   пара (98-990С)

Из данных таблицы 2 видно, что устойчивость сапрофитных спорообразующих микроорганизмов и воздействию текучего пара (Т 98-99 0С) различны. Из всех испытанных споровых культур наибольшей параустойчивостью обладали споры Bac. anthracoides (№96) и Bac. cereus (№96-4) - 7,9 ± 0,2 и 6,5 ± 0,1 соответственно; сибиреязвенный вакцинный штамм СТИ-1 был устойчив в течение 2,7 ± 0,2 минут, а штамм ВНИИВВиМ -55 в течение 3,2 ± 0,1 минут.

Таким образом, подводя итог сравнительной оценки термоустойчивости споровых форм различных сапрофитных микроорганизмов и вакцинных штаммов сибирской язвы, необходимо отметить, что при всех равных условиях проведения экспериментов у различных штаммов микроорганизмов термоустойчивость колеблется в значительных пределах. При этом установлено, что сибиреязвенные вакцинные штаммы по термоустойчивости уступают споровым формам  сапрофитных  штаммов микроорганизмов. В опытах по сравнительному изучению устойчивости  споровых культур к дезинфицирующим препаратам были испытаны 10%-ный раствор хлорамина (содержащий 2,5%ДВ) и 5%-ный раствор формальдегида, ранее рекомендованные для дезинфекции при сибирской язве. Температура растворов 20-300С, в качестве нейтрализаторов использовали растворы гипосульфита Na и аммиака. Результаты исследования устойчивости спор микроорганизмов представлены в таблице 3.

Таблица 3. Оценки устойчивости споровых культур микроорганизмов к химическим средствам (М±m)

Оценки устойчивости споровых культур микроорганизмов к химическим средствам (М±m)

Из данных таблицы 3 видно, что устойчивость культур различных штаммов к дезинфицирующим средствам колеблется в широких пределах. Наивысшую устойчивость из всех исследованных микроорганизмов проявили Bac. anthracoides (№ 96) и Bac. cereus (№ 96-4). Споры Bac. anthracoides (№ 96) устойчивы к 5 % раствору формальдегида в течение 85,3±6,1 минут, к 10 % раствору хлорамина в течение 8,4±0,2 часов, а споры Bac. cereus (№ 96-4) устойчивы к 5 % раствору формальдегида  в течение 79,5±3,6  минут, к  10 % раствору хлорамина в течение 7,2±0,3 часов соответственно. Споры СТИ-1 устойчивы к к 5 % раствору формальдегида в течение 48,2±3,8 минут, к 10 % раствору хлорамина в течение 4,6±0,2 часов, а споры ВНИИВВиМ – 55 к 5 % раствору формальдегида в течение 55,3±0,7 минут, к 10 % раствору хлорамина в течение 5,8±0,2 часов.

Результаты сравнительного исследования устойчивости споровых форм микроорганизмов к химическим дезинфицирующим средствам показали, что все испытанные вакцинные штаммы сибирской язвы значительно уступают сапрофитным спорообразующим штаммам.

Таким образом, проведенные исследования позволили установить у отдельных споровых форм микроорганизмов корреляцию свойств, так как Bac. anthracoides (№ 96) и Bac. cereus (№ 96-4) обладают высокой устойчивостью как температурному фактору, так и действию дезинфицирующих средств. Указанные штаммы сапрофитных спорообразующих микроорганизмов могут быть использованы, как тест-культуры при изучении спорицидной активности новых дезинфицирующих препаратов.

Выводы:

  1. Bac. anthracoides (№ 96) и Bac. cereus (№ 96-4) обладают устойчивостью к высокой температуре (100 0 С) в течение 283 ( ± 73,5) и 257 ( ± 48,1) минут, а к текучему пару (98- 99 0 С) в течение 7,9 (± 0,2) и 6,5 (± 0,1) соответственно.
  2. Bac. anthracoides (№ 96) и Bac. cereus (№ 96-4) обладают устойчивостью к 5 % раствору формальдегида в течение 85,3 ( ± 6,1) и 79,5 (± 3,6) минут, а 10 % раствору хлорамина 8,4 ( ± 0,2) и 7,2 ( ± 0,3) соответственно.

 

 Литература

  1. Апарцев В.И., Вилькович В.А., Никифирова Е.Н. Определение пароустойчивости вегетативных микроорганизмов. Проблемы дезинфекции и стерилизации. Сб. Науч.тр. 1978, с, 168
  2. Мельникова Г.Н. и др. Сравнительная устойчивость бактериальных спор к действию стерилизующих агентов. Проблемы дезинфекции и стерилизации. Сб. Науч.тр. 1999, с.
  3. Curran R. – Resistanaucian Bacterial Spores. London. 1989
  4. Садовский Н.В. Константные методы математической обработки количественных показателей. М. 1975 с.42-46.
Фамилия автора: Омарбекова У.Ж. 
Год: 2011
Город: Алматы
Яндекс.Метрика