Диагностическая ценность различных иммунологических тестов при бруцеллезе животных

В статье дана сравнительная оценка диагностической ценности серологических реакций при бруцеллезе животных. Были исследованы две группы животных: крупный рогатый скот и овцы. В результате исследований выяснено, что ИФА более ценный диагностический метод в сравнении с РА и РСК.

Введение

Бруцеллез–хроническая инфекционная болезнь, протекающая часто  с обострениями и выраженными клиническими признаками, проявляющимися в виде абортов, задержания последов, эндометритов, орхитов, эпидидимитов, расстройств воспроизводительной способности животных, поражения опорно-двигательного аппарата[1].

Бруцеллезом болеют животные всех видов. Резервуаром  и  переносчиком возбудителя бруцеллеза могут быть многие представители дикой фауны. Благодаря этому бруцеллез получил широкое распространение.

Ликвидация бруцеллеза представляет собой мировую проблему для  медицинского и ветеринарного здравоохранения. В борьбе с бруцеллезом большое значение имеет диагностика, в частности иммунологические методы.

Для проведения массовых профилактических и диагностических обследований скота на бруцеллез широко используют РА, РСК и РДСК. Кроме этих реакций, применяют пластинчатую РА с роз-бенгал-антигеном (роз бенгал проба — РБП) и  кольцевую реакцию (КР) с молоком коров.

На ранних стадиях бруцеллезного процесса наиболее чувствительна РА. Агглютинины в сыворотке крови больных животных в низких титрах можно выявить уже с 10—15-го дня, а затем в течение 1—3 мес после инфицирования. В более поздние сроки диагностическая ценность РА снижается [2].

Однако показатели РА весьма нестабильны, особенно в период беременности, а также могут не выявлять до 45% зараженных животных [3].

РСК и РДСК по времени выявления зараженных животных несколько отстают от показаний РА у крупного рогатого скота, но являются более ценными и чувствительными при диагностике бруцеллеза у овец. Обе реакции стабильны, специфичны и существенно дополняют показания РА [2].

В последнее время для диагностики бруцеллеза стали также широко применять иммуноферментный анализ, который к настоящему времени прошел путь от новейшей научной разработки до рутинного метода в клинической диагностике. С его помощью можно проводить как массовое обследование стад, так и  поставить окончательный диагноз у конкретного животного.

Главные преимущества ИФА перед традиционными иммунологическими тестами: высокая чувствительность, специфичность, возможность получения количественных данных, воспроизводимость, стандартизация основных ингредиентов анализа, возможность исследования сильно загрязненных образцов, биологических жидкостей и экстрактов, возможность автоматизации всех этапов постановки и учета реакции [4].

Вышеперечисленные преимущества определили широкое применение ИФА во всех областях лабораторной диагностики, и в настоящее время, согласно стандартам МЭБ (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals, 2004), ИФА, наряду с традиционными методами, является узаконенным методом диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота [5].

ИФА является более чувствительным методом в сравнении с РА и РСК, а также выявляет антитела в более ранние сроки [3].

Материалы и методы исследований

Нами была изучена иммунологическая активность различных клеточных структур (капсула, клеточная стенка, дезинтеграт, цитоплазма) бруцелл и целых клеток в РСК и ИФА. В результате исследований было выяснено, что активность дезинтеграта выше по сравнению с другими антигенами.

В крестьянском хозяйстве «Арай» Карасайского района Алматинской области были взяты пробы крови крупного рогатого скота (35 голов) и овец (43 головы). Их исследовали в РА, РСК и ИФА со стандартными и полученными нами антигенами.

Для получения антигенов были использованы бруцеллы вида abortus штамма 19, выращенные на эририт агаре, смытые физиологическим раствором натрия хлорида.

При получении цельных клеток бактериальную массу подвергли встряхиванию на шуттель-аппарате в течение 3-х ч с последующим центрифугированием при 5 000 об./мин в течение 1 ч для отделения капсульного вещества. Осадок (цельные клетки) ресуспендировали в физиологическом растворе натрия хлорида и использовали в качестве антигена для постановки РА.

Часть полученного осадка дезинтегрировали посредством ультразвука. Дезинтеграт очистили от неразрушенных клеток центрифугированием при 6 000 об./мин в течение 1 ч, вследствие чего последние выпали в осадок. Полученный дезинтеграт использовали в качестве антигена для постановки РСК и ИФА.

Результаты исследований

В РА стандартный и опытный антигены, по существу, являются аналогами, т. е. взвесью цельных бруцелльных клеток. При исследовании сыворотки крови животных этот антиген выявил 9 положительно реагирующих животных.

При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота в РСК  со стандартным антигеном было получено 12 положительных и 1 сомнительный результат, а с антигеном из дезинтеграта 25 положительных и 7 сомнительных. Следовательно в РСК антиген из дезинтеграта проявляет большую активность, чем антиген из цельных клеток.

При исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота с помощью ИФА было  выявлено  вдвое  большее  количество   положительно  реагирующих   животных   в сравнении с РСК со стандартным антигеном, в то время как РСК с антигеном из дезинтеграта дала весьма схожие с ИФА результаты.

ИФА со стандартным антигеном дал два сомнительных результата. Антиген из дезинтеграта позволил разрешить эту проблему. В этом тесте один сомнительный случай дал положительный результат, а другой – отрицательный. В остальных случаях оба антигена в ИФА дали идентичные результаты. Однако показатели оптической плотности в положительных случаях были выше в анализе с антигеном из дезинтеграта, что свидетельствует о его большей активности.

При исследовании сывороток крови овец в ИФА опытным антигеном было выявлено 9 положительно реагирующих овец, в то время как стандартный антиген выявил лишь 4.

Из данных таблицы видно, что опытный антиген выявляет в ИФА больше положительно реагирующих на бруцеллез животных, чем существующий, а также позволяет разрешать сомнительные случаи. Следовательно, активность и специфичность опытного антигена превышают таковые существующего.

Выводы

Результаты исследований показали, что РА и РСК со стандартным единым антигеном при исследовании сыворотки крови животных выявляют приблизительно одинаковое количество положительно реагирующих животных. Однако диагностическая ценность РСК может быть существенно улучшена, если в качестве антигена использовать клеточный дезинтеграт. Тот же вывод можно сделать относительно ИФА. В целом можно сказать, что ИФА значительно более ценный диагностический метод в сравнении с РА и РСК при исследовании сывороток крови животных на бруцеллез.

 

 

 Литература

  1. Иванов Н. П. Бруцеллез животных и меры борьбы с ним. Алматы, 2007. 611 с.
  2. Артемов Б. Т., Рахманин П. П. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных под ред. Конопаткина А. А. Москва, Колос, 544 с.
  3. Косилов И. А., Аракелян П. К., Димов С. К., Хлыстунов А. Г. Бруцеллез сельскохозяйственных животных. Новосибирск, 1999. 344 с.
  4. Желудков М. М. Бруцеллез в России: современная эпидемиология и лабораторная диагностика. Автореф. дисс… док. мед. наук. Москва, 2009. 66 с.
  5. Верковский О. А. Статья «Лабораторная диагностика инфекционных болезней крупного рогатого скота с использованием иммуноферментного анализа (лейкоз, ящур, бруцеллез)» из журнала «Ветеринария Кубани» (web-издание www.kubanvet.ru). № 2, 2007.
Фамилия автора: Ким Р.А.
Год: 2011
Город: Алматы
Яндекс.Метрика