Морфологические изменения в тимусе крыс при развитиии различных экспериментальных перевивных опухолях

Как известно, вилочковая железа является органом, регулирующим иммуноморфологические процессы в организме. Соответствующие реактивные изменения в тимусе происходят при развитии онкологических заболеваний. Имеющиеся в литературе данные касаются главным образом реакции ткани тимуса при спонтанно возникающих, а также при химически индуцированных опухолях. В данном исследовании изучены морфологические реакции вилочковой железы крыс при развитии различных экспериментальных перевивных опухолях.

Введение. Как известно, вилочковая железа является органом, регулирующим иммуноморфологические процессы в организме. Соответствующие реактивные изменения в тимусе происходят при развитии онкологических заболеваний. Имеющиеся в литературе данные касаются главным образом реакции ткани тимуса при спонтанно возникающих, а также при химически индуцированных опухолях [1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17]. В данном исследовании изучены морфологические реакции вилочковой железы крыс при развитии различных экспериментальных перевивных опухолях.

Материал и методы. Материалом для данного исследования служили 2,5-месячные белые лабораторные крысы-самцы, которые распределялись по семи группам (по 5 штук в каждой). Группа №1 включала интактных животных. Группа №2 включала опытных крыс, которым суспензия клеток опухоли АфОЯ вводилась в брюшную полость (в дозе 5 миллионов клеток) с целью получения внутрибрюшинного опухолевого асцита. Предварительно данные трансплантируемые опухолевые клетки извлекались из брюшной полости крысы с перевитой опухолью. Концентрация опухолевых клеток подсчитывалась с помощью камеры Горяева под контролем микроскопа. Группа №3 включала опытных крыс, которым через хвостовую вену вводилась суспензия опухоли АфОЯ (в дозе 50 тысяч клеток) с целью получения внутрилёгочных опухолевых метастазов. Группа №4 включала опытных крыс, которым штамм опухоли АфОЯ вводился подкожно в область паха в виде гомогената в разведении 1:1 в жидкости Хэнгса с целью получения подкожных опухолевых узлов. Группа №4 включала опытных крыс, которым перевивали подкожно клетки штамма солидной опухоли карциносаркома Уокера. Группа №5 включала опытных крыс, которым перевивали внутрибрюшинно клетки штамма солидной опухоли саркома 45. Группа №6 включала опытных крыс, которым перевивали подкожно клетки штамма солидной опухоли лимфосаркома Плисса. Группа №7 включала опытных крыс, которым перевивали подкожно клетки штамма солидной опухоли карциносаркома Уокера.

Убой и вскрытие животных группы №1 (интакные крысы) производились с помощью медицинского эфира на десятый день от начала эксперимента. Убой и вскрытие крыс опытных групп производились к моменту полного развития перевитых опухолей. Животные группы №2 усыплялись на двадцатый день, животные группы №3 - на двадцатый день, животные группы №4 - на десятый день, животные группы №5 - на двадцатый день, животные группы №6 - на пятнадцатый день, животные группы №7 - на двадцать шестой день.

Тимус извлекался и фиксировался в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Парафиновые срезы, толщиной 57 мкм окрашивались гематоксилин-эозином и изучались под световым микроскопом.

Обсуждение. Снаружи тимус крыс контрольной группы (№1) окружён соединительнотканной капсулой, состоящей из многочисленных клеточных элементов с округлыми и овально-вытянутыми бледно окрашенными ядрами, имеющими четко очерченную кариолемму и хорошо различимый хроматиновый рисунок, а также из тонких волнообразно идущих волокон, ориентированных вдоль поверхности органа. В отдельных участках капсула содержит лимфоидные клетки, очевидно, проникшие сюда из перенхимы тимуса.

От капсулы отходят септы, которые внедряются глубоко в орган. Однако они разделяют ткань тимуса на дольки неполностью, вследствие чего в центральной части каждой из них ткань тимуса непрерывна. Септы пронизаны тонкостенными кровеносными сосудами, заполненными форменными элементами крови и выстланными уплощённым эндотелием, клетки которого содержат слабо окрашенные ядра вытянутой формы и ориентированы вдоль границы просвета сосуда. Данные кровеносные сосуды нередко имеют прямой ход, при этом, проникая в ткань тимуса, они пронизывают дольки почти по всему их диаметру.

В дольках паренхимы тимуса довольно отчётливо дифференцированы корковое и мозговое вещество, различающиеся по плотности расположения лимфоидных клеток, которые содержат округлые густо окрашенные ядра, окружённые тонким ободком цитоплазмы.

В корковом веществе лимфоциты плотно прилежат друг к другу, их ядра густо окрашены гематоксилином. Между лимфоидными клетками обнаруживаются

немногочисленные мелкие сосуды и капилляры. Толщина коркового слоя – 205,0±7,4 мкм.

В мозговом веществе лимфоциты располагаются значительно реже, а обнаруживаемые здесь сосуды имеют заметно больший размер, Толщина мозгового слоя – 320,33±15,01 мкм. В мозговой зоне долек тимуса встречаются немногочисленные тельца Гассаля округлой формы. Они имеют вид микрокист, просветы которых заполнены бесструктурной массой, либо опустошены, но наружный слой состоит из концентрически расположенных эпителиальных клеток с вытянутыми ядрами. Этот слой представляет собой как бы капсулу. Диаметр телец колеблется от 9,36 до 25,74 мкм. Во всех участках тимуса между лимфоидными элементами обнаруживаются ретикулоэпителиальные клетки, содержащие округлые и овально-вытянутые ядра с хорошо различимой кариолеммой и ядрышками. В мозговом слое ретикулоэпителиальные клетки просматриваются лучше, чем в коре, вследствие более рыхлого расположения лимфоцитов; в данном слое они довольно часто контактируют между собой и образуют небольшие скопления.

Следует отметить, что в тимусе исследованных нами крыс контрольной группы обнаруживаются крупные овальные клетки (диаметром 11,4±0,2 мкм) с эозинофильной цитоплазмой и густо окрашенными центрально расположенными ядрами. Они напоминают плазматические клетки и всегда локализуются поодиночке в мозговой и корковой зонах, а также в соединительнотканной капсуле и септах.

Тимус крыс группы №2 характеризуется значительно меньшими размерами, чем таковой у контрольных животных. На гистологическом препарате границы между дольками паренхимы выражены очень слабо ввиду сильного истончения соединительнотканных септ. Снаружи к поверхности органа очень плотно примыкает жировая ткань, которая в отдельных участках врастает в паренхиму тимуса

В дольках стёрта граница между корковым и мозговым слоями, что является результатом просветления коркового вещества. Данное явление обусловливается, с одной стороны, более редким расположением лимфоцитов, а с другой – менее интенсивной окрашиваемостью их ядер. При этом в большинстве участков лимфоидные клетки распределены равномерно. Однако, втречаются целые зоны, в которых тимоциты подвергаются значительным дегенеративным изменениям.

Многие ретикулоэпителиальные клетки дегенерируют и на их месте образуются мелкие кистоподобные полости. Также обнаруживались случаи когда лимфоциты «налипали» на ретикулярные клетки.

У опытных крыс тельца Гассаля обнаруживаются чаще, чем у контрольных животных. Их диаметр колеблется от 14,04 до 35,1 мкм. Из них более мелкие тельца имеют опустошённый просвет, окружённый концентрически расположенными уплощёнными ретикулоэпителиальными клетками с вытянутыми ядрами. В более крупных тельцах просвет заполнен обрывками клеточной протоплазмы; по своей структуре такие тельца напоминают фолликулы.

В ткани тимуса редко встречаются мелкие кровеносеные сосуды.

Тимус животных группы №3 окружён соединительнотканной капсулой, которая во многих участках разрыхлена и инфильтрирована лимфоидными клетками. При этом просветы капсулярных сосудов расширены и заполнены форменными элементами крови. В капсуле обнаруживаются редкие крупные овальные клетки с отчётливыми границами, эозинофильной цитоплазмой и центрально расположенным густо окрашенным округлым ядром. Они напоминают плазматические клетки и располагаются одиночно, реже парами. Их диаметр достигает 12 мкм, а диаметр их ядер – 3,5 мкм.

В дольках паренхимы органа граница между корковым и мозговым веществом не выражена. По всей площади срезов долек лимфоидные клетки располагаются плотно друг к другу. Границы тимоцитов невыражены.

Встречаются участки, где ядра лимфоидных клеток густо окрашены гематоксилином, в результате чего, хроматиновый рисунок в них плохо различим. Средний диаметр ядер составляет – 3,67±0,16 мкм.

Имеются также участки, в которых тимоциты содержат бледно окрашенные ядра с довольно чётко очерченной кариолеммой. Средний диаметр таких ядер – 4,56±0,1 мкм. В этих участках часть лимфоидных клеток полностью разрушается, а на их месте остаются мелкие полости.

Отдельные участки долек тимуса имеют вид гомогенной эозинофильной массы, в которой беспорядочно разбросаны осколки ядер лимфоидных клеток.

В целом тимус опытных животных пронизан густой сетью тонкостенных кровеносных сосудов с расширенным просветом, заполненным форменными элементами крови. Тельца Гассаля не обнаруживаются.

В подкапсулярной зоне некоторых долек тимуса крыс опытной группы можно встретить крупные скопления клеток, которые по виду напоминают опухолевые. Такие клетки располагаются тяжами, разделёнными тонкими прослойками гомогенной субстанции. Они содержат округлые и овальные ядра с чётко очерченными границами, хорошо видимыми ядрышками и отчётливым хроматиновым рисунком. Ядра клеток довольно крупные, их средний диаметр составляет 8,77±0,22 мкм. Эти клеточные скопления пронизаны густой сетью тонкостенных кровеносных сосудов с расширенным просветом, заполненным форменными элементами крови. В этих же участках встречаются крупные полости, содержащие гомогенную коллоидную массу. Данные полости сообщаются с полостью кровеносных сосудов.

Здесь обнаруживаются также редкие одиночные крупные овальные клетки с отчётливыми границами, эозинофильной цитоплазмой и эксцентрично расположенным ядром, содержащим хорошо различимые ядрышки. Диаметр клеток достигает 20 мкм, а диаметр их ядер – 12 мкм.

Анатомически тимус крыс группы №4 характеризуется значительно увеличенными размерами. При микроскопическом исследовании вилочковой железы животных данной группы на её поверхности просматривается тонкая соединительнотканная капсула, которая состоит из многочисленных клеточных элементов с округлыми и овально-вытянутыми ядрами, имеющими чётко очерченную кариолемму и хорошо различимый хроматиновый рисунок, а также из тонких волнообразно идущих волокон, ориентированных вдоль поверхности органа. Толщина капсулы составляет 11,86±1,17 мкм. От капсулы отходят тонкие васкуляризированные септы, которые разграничивают каждую дольку тимуса, в результате чего паренхима органа имеет отчётливо выраженное дольчатое строение.

В отдельных участках септы утолщаются, окружая довольно крупные кровеносные сосуды. При этом трабекулярные артерии достигают диаметра 60 мкм и имеют хорошо развитую медию. Вены же имеют очень тонкую стенку и диаметр до 80 мкм.

Тимические дольки на гистологическом препарате выглядят как многогранники, длина которых в среднем составляет 1163,6±28,15 мкм, а ширина – 696,67±14,83 мкм. В дольках довольно отчётливо разграничены корковое и мозговое вещество, различающиеся по плотности расположения лимфоидных клеток.

Толщина коркового слоя составляет 327,85±1,2 мкм. Здесь лимфоидные клетки располагаются плотно, границы между ними неразличимы. Они содержат округлые и овальные ядра, которые в одних случаях характеризуются наличием хорошо очерченной кариолеммы и отчётливого хроматинового рисунка, в других же случаях они густо окрашены, ввиду чего хроматиновый рисунок в них просматривается с трудом. Средний диаметр ядер тимоцитов коркового вещества долек составляет 3,74±0,14 мкм.

Между лимфоидными клетками коркового вещества нередко обнаруживаются ретикулоэпителиоциты, округлые и овальные ядра которых имеют хорошо очерченную кариолемму и отчётливо видимые ядрышки. Диаметр ядер составляет 4,84±0,2 мкм. Иногда встречаются разрушающиеся ретикулоэпителиоциты.

В отдельных случаях звёздчатые клетки коркового вещества располагаются небольшими группами, в которых отдельные ретикулоэпителиоциты могут иметь выраженные признаки деструкции. Очевидно, данное явление относится к началу формирования тимических телец, которые в более поздней стадии представляют из себя либо гомогенные структуры неправильной формы, содержащие разрушающиеся ядра ретикулоэпителиоцитов, либо опустошённые полости, окружённые напластованиями ретикулярных клеток. Диаметр телец Гассаля коркового слоя составляет 19,27±0,7 мкм.

Мозговое вещество тимических долек имеет толщину 315,7±11,6 мкм. Здесь лимфоидные клетки располагаются значительно реже, а их ядра по размеру заметно крупнее таковых в корковом веществе. Диаметр ядер составляет 6,36±0,27 мкм. В подавляющем большинстве случаев они имеют чётко очерченную кариолемму и хорошо видимые ядрышки.

Ретикулоэпителиоциты в мозговом веществе встречаются чаще. Они могут образовывать скопления, состоящие из значительного количества клеток. В некоторых из таких скоплений содержатся клетки с выраженными признаками деструкции. Довольно часто здесь встречаются сформированные тимические тельца неправильной формы, имеющие вид гомогенной массы, окружённой напластованиями разрушающихся ретикулоэпителиоцитов. В центре некоторых телец имеются опустошённые полости. Диаметр телец Гассаля мозгового слоя долек составляет 25,12±0,9 мкм.

Анатомически тимус крыс группы №5 характеризуется значительно увеличенными размерами. При микроскопическом исследовании вилочковой железы животных данной группы, на её поверхности просматривается тонкая соединительнотканная капсула, которая состоит из многочисленных клеточных элементов с округлыми и овально-вытянутыми ядрами, имеющими чётко очерченную кариолемму и хорошо различимый хроматиновый рисунок, а также тонких волнообразно идущих волокон, ориентированных вдоль поверхности органа.

В некоторых участках капсула разрыхлена и инфильтрирована лимфоидными клетками, содержащими округлые и овальные бледно окрашенные ядра с чётко очерченной кариолеммой. Диаметр ядер составляет 4,33±0,18 мкм. В капсуле обнаруживаются также крупные клетки овальной формы с отчётливыми границами, зернистой цитоплазмой и центрально расположенным бледно окрашенным округлым ядром, имеющим хорошо очерченную кариолемму. Они напоминают плазматические клетки и располагаются одиночно, реже парами. Их диаметр достигает 14 мкм, а диаметр их ядер - 5,5 мкм. Изредка данные клетки обнаруживаются и в паренхиме органа.

Паренхима тимуса пронизана отдельными соединительнотканными прослойками, имеющими значительную протяженность. Данные прослойки состоят из тонких волнообразно идущих волокон, между которыми располагаются клеточные элементы с овально-вытянутыми и палочковидными бледно окрашенными ядрами Средняя толщина прослоек составляет 10,53±0,39 мкм.

Ввиду малочисленности соединительнотканных прослоек, дольчатость строения парeнхимы органа слабо выражена. В самих дольках отсутствует отчётливая граница между корковым и мозговым веществом. По всей площади срезов долек лимфоидные клетки располагаются плотно друг к другу, ввиду чего между ними сложно обнаруживаются ретикулоэпителиоциты. Границы тимоцитов неразличимы. В одних участках долек ядра тимоцитов окрашены довольно густо и имеют отчётливую кариолемму, диаметр таких ядер составляет 3,82±0,16 мкм. В других же участках ядра лимфоидных клеток окрашены очень бледно, при этом кариолемма просматривается с трудом. Нередко в паренхиме долек встречаются небольшие участки гомогенной эозинофильной массы, а также целые зоны, в которых тимоциты подвергаются значительным дегенеративным изменениям. Между лимфоидными клетками обнаруживаются также мелкие полости заполненные вакуолизированной коллоидной субстанцией. Кровеносные сосуды в ткани тимуса встречаются очень редко. Также редко обнаруживаются тельца Гассаля, которые, в одних случаях имеют вид плотных клеточных напластований, в других же случаях они содержат центральные полости. Диаметр телец не превышает 14 мкм. Паренхима тимуса крыс опытной группы №6 характеризуется плотным расположением лимфоидных элементов, в результате чего дольчатость структуры органа не выражена, также полностью стёрта граница между корковым и мозговым веществом. Среди лимфоидных клеток обнаруживаются отличия. В одних случаях лимфоциты имеют видимые границы и содержат выпуклые ядра с очерченной кариолеммой и отчётливыми ядрышками. Диаметр таких лимфоцитов составляет 7,53±0,3 мкм, а диаметр их ядер - 5,19±0,2 мкм. В других же случаях лимфоциты содержат гиперхромные ядра (диаметром 3,4±0,1 мкм) и имеют размытые границы. Ввиду плотного расположения лимфоидных клеток, ретикулоэпителиоциты между ними обнаруживаются с трудом.

Тельца Гассаля многочисленны, в одном поле зрения микроскопа (ок.10, об.40) их насчитывается до пяти. Они имеют округлую, овальную, многолопастную и неправильную форму. Некоторые из них представляют собой бесструктурную эозинофильную массу. Другие же тимусные тельца содержат сохранившиеся ядра, которые могут быть собраны в плотные скопления, или же могут располагаться в виде окружности или полумесяца. Во многих тимусных тельцах такие ядра имеют овальную форму и характеризуются наличием отчётливой кариолеммы и хорошо различимых ядрышек. Диаметр таких ядер составляет 6,58±0,23 мкм. Встречаются также тельца Гассаля, ядра внутри которых окрашены очень бледно и имеют размытые границы. В отдельных тельцах ядра сморщены и гиперхромны.

Между лимфоидными клетками паренхимы тимуса встречаются редкие тонкостенные сосуды с форменными элементами крови. Диаметр сосудов не превышает 15 мкм. Обнаруживаются также небольшие полости, которые заполнены либо гомогенной эозинофильной массой, либо же глыбчатой эозинофильной массой с беспорядочно разбросанными в ней лимфоидными клетками.

Тимус крыс группы №7 сильно увеличен. Микроскопически он состоит из крупных долек, диаметром 963,2±28,16 мкм. Снаружи тимус покрыт соединительнотканной капсулой, которая состоит из тонких волнообразно идущих волокон, между которыми расположены многочисленные клеточные элементы, содержащие округлые и овальные густо окрашенные ядра.

От капсулы внутрь органа отходят узкие соединительнотканные прослойки, полностью отграничивающие каждую дольку. В отдельных участках они утолщены, окружая тонкостенные кровеносные сосуды, заполненные форменными элементами крови. Толщина прослоек составляет 8,27±0,15 мкм.

В капсуле, реже в прослойках, обнаруживаются клетки овальной формы, которые по структуре напоминают плазмоциты. Они характеризуются отчётливыми границами и зернистой цитоплазмой. Их ядра густо окрашены и расположены в центральной части. Диаметр таких клеток составляет 12,2±0,4 мкм, а диаметр их ядер - 3,84±0,1 мкм.

В дольках вилочковой железы различимы корковое и мозговое вещество. Корковое вещество образовано многочисленными плотно расположенными лимфоидными клетками, ядра которых густо окрашены и имеют округлую, овальную и угловатую форму. Толщина коркового слоя - 209,61±9,65 мкм.

В мозговом веществе лимфоциты расположены реже. Между ними просматриваются ретикулоэпителиоциты, овальные ядра которых бледно окрашены и имеют диаметр 5,85±0,11 мкм. Между клеточными элементами мозгового вещества обнаруживаются тельца Гассаля, которые имеют вид напластований округлой и неправильной формы. Их средний диаметр составляет 14,82±0,3 мкм.

Ширина мозгового вещества - 292,1±7,55 мкм.

Дольки тимуса пронизаны тонкостенными кровеносными сосудами, заполненными форменными элементами крови.

Выводы. Развитие экспериментальных перевивных опухолей в организме крыс вызывает реактивные изменения в ткани тимуса, выражающиеся в изменении размеров органа, отсутствии видимых границ между корковым и мозговым слоями, деструктивных изменениях ретикулоэпителиоцитов.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ашуров З.М., Сынебогов С.В., Денисова Л.Б., Варфоломеева С.Р., Инюшкина Е.В. Неходжикинская лимфома глоточного кольца Пирогова-Вальдейера // Вестник оториноларингологии.- 2004.- № 4.- С. 54-55.
2. Бровкина А.Ф., Сорокина М.Н., Каплина А.В. Внутриглазная злокачественная лимфома.// Вестник офтальмологии.- 1990.- Т. 106.- №6.- С. 48-53.
3. Волкова М.А., Рейзингер М.А., Круглова Г.В., Пробатова Н.А. Лимфосаркома с парапротеинемией.// Терапевтический архив.- 1980.- Т. 52.- № 2.- С. 107-111.
4. Галил-Оглы Г.А., Порошин К.К., Алпченко Л.А.., Крылов Л.М. Патологическая анатомия опухолей вилочковой железы.// Архив патологии.- 1980.- Т. 42.- В. 11.- С.6-16.
5. Далматова И.А., Бастимиева Б.Е. Клинико-морфологические особенности злокачественных лимфом орбиты.// Здравоохранение Казахстана.- 1993.- №9.- С. 36-37.
6. Догель Л.В. К вопросу о патоморфологии вилочковой железы при миастении.// Научные труды Лениниградского института усовершенствования врачей.- Л.- 1971.- В.103.- С. 165-173.
7. Заривчатский М.Ф., Иванов С.И., Кулигин А.Г. Первичная лимфосаркома червеобразного отростка.// Вестник хирургии им. И.И. Грекова.- 1990.- Т. 145.- № 12.- С. 36.
8. Корчмару И.Ф., Яковлева И.А., Гладыш В.В., Бодян В.Д. Неходжкинская лимфома клеток мантийной зоны.// Вопросы онкологии.- 2000.- Т. 46.- № 2.- С. 236-237.
9. Кременецкая А.М., Воробъёв А.И., Харазишвили Д.В., Франк Г.А., Воробъёв И.А., Капланская И.Б., Кравченко С.К., Моисеева Т.Н., Шкловский-Корди Н.Е., Чернова Н.Г., Лорие Ю.Ю. Гигантоклеточные лимфосаркомы или вариантные формы лимфогранулематоза.// Терапевтический архив.- 2002.- Т. 74.- № 7.- С. 48-52.
10. Лапин Б.А., Яковлева Л.А., Инджия Л.В. Злокачественные лимфомы приматов и принципы их морфологической диагностики (на модели злокачественной лимфомы павианов).// Архив патологии.- 2007.- Т. 69.- № 4.- С.- 38-41.
11. Мустяцэ Л.З., Яковлева И.А., Корчмару И.Ф., Сухарский И.С., Робу М.В. Лимфобластная лимфосаркома и перстневидноклеточный рак желудка.// Вопросы онкологии.- 1992.- Т. 38.- № 4/5/6.- С. 502-504.
12. Мустяцэ Л.З., Корчмару И.Ф., Яковлева И.А., Робу М.В. Беременность у больной лимфобластной лимфосаркомой в периоде полной ремиссии.// Вопросы онкологии.- 1993.- Т. 39.- № 7-12.- С. 325-326.
13. Мустяцэ Л.З., Корчмару И.Ф., Яковлева И.А., Робу М.В. Первичная изолированная лимфобластная лимфосаркома головного мозга.// Вопросы онкологии.- 1993.- Т. 39.- № 7-12.- С. 325-326.
14. Селезнёва Т.Н., Гриневич Ю.А. О морфофункциональных изменениях в надпочечниках и тимусе крыс при химически индуцированном канцерогенезе молочных желёз.// Экспериментальная онкология.- 1980.- Т.2.- №3.- С. 37-40.
15. Франк Г.А. О клинической морфологии злокачественных лимфом.// Терапевтический архив.- 1974.- Т. 46.- С. 60-66.
16. Шкондин Л.А., Маликова Н.А., Зверев Г.Р. Случай лимфосаркомы селезёнки// Вестник рентгенологии и радиологии.- 1992.- №
17. - С. 54.
18. O'Neill B.P., Glig J.J. Primary central nervous system lymphoma.// Mayo Clin. Proc.- 1989.- V. 64.- P. 1005-1020.