Влияние субстанции «алхидин» на процессы перекисного окисления липидов у крыс с моделью резаной кожной раны

К настоящему времени известно множество препаратов, предлагаемых для ускорения заживления гнойных ран, в их числе значительную часть составляют препараты растительного происхождения. Новая отечественная субстанция, получаемая из верблюжьей колючки киргизской – алхидин, представляет собой биологически активный комплекс, состоящий из полимерного проантоционидина (полифлавон), водорастворимого гетерополисахарида, аминокислот, флавоноидов и микроэлементов. По данным доклинических исследований предполагается, что этот комплекс может обладать обладает антиоксидантными, цитопротекторными и ранозаживляющими свойствами [1].

Настоящая работа имеет своей целью подробное описание антиоксидантного потенциала субстанции алхидин, имея ввиду разработку нового ранозаживляющего препарата.

Материалы и методы. Работа выполнена на 30 белых беспородных крысах-самцах массой 180 – 220 г. Для проведения исследований использовались животные одного помёта и приблизительно одинаковые по весу. В контрольные и опытные группы отбирались экземпляры из одной партии, внешне здоровые, без видимых дефектов на коже и признаков общей патологии. Выбраковывались крысы с подозрением на наличие спонтанной патологии.

Рану моделировали следующим образом. Раны животным наносились в области спины под общим ингаляционным эфирным наркозом с использованием устройств для фиксации и наркотизации мелких лабораторных животных в эксперименте [2,3]. Создавали гнойную рану, удаляя кожный лоскут, площадью 3 см2 на спине в межлопаточной области. Края раны фиксировали с помощью тефлонового кольца (подшивали), так, что поверхность раны оставалась открытой. Проводили путем инфицирования поверхности раны взвесью суточной агаровой культуры Staphylococcus aureus штамм 592 в количестве 109 микробных тел. Через 3 дня формировалась типичная гнойная рана. Из 30 крыс, взятых в эксперимент, стандартная гнойная рана была получена у 26.

Все животные были разделены на 2 группы: группа плацебо – животным в течение 7 дней вводили ежедневно, в утренние часы за 30 мин до выдачи в кормушку корма внутрижелудочно 1% крахмальный раствор в объеме 0,5 мл; группа «алхидин» - в аналогичных условиях животным вводили в том же объеме крахмала взвесь алхидина. В качестве контроля использованы 7 здоровых беспородных крыс.

Описывалось влияние алхидина на показатели свободнорадикальных процессов в сыворотке крови крыс [4,5,6,7].

Результаты и обсуждение. В табл. 1 приведены количественные данные, характеризующие изменение уровня генерации супероксиданионов в крови крыс под влиянием субстанции “алхидин”.

 

Таблица 1. Влияние алхидина на генерацию супероксид анионов в плазме крови крыс с моделью гнойной раны (n=6)

Группы

 

Скорость генерации супероксид анионов (%)

Р < 0,05

Плацебо

79,9 ± 14,46

*

Алхидин

47,4 ± 8,7

*    **

Контроль (здоровые крысы)

14,0 ± 4,4 (n = 6)

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

 

Как видно из данных, представленных в таблице, эффект исследуемой субстанции достаточно выражен в отношении скорости генерации супероксиданионов. По сравнению с плацебо алхидин снижает скорость генерации супероксиданионов на 40%. В табл. 2 охарактеризован потенциал влияния субстанции алхидин на уровень генерации оксида азота. Как видно, алхидин в определенной степени уменьшает генерацию оксида азота, причем, это статически значимое различие с эффектом плацебо.

 

Таблица 2.- Влияние алхидина на генерацию оксида азота в плазме крови крыс с моделью гнойной раны (n=6)

Группы

мкмоль/л

Р < 0,05

Плацебо

45,3 + 8,36

*

Алхидин

25,1 ± 1,33

*   **

Контроль

3,1 ± 0,208

       

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

В табл. 3 приведены данные, характеризующие воздействие алхидина на уровень нитратов. Как видно из приведенных данных, значимого влияния алхидина на содержание нитритов в крови в условиях нашего наблюдения выявить не удалось.

 

Таблица 3 - Влияние алхидина на содержание нитритов (NO2-) в сыворотке крови крыс с моделью кожной раны (n=6)

Группы

нМ/мг белка

Р < 0,05

Плацебо

16,4 ± 1,7

*

Алхидин

20,8 ± 1,8

*

Контроль

8,8 ± 1,2

       

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

Таблица 4 содержит данные, относящиеся к концентрации в эритроцитах крови продукта ПОЛ - малонового диальдегида.

 

Таблица 4 - Влияние алхидина на содержание малонового диальдегида в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)

Группы

мкмоль/мл

Р < 0,05

Плацебо

28,3 ± 3,15

*

Алхидин

10,39 ± 0,5

*    **

Контроль

6,96 ± 0,297

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

 

Таблица 5 - Влияние суттигена и алхидина на содержание каталазы в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)

Группы

мкмоль/л

Р < 0,05

Плацебо

0,133 ± 0.052

*

Алхидин

0,60 ± 0,08

*       **

Контроль

0,792 ± 0,086

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

Как следует из данных табл. 4, алхидин более чем в 2 раза по сравнению с плацебо уменьшают содержание малонового диальдегида.

Как видно из данных табл. 5, уровень одного из ферментов системы антиоксидантной защиты – каталазы эритроцитов меняется под влиянием введения алхидина. Алхидин обеспечивает повышение этого показателя в 4,5 раза.

В табл. 6 приведены данные, характеризующие влияние исследуемого соединения на уровень активности ещё одного фермента антиоксидантной защиты – глютатионпероксидазы (ГПО).

Установлено, что под влиянием алхидина происходит повышение концентрации ГПО на 22,6% по сравнению с плацебо.

В табл. 7 приведены данные, характеризующие влияние алхидина на уровень средних молекул. 

 

 

Таблица 6 - Влияние алхидина на содержание глютатионпероксидазы в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)

Группы

мкмоль/мл/мин

Р

Плацебо

58,2 ± 3,72

*

Алхидин

71,4 + 6,7

*     **

Контроль

82,81+ 3,7

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

Таблица 7- Влияние алхидина на уровень средних молекул у крыс с моделью кожной раны (n=6)

Группы

Условные единицы

Р

Плацебо

0,22 ± 0,043

*

Алхидин

0,1 ± 0,013

*       **

Контроль

0,07 ± 0,0022 (n=5)

Условные обозначения:

* -  достоверность различий по сравнению с контролем,

** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.

Влияние алхидина проявляется и в уровне концентрации средних молекул: алхидин снижают этот показатель примерно вдвое. Интегральные параметры, характеризующие состояние системы ПОЛ-АОЗ, описывались в аналогичных условиях и приведены в следующей таблице. Как можно судить по данным таблицы, алхидин угнетал интенсивность ПОЛ, снижая содержание в сыворотке как диеновых конъюгатов, так и оснований Шиффа. Введение алхидина сопровождалось существенным увеличением общей антиокислительной активности. При этом, через неделю после начала введения алхидина активность СОД в сыворотке крови уменьшалась на 36,5 %.

 Таблица 8. Влияние алхидина на показатели свободнорадикальных процессов в сыворотке крови крыс

Показатели

Плацебо

Алхидин

Величина перекисной хемилюминесценции, усл. ед.

7,40 +/- 0,99

 

4,53 +/- 0,61***

 

Диеновые конъюгаты, нМ/мг белка

0,99 +/- 0,12

0,28 +/- 0,36*

Шиффовы основания, усл. ед./мг белка

4,87 +/- 0,36

3,39 +/- 0,35**

Антиокислительная активность, усл. ед./мг белка

0,82 +/- 0,03

 

1,12 +/- 0,03*

 

Активность супероксиддисмутазы (СОД), ед./мг белка

1,93 +/- 0,03

1,32 +/- 0,07*

Церулоплазмин, мг%

34,7 +/- 3,9

29,0 +/- 2,1

Примечание: В каждом определении объединяли сыворотку крови от 2-3 животных. Различие с плацебо достоверно: * p < 0,001; ** p < 0,01; *** p < 0,05.

Аналогичная картина отмечалась и в отношении содержания в сыворотке крови церулоплазмина, показатели которого, однако, колебались в пределах нормы. Снижение активности СОД при воздействии алхидина сопровождалось тенденцией к увеличению содержания нитритов, образующихся при окислении продуцируемого эндотелием сосудов оксида азота. Полученные результаты подтверждают более ранние данные [1] об антиокислительном действии алхидина. По-видимому, антиоксидантные свойства алхидина связаны с его антирадикальной активностью, то есть способностью непосредственно связывать свободные радикалы, образующиеся в организме из молекулярного кислорода, а также при перекисном окислении липидов, в частности, гидроксильный (ОН) и пероксильный (ROO.) радикалы [8].

Литература

  1. Рахимова А.К. Цитопротекторные свойства лекарственных препаратов /А.К. Рахимова, Д.Д.Кусаинова, А.Е.Гуляев.- Алматы, 2007.- 340с.
  2. Билич Г. Л. Влияние некоторых стимуляторов репарации на заживление операционных ран у молодых животных /Г.Л.Билич, А.З. Бузина // Здравоохранение Казахстана.- 1971.-№ 12.- С. 141-143.
  3. Лазарев Н. В. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований /Н.Л.Лазарев. – М.: Медгиз, 1954.- 391с.
  4. Экспресс-метод определения антирадикальной активности лекарственных веществ /Т.В.Починок, М.Л.Тараховский, В.А.Портнягина и др. //Хим.-фармацевт. журн.- 1985.- N 5.- C. 565-569.
  5. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов /Т.В.Починок, М.Л.Тараховский, В.А.Портнягина и др. //Биофизика.- 1992.- Т.37.- C.1041-1047.
  6. Возрастные изменения активности свободнорадикальных процессов в тканях и сыворотке крови крыс /В.Н.Анисимов, А.В.Арутюнян, Т.И.Опарина и др. //Физиол. журн. им. И.М.Сеченова.- 1999.- Т.-84.- С. 502-507.
  7. Антиоксидазная активность сыворотки крови /Г.И.Клебанов, Ю.О.Теселкин, И.В.Бабенкова и др. //Вестн. РАМН.- 1999.- № 2.- С.15-22.
  8. Sawada M, Carlson J.C. Changes in superoxide radical and lipid peroxide formation in the brain, heart and liver during the lifetime of the rat /М.Sawada, J.C.Carlson //Mech.Ageing Dev.-1987.-Vol. 41.-P.125-137.
Фамилия автора: Е.Н.Дарменов
Теги: Хирургия
Год: 2010
Город: Караганда
Категория: Медицина
Яндекс.Метрика