Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

Условия культивирования гриппозных векторов, экспрессирующих бруцеллезные иммунодоминантные белки оmp16 или l7/l12, в куриных эмбрионах

С целью специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота на основе метода обратной генетики были сконструированы четыре рекомбинантных штамма вируса гриппа А субтипов Н5N1 и H1N1, экспрессирующих из открытой рамки считывания гена NS1 бруцеллезные иммунодоминантные белки Omp16 или L7/L12. В данной работе представлены результаты исследований по определению оптимальных параметров культивирования указанных гриппозных векторов в куриных эмбрионах (КЭ). Установлено, что максимальное накопление гриппозных векторов отмечается при следующих условиях культивирования: возраст куриных эмбрионов (КЭ) - 10 суток, заражающая доза инфицирования КЭ 1000-10000 ЭИД50, температура и продолжительность инкубации - 32-34 ºС и 48 ч, соответственно. При соблюдении указанных параметров культивирования можно стабильно получать высокоактивный вируссодержащий материал с инфекционной и гемагглютинирующей активностью    не менее 7,0 lg ЭИД50/см3 и 1: 64, соответственно, что вполне пригодно для приготовления векторной вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота (КРС). 

Введение

Бруцеллез КРС - хроническое зооантропонозное заболевание, распространенное во многих странах мира, наносящее большой экономический ущерб животноводству и представляющее серьезную опасность здоровью людей [1-3]. Несмотря на столетнюю историю открытия возбудителей этой инфекции и, соответственно, столь же длительную  историю  объединения  усилий  ученых  разных  стран,  направленных   на разработку и совершенствование средств и методов борьбы с ним, бруцеллез все еще остается одной из главных проблем мировой медицинской и ветеринарной науки.

Для специфической профилактики бруцеллеза КРС в настоящее время используется живые вакцины из аттенуированных штаммов B. abortus 19, RB 51. Указанные вакцины обладают высокой иммуногенной эффективностью, но при этом не лишены и серьезных недостатков, связанных в первую очередь с возможностью вызывать аборты у стельных коров, секрецией вакцинного штамма в молоко вакцинированных животных, реверсии, а также сложностью дифференциации вакцинированных животных от инфицированных [4]. Более того вакцинные штаммы обладают патогенностью для людей [5]. Перечисленные недостатки коммерческих вакцин послужили причиной для ограничения вакцинации во многих неблагополучных по бруцеллезу странах, что еще более усугубило эпизоотическую ситуацию по данному заболевания в мире.

В НИИПББ с целью создания векторной вакцины против бруцеллеза КРС (Brucella abortus) использован совершенно новый подход, предполагающий применение вируса гриппа в качестве вектора для доставки генов, экспрессирующих бруцеллезные антигены in vivo. Для этого методом обратной генетики сконструированы рекомбинантные штаммы вируса гриппа А (гриппозные векторы) субтипов Н5N1 и H1N1, содержащие генетические последовательности вставок бруцеллезных белков L7/L12 (рибосомальный) или Omp16 (поверхностный мембранный) в NS1 гене, экспрессия которых происходит in vivo. Моно и бивалентные вирусные конструкции в режиме прайм (вирусами субтипа Н5N1) и бустерной (вирусами субтипа Н1N1) иммунизации безопасны для мышей (не вызывают гибели, потери массы тела и патоморфологических изменений), способствует формированию ярко выраженного Th1 клеточного (CD4+ лимфоциты I типа) иммунного ответа, а также высокой степени защиты от вирулентного штамма B. abortus 544, сопоставимой с коммерческой живой вакциной из штамма B. abortus 19. Кроме того, иммунизация животных вирусными конструкциями создает возможность не только для эффективной дифференциации вакцинированных животных от инфицированных, но и дает возможность выявить поголовье больных бруцеллезом животных в вакцинированном стаде [6-8].

Известно, что при разработке технологии изготовления вакцин одним из важнейших этапов является получения высокоактивного вируссодержащего материала на чувствительной системе культивирования. Как правило, в качестве системы культивирования для вирусов гриппа используют куриные эмбрионы (КЭ). Однако при этом условия культивирования (заражающая доза вируса, температура и продолжительность инкубации, возраст КЭ), позволяющие получить максимальный выход вируса, зависят от видовых особенностей вируса, и поэтому должны быть определены экспериментально.

В связи с этим для разработки технологии изготовления векторной вакцины против бруцеллеза КРС целью настоящих исследований являлось определение оптимальных параметров культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующие бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu-NS1-124- Оmр16-H5N1, Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в КЭ.

Материалы и методы

Рекомбинантные штаммы вируса гриппа А, экспрессирующие бруцеллезные антигены:

  • - рекомбинантный аттенуированный штамм Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1 (6:2 реассортант вирусов гриппа А/Puerto Rico/8/34 H1N1 и A/chicken/Astana/6/05 H5N1) вируса гриппа, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, типа А, стабильно экспрессирующий рибосомальный белок L7/L12 от Brucella abortus с открытой    рамки считывания NS1 гена, депонированный в Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК (№ М-4-13/D);
  • -рекомбинантный аттенуированный штамм Flu-NS1-124-Omp16-H5N1 (6:2 реассортант вирусов гриппа А/Puerto Rico/8/34 H1N1 и A/chicken/Astana/6/05 H5N1) вируса гриппа, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, типа А, стабильно экспрессирующий белок Omp16 (поверхностный мембранный) от Brucella abortus с открытой рамки считывания NS1 гена, депонированный в Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК (№ М-5-13/D);
  • -рекомбинантный аттенуированный штамм Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1 (6:2 реассортант вирусов гриппа А/Puerto Rico/8/34 H1N1 и А/New Caledonia/20/99 H1N1) вируса гриппа, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, типа А, стабильно экспрессирующий рибосомальный белок L7/L12 от Brucella abortus с открытой рамки считывания NS1 гена, депонированный в Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК (№ М-6-13/D);
  • -рекомбинантный аттенуированный штамм Flu-NS1-124-Omp16-H1N1 (6:2 реассортант вирусов гриппа А/Puerto Rico/8/34 H1N1 и А/New Caledonia/20/99 H1N1) вируса гриппа, семейства Orthomyxoviridae, рода Influenzavirus, типа А, стабильно экспрессирующий белок Omp16 (поверхностный мембранный) от Brucella abortus с открытой рамки считывания NS1 гена, депонированный в Коллекции микроорганизмов РГП НИИПББ КН МОН РК (№ М-7-13/D).

Конструирование вышеизложенных гриппозных векторов проводили по стандартной методике Lonza NucleofectorTM с незначительными изменениями.

- развивающиеся куриные эмбрионы (РКЭ) из АО «Алель Агро» (Алматинская область, Казахстан).

Оптимизация параметров культивирования гриппозных вирусных векторов

Среди параметров культивирования, ввиду существенного влияния на возможность накопления вируса в КЭ, определяли оптимальную заражающую дозу, температуру, возраст куриных эмбрионов и срок инкубации вируса.

Определение оптимальной дозы заражения

Оптимальная заражающая доза вирусов определяли на 10 суточных КЭ инфицированных в дозах 1-10000000 ЭИД50 в аллантоисную полость в объеме 0,2 см3. Зараженные КЭ инкубировали при температуре 34±0,50С и относительной влажности воздуха 55-60% в течение 48 ч. Уровень накопления вируса оценивали путем титрования в КЭ и постановкой РГА.

Определение оптимальной температуры инкубирования

Для определения оптимальной температуры инкубирования заражали 10-сут КЭ гриппозными вирусными векторами Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1 и Flu-NS1-124-Оmр16- H1N1 в дозе 1000 ЭИД50/0,2см3, а векторами Flu-NS1-124-Оmр16-H5N1 и Flu-NS1-124- L7/L12-H1N1 в дозе 10 000 ЭИД50/0,2см3. Инфицированные КЭ инкубировали при температурах 32±0,5ºС, 34±0,5ºС, 36±0,5ºС, 38±0,5ºС и относительной влажности воздуха 55±5% в течение 48 час.

Определение оптимального возраста КЭ

С этой целью инфицировали КЭ 9, 10, 11, 12 и 13 сут возраста в дозах 1000-10000 ЭИД50. Зараженные КЭ инкубировали при температуре 34±0,50С и относительной влажности воздуха 55-60% в течение 48 ч. Уровень накопления вируса  оценивали путем титрования в КЭ и постановкой РГА.

Определение оптимального срока культивирования КЭ

Для этой цели КЭ 10-суточного возраста инфицировали вирусами в дозах от 1000 до 10 000 ЭИД50 с дальнейшим инкубированием при температуре 34ºС в течение 24, 48, 72 и 96 ч. Уровень накопления вируса оценивали путем титрования в КЭ и постановкой РГА.

Определение инфекционной активности гриппозных вирусных векторов

Инфекционная активность вируса определяли по общепринятой методике путем титрования на 10 суточных КЭ. Учет результатов титрования проводили по методу L. Reed & H. Muench и выражали в десятичных логарифмах ЭИД50/см3 [9].

Определение гемагглютинирующей активности гриппозных вирусных векторов

Гемагглютинирующую активность гриппозных вирусных векторов определяли по общепринятой методике в РГА с использованием 1% взвеси эритроцитов петуха [10].

Статистическая обработка

Определяли среднеарифметические значения исследуемых параметров, а также их стандартную ошибку. Достоверность различий между показателями определяли с использованием статистической программы GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA). Значение Р < 0,05 считали значимым.

Результаты и обсуждение

Доза инфицирования КЭ

На начальном этапе исследований, при определении оптимальных параметров культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, NS1-124-Оmр16-H5 N1, Flu-NS1- 124-L7/L12-H1N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в КЭ, определяли уровень накопления вируса в зависимости от дозы инфицирования. При этом использовали дозы от 1 до 1000000 ЭИД50 при одинаковых условиях культивирования. Результаты исследований по определению инфекционной и гемагглютинирующей активности вируса в зависимости от заражающей дозы приведены на рисунке 1.

    Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены, в КЭ в зависимости от заражающей дозы вирусов

Рисунок 1 - Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены, в КЭ в зависимости от заражающей дозы вирусов 

Данные рисунка 1. показывают, что рекомбинантные штаммы вируса гриппа А, экспрессирующие бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu-NS1-124- Оmр16-H5N1,     Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,     Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1     со всеми испытанными дозами способены накапливаться в КЭ в достаточно высоких титрах. При этом максимальные значения инфекционной активности вируса были получены при использовании доз в пределах от 1000 до 10 000 ЭИД50.

Наибольшая гемагглютинирующая активность вируса была выявлена в образцах КЭ, инфицированных дозами 10 и 100 000 ЭИД50. Полученные данные показывают зависимость уровня накопления вируса от дозы заражения. С увеличением дозы вируса от 10 до 100 000 ЭИД50 на КЭ отмечается рост титров инфекционной активности. Однако при использовании дозы вируса 1 000 000 ЭИД50 на КЭ, адекватного увеличения как инфекционной, так и гемагглютинирующей активности не последовало, что связано с множественностью инфекции или наличию феномена Фон-Магнуса, при котором образуется большое количество неполных вирусных частиц. Аналогичные результаты получены при определении оптимальной заражающей дозы в КЭ со всеми испытанными рекомбинантными вирусными векторами, экспрессирующими бруцеллезные антигены.

На основании вышеизложенного, оптимальной заражающей  дозой инфицирования КЭ для штаммов Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1 и Flu-NS1-124-Оmр16- H1N1 была принята доза 1000 ЭИД50, а для штаммов Flu-NS1-124-Оmр16-H5N1 и Flu- NS1-124-L7/L12-H1N1 - 10 000 ЭИД50.

Температура инкубации вирусов

Последующими исследованиями было установлено влияние температуры инкубирования на репродукцию вирусов в КЭ. В опытах использовали КЭ 10 сут возраста, которым вводили по 0,2 см3 вируссодержащего материала рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124- L7/L12-H5N1 и Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в дозе 1000 ЭИД50/0,2см3, а штаммы Flu- NS1-124-Оmр16-H5N1   и  Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1  в   дозе  10  000  ЭИД50/0,2   см3.

Инфицированные КЭ инкубировали при температурах 32±0,5ºС, 34±0,5ºС, 36±0,5ºС, 38±0,5ºС и относительной влажности воздуха 55±5% в течение 48 ч. Результаты исследований приведены в рисунке 2.

 Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от температуры инкубирования

 Рисунок 2 - Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от температуры инкубирования 

Из данных рисунка 2 видно, что апробированные температуры инкубирования оказывают существенное влияние на уровень накопления вируса в КЭ. Наибольшее накопление вируса получено в КЭ, инкубация которых проводилась в диапазоне от 32ºС и до 36ºС. Репродуктивная активность рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, NS1-124- Оmр16-H5N1,    Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,    Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1    в    КЭ     при температуре инкубирования 38ºС была ниже, чем при температурах инкубирования 32,

34 и 36ºС. При этом между титрами инфекционной активности вирусов, инкубированных в КЭ при температурах 34 и 36ºС, статистически  достоверной разницы не выявлено (Р>0,100).

Таким образом, на основании полученных экспериментальных данных, в качестве оптимальной температуры инкубирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, NS1-124-Оmр16- H5N1,   Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,   Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1   в   КЭ   нами    выбран диапазон температуры в пределах 32-36ºС.

Возраст КЭ для инфицирования

После определения заражающей дозы и сроков инкубирования инфицированных КЭ определяли уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, NS1-124-Оmр16- H5N1, Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в зависимости от возраста КЭ. С этой целью инфицировали КЭ 9, 10, 11, 12 и 13 сут возраста в дозах 1000-10000 ЭИД50. Одновременно учитывали объем собираемой с каждого эмбриона АЖ в зависимости от возраста используемых эмбрионов, имеющих большое значение в производстве вакцин. Результаты проведенных исследований приведены в рисунке 3.

  Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от их возраста

Рисунок 3 - Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от их возраста

Из данных рисунка 3 следует, что уровень репродукции  рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124- L7/L12-H5N1, NS1-124-Оmр16-H5N1, Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,  Flu-NS1-124-Оmр16-

H1N1 в КЭ во всех исследованных (9-13 сут) КЭ высок, при этом показатель инфекционной активности варьировал на уровне от 7,87±0,22 до 8,78±0,22 lg ЭИД50/см3, а гемагглютинирующая от 1:32 до 1:512. Репродукция вируса в КЭ 12-13 сут. возраста приводит к снижению объема вируссодержащей АЖ и к ухудшению ее качества. По результатам проведенных исследований рекомендуется для выращивания рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены КЭ 10-11 сут возраста.

Срок культивирования вирусов в КЭ

Заключительным этапом в исследованиях по оптимизации условий культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, NS1-124-Оmр16-H5N1, Flu-NS1- 124-L7/L12-H1N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в КЭ было определение оптимального срока культивирования вируса в КЭ. Для этой цели КЭ 10-суточного возраста инфицировали вирусами в дозах от 1000 до 10 000 ЭИД50 с дальнейшим инкубированием при температуре 34ºС в течение 24, 48, 72 и 96 ч. Результаты исследований представлены в рисунке 4.

Из данных рисунка 4 видно, что максимальное накопление рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124- L7/L12-H5N1,    Flu-NS1-124-Оmр16-H5N1,    Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,  Flu-NS1-124-

Оmр16-H1N1 отмечается на 48 ч инкубации, где в образцах АЖ гемагглютинирующий титр составлял от 1:128 до 1:512, а инфекционная активность от 7,95±0,14 до 9,20±0,08 lg ЭИД50/см3. Дальнейшее увеличение сроков инкубирования в КЭ приводило к снижению инфекционной активности рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu-NS1-124- Оmр16-H5N1,  Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,  Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1  на  0,08-0,25    lg

ЭИД50/см3 через 72 ч инкубации и на 0,58 lg ЭИД50/см3 через 96 ч инкубации, а штамм Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 на 0,83 lg ЭИД50/см3 через 72 ч инкубации и на 0,92 lg ЭИД50/см3 через 96 ч инкубации, при этом гемагглютинирующая активность всех образцов гриппозных векторов не изменялась.

Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от сроков инкубирования

Рисунок 4 - Уровень накопления рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены в КЭ в зависимости от сроков инкубирования 

Таким образом, анализируя полученные экспериментальные данные можно заключить, что оптимальным сроком инкубации рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, эксперессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu- NS1-124-Оmр16-H5N1,   Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,   Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1   в  КЭ является 48 ч.

Анализируя полученных данных можно заключить, что рекомбинантные штаммы вируса гриппа А, экспрессирующие бруцеллезные антигены со  всеми апробированными условиями культивирования способны накапливаться в КЭ. Однако при этом максимальный уровень репродукции гриппозных векторов (свыше 8,0 lg ЭИД50/см3) отмечается при соблюдении оптимальных условий культивирования, отработанных в процессе исследований. В результате оптимизаций условий культивирования гриппозных векторов удалось повысить их инфекционную активность по сравнению с исходным показателем на 1-2 порядка. Репродукция бруцеллезных конструкций при температурах культивирования (32-36ºС) была на 0,92 и 1,42 lg ЭИД50/см3 выше по сравнению с высокой температурой (38ºС). На  сегодняшний момент существует ряд публикаций сотрудников НИИПББ по оптимизации условий культивировании рекомбинантных штаммов А/АстанаRG/6:2/2009 (H5N1), А/АстанаRG/5:3/2009 (H5N1) и А/HK/Отар/6:2/2010 вируса гриппа с аналогичными результатами [11, 12].

Наработанные вирусные конструкции: Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu-NS1-124- Omp16-H5N1,        Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1        и        Flu-NS1-124-Omp16-H1N1       с установленными     оптимальными        параметрами     культивирования     несмотря     на дефектность NS1 гена, обладают хорошими репродуктивными свойствами в КЭ.

Заключение

На основании проведенных исследований установлены оптимальные условия культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H5N1, Flu- NS1-124-L7/L12-H1N1, Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 в КЭ, включающие следующие параметры:

  • заражающая доза инфицирования КЭ для штаммов Flu-NS1-124-L7/L12-H5N1 и Flu-NS1-124-Оmр16-H1N1 1000 ЭИД50/0,2см3, а для штаммов Flu-NS1-124-Оmр16- H5N1 и Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1 10 000 ЭИД50/0,2см3;
  • температура инкубирования 34 ºС;
  • оптимальный возраст КЭ 10-11 сут;
  • продолжительность инкубирования 48 ч.

При соблюдении указанных параметров культивирования рекомбинантных штаммов вируса гриппа А, экспрессирующих бруцеллезные антигены Flu-NS1-124- L7/L12-H5N1,    Flu-NS1-124-Оmр16-H5N1,    Flu-NS1-124-L7/L12-H1N1,  Flu-NS1-124- Оmр16-H1N1 можно стабильно получать вируссодержащую АЖ с инфекционной и гемагглютинирующей активностью не менее 8,0 lg ЭИД50/см3 и 1:512 соответственно, что вполне пригодно для приготовления живой векторной вакцины против бруцеллеза КРС.

 

Литература 

  1. Козловский С.В., Емельяненко П.А. Ветеринарная микробиология. – М.: Колос, 1982 . – 304 с.
  2. Колычев Н.М., Росманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология. –М.:     Колос, 2003. – 432 с.
  3. Ассонов Н.Р. Микробиология. – М.: Колос, 2002. – 350 с.
  4. Schurig G.G., Sriranganathan N., Corbel M.J. Brucellosis vaccines: past, present and future // Vet Microbiol. – 2002. – Vol. 90. – P. 479–496.
  5. Ashford A., di Pietra J., Lingappa J., Woods C., Noll H., et al. Adverse events in humans associated with accidental exposure to the livestock brucellosis vaccine RB51 // Vaccine. – 2004. – Vol. 22. – P. 3435–3439. Jiang X. and Baldwin C.L. Effects of cytokines on intracellular growth of Brucella abortus // Infect Immun. – 1993. – V.61 – Р. 124-134.
  6. Tabynov K, Sansyzbay A, Kydyrbayev Z, Yespembetov B, Ryskeldinova S, Zinina N, Assanzhanova N, Sultankulova K, Sandybayev N, Khairullin B, Kuznetsova I, Ferko B, Egorov A. (2014) Influenza viral vectors expressing the Brucella OMP16 or L7/L12 proteins as vaccines against abortus infection. Virol J. 11:69.
  7. Tabynov K, Kydyrbayev Z, Ryskeldinova S, Yespembetov B, Zinina N, Assanzhanova N, Kozhamkulov Y, Inkarbekov D, Gotskina T, Sansyzbay (2014) Novel influenza virus vectors expressing Brucella L7/L12 or Omp16 proteins in cattle induced a strong T-cell immune response, as well as high protectiveness against B. abortus infection. Vaccine. 32(18): 2034-41.
  8. Tabynov K, Kydyrbayev Z, Ryskeldinova S, Yespembetov B, Syrymkyzy N, Akzhunusova I and Sansyzbay A. (2014) Safety of the novel vector vaccine against Brucella abortus based on recombinant influenza viruses expressing Brucella L7/L12 and OMP16 proteins, in cattle. J Vaccines Immun 1:
  9. Reed L J, Muench H. 1938. A simple method of estimating fifty percent Am J Hyg, 27: 493–497.
  10. 2002. WHO manual on animal influenza diagnosis and surveillance. Geneva: World Health Organization.
  11. Ершебулов З.Д., Строчков В.М., Рыскельдинова Ш.Ж. и др. Изучение репродуктивных свойств и генетической стабильности рекомбинантных штаммов A/Astana/RG/5:3/2009 и A/Astana/RG/6:2/2009 вируса гриппа в куриных эмбрионах Международная научная конференция «Современное состояние генетики в Казахстане». Материалы конференции, посвященной 80-летию со дня рождения, 55 летию научно-педагогической деятельности академика НАН РК, Лауреата Государственной премии Казахстана, доктора биологических наук, профессора Ахматуллиной Н.Б. Алматы, Казахстан, 2010.-С.42-44.
  12. Асанжанова Н.Н., Табынов К.К., Кыдырбаев Ж.К. Сравнительное изучение репродуктивных свойств клонов реассортантного холодоадаптированного штамма A/HK/Otar/6:2/2010 (H3N8) вируса гриппа на куриных эмбрионах Материалы научн- практ. конф. молод. учен… «Актуальные проблемы и перспективы биологической безопасности» - 2012. – С. 21-29.

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.