В данной статье представлены результаты изучения изменений окислительного метаболизма липидов крови при длительном воздействии свинца в условиях применения хлорамфеникола и биофениколя. Установлено, что хлорамфеникол повышает окислительный метаболизм липидов крови, а биофеноколь, наоборот, снижает его.
В связи с интенсивным загрязнением воздушного бассейна современного города соединениями свинца за счет выбросов промышленных предприятий и отработанных газов автотранспорта [1] изучение влияния на организм свинца является на сегодняшний день актуальной проблемой.
Исследованиями последних лет доказано, что в основе многочисленных механизмов воздействия токсикантов, в том числе и свинца, на организм лежит их влияние на процессы окислительного метаболизма липидов [2]. Данные процессы являются отражением функционального состояния липидной фазы биомембран. Их повреждение служит первым звеном в цепи нарушений, вызванных действием того или иного агента, которое в дальнейшем заканчивается развитием патологического процесса [3].
Актуальным является также поиск путей коррекции свинцовой интоксикации в организме. В связи с этим нами был использован препарат корня солодки под названием биофениколь [4], состоящий из хлорамфеникола и глицирризиновой кислоты, которая, как известно, обладает выраженными антиоксидантными и антирадикальными свойствами [5], что и обусловило выбор препарата.
Цель исследования. Изучить изменения окислительного метаболизма липидов крови экспериментальных животных при длительном воздействии свинца в условиях применения хлорамфеникола и биофениколя.
Материалы и методы исследования. Объектом исследования явилось 90 белых беспородных крыс-самцов массой 150-160 г. Модель свинцовой интоксикации воспроизводили по методике Н.Н.Тихонова [6] - путем введения в течение 10, 20 и 50 дней интрагастрально 5%-го раствора ацетата свинца в дозе 50 мг/кг массы тела животных.
Все опытные крысы были разделены на 3 группы: 1-я - получавшая лишь ацетат свинца, 2-я - на фоне введения ацетата свинца получавшая хлорамфеникол, 3-я - на фоне введения ацетата свинца получавшая биофениколь. Группа, получавшая биофениколь, в свою очередь, была разделена на 3 подгруппы: 1-я - получавшая биофениколь в течение 10 дней, 2-я - получавшая биофениколь в течение 20 дней и 3-я - получавшая биофениколь в течение 50 дней.
Хлорамфеникол вводился ежедневно интрагастрально в дозе 100 мг/кг массы. Биофениколь вводился ежедневно интрагастрально в дозе 120 мг/кг массы. 15 контрольным крысам ежедневно вводился 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Регистрация анализируемых показателей производилась на 11-е, 21-е и 51-е сутки наблюдения.
Окислительный метаболизм липидов крови при свинцовой интоксикации оценивали по содержанию в эритроцитах крови диеновых конъюгатов (ДК), гидроперекисей липидов (ГПЛ), малонового диальдегида (МДА) и реакции окисляемости липидов (РОЛ) мембран эритроцитов с помощью общепринятых методик.
Определение содержания ДК в эритроцитах крови проводилось согласно методике в модификации В.В. Гаврилова и М.И. Мишкорудной [7] по ультрафиолетовому спектру первичных продуктов окисления ненасыщенных липидов с максимумом поглощения при 233 нм. Содержание ДК выражали в единицах оптической плотности на мг/липидов (ЕОП/мг лип.).
Уровень ГПЛ в эритроцитах крови определяли железо- родонистым методом [8]. В основе метода лежит способность ГПЛ переводить двухвалентное железо (Fe2+) в трёхвалентное (Fe3+), которое образует цветной комплекс с родонидом аммония. Содержание гидроперекисей выражали в ЕОП на мг/лип.
Содержание МДА в эритроцитах крови определяли по модифицированной методике Л.И. Андреевой и соавт. [9]. Прирост МДА за время инкубации отражает скорость перекисного окисления тканевых липидов. При высокой температуре в кислой среде МДА реагирует с 2- тиобарбитуратовой кислотой, образуя окрашенный триметиловый комплекс с максимумом поглощения при 532 нм. Содержание МДА выражали в мкмоль/мг лип.
Реакция окисляемости липидов (РОЛ) мембран эритроцитов определялась по методике В.Ю. Куликова и соавт. [10]. Результаты выражали в ДЕ233 нм за 30 минут инкубации на 150 млн. эритроцитов.
Результаты и их обсуждение. Полученные во время эксперимента данные представлены в таблице 1. Как видно из таблицы 1, при введении 5% раствора ацетата свинца в дозе 50 мг/кг массы в течение 10, 20 и 50 дней содержание ДК в эритроцитах крови увеличилось на 72,5%, 133% и 204%, концентрация ГПЛ в эритроцитах крови - на 83,7%, 167,4% и 383,7% и уровень МДА в эритроцитах крови - на 84%, 153,9% и 430,7% соответственно по сравнению с контрольной группой.
При интрагастральном введении хлорамфеникола в течение 10 дней в дозе 100 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови возросла на 174% и 58,8%, содержание ГПЛ в эритроцитах крови повысилось на 202,4% и 60,7%, уровень МДА увеличился на 112,5% и 15,5%, РОЛ увеличилась на 245,4% и 90% соответственно по сравнению с контрольной и «свинцовой» группами.
При введении хлорамфеникола в течение 20 дней в дозе 100 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови возросла на 294,5% и 69,3%, содержание ГПЛ в эритроцитах крови повысилось на 492,8% и 116,5%, уровень МДА увеличился на 296,6% и 56,2%, РОЛ увеличилась на 518,2% и 142,8% соответственно по сравнению с контрольной и «свинцовой» группами.
При введении хлорамфеникола в течение 50 дней в дозе 100 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови возросла на 631% и 74,7%, содержание ГПЛ в эритроцитах крови повысилось на 700% и 61,5%, уровень МДА увеличился на 748,8% и 59,9%, РОЛ увеличилась на 754,5% и 59,3% соответственно по сравнению с контрольной и «свинцовой» группами.
Таблица 1 Динамика показателей окислительного метаболизма липидов крови при длительном воздействии свинца под влиянием хлорамфеникола и биофениколя
При введении биофениколя в течение 10 дней в дозе 120 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови снизилась на 21,1% и на 50,4% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 36% по сравнению с контрольной группой. Содержание ГПЛ в эритроцитах крови уменьшилось на 38%, и на 61,4% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалось еще увеличенным на 16,7% по сравнению с контрольной группой. Концентрация МДА в эритроцитах крови уменьшилась на 37,2% и 45,6% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 15,5% по сравнению с контрольной группой. РОЛ снизилась на 40% и 68,4% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 9,1% по сравнению с контрольной группой.
При введении биофениколя в течение 20 дней в дозе 120 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови снизилась на 53,6% и на 72,6% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 8% по сравнению с контрольной группой. Содержание ГПЛ в эритроцитах крови уменьшилось на 58,3%, и на 80,7% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалось еще увеличенным на 14,3% по сравнению с контрольной группой. Концентрация МДА в эритроцитах крови уменьшилась на 55,6% и 71,6% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 12,7% по сравнению с контрольной группой. РОЛ снизилась на 57,1% и 82,3% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 9,1% по сравнению с контрольной группой.
При введении биофениколя в течение 50 дней в дозе 120 мг/кг массы на фоне длительного воздействия свинца концентрация ДК в эритроцитах крови снизилась на 60,7% и на 77,5% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 19,5% по сравнению с контрольной группой. Содержание ГПЛ в эритроцитах крови уменьшилось на 76,4%, и на 85,4% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалось еще увеличенным на 16,7% по сравнению с контрольной группой. Концентрация МДА в эритроцитах крови уменьшилась на 79% и 86,9% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 11,3% по сравнению с контрольной группой. РОЛ снизилась на 78% и 86,2% соответственно по сравнению с нелеченой группой и группой, получившей хлорамфеникол, но оставалась еще увеличенной на 18,2% по сравнению с контрольной группой.
Выводы. Таким образом, проведенные исследования показали, что применение на фоне длительного воздействия свинца хлорамфеникола повышает окислительный метаболизм липидов крови, а применение биофеноколя, наоборот, снижает его. Это, вероятнее всего, связано с антиоксидантным и антирадикальным действием входящей в состав биофениколя глицирризиновой кислоты.
Показатели ПОЛ |
Контроль |
Сутки исследования |
|||
11-е сутки |
21-е сутки |
51-е сутки |
|||
ДК (ЕОП/мг лип.) |
20,0±1,38 |
1 2 3 4 5 |
34,5±2,2Ѵ 54,8±3,4* 27,2±1,6* |
46,6± 5,1Ѵ 78,9±3,9* 42,5±2,1* 21,6±1,3* |
60,8 ± 0,05Ѵ 106,2±5,9* 60,3±3,6* 31,6±1,5* 23,9±1,4* |
ГПЛ (ЕОП/мг лип.) |
0,42±0,02 |
1 2 3 4 5 |
0,79±0,03Ѵ 1,27±0,06* 0,49±0,02* |
1,15± 0,09Ѵ 2,49±0,15* 0,96±0,06* 0,48±0,02* |
2,08±0,46Ѵ 3,36±0,16* 1,38±0,08* 0,65±0,04* 0,49±0,03* |
МДА (мкмоль/л) |
7,01±0,32 |
1 2 3 4 5 |
12,9±0,74Ѵ 14,9±0,89* 8,1±0,50* |
17,8±1,9Ѵ 27,8±1,6* 13,1±0,79* 7,9±0,48* |
37,2±2,4Ѵ 59,5±3,5* 17,9±1,1* 10,7±0,64* 7,8±0,54* |
РОЛ (ЕОП на 150 млн.кл.) |
0,11±0,01 |
1 2 3 4 5 |
0,20±0,02Ѵ 0,38±0,03* 0,12±0,01* |
0,28±0,01Ѵ 0,68±0,05* 0,20±0,03* 0,12±0,007* |
0,59±0,04Ѵ 0,94±0,06* 0,31±0,02* 0,18±0,01* 0,13±0,01* |
Примечание - 1 ХСИ;
Д р<0,05 Достоверность по отношению к контрольной группе; *р<0,05Достоверность по отношению кнелеченнойгруппе. |
СПиСОК ЛиТЕРАТУРЫ
- Рахманин Ю.А., Леванчук А.В. Гигиеническая оценка атмосферного воздуха в районах с различной степенью развития дорожноавтомобильного комплекса // Гигиена и санитария. 2016. №95(12). С. 1117-1121.
- Колесникова Л.и., Даренская М.А., Колесников С.и. Свободнорадикальное окисление: взгляд патофизиолога // Бюллетень сибирской медицины. 2017. №16(4). С. 16-29.
- Чеснокова Н.П. и др. О роли активации свободнорадикального окисления в структурной и функциональной дезорганизации биосистем в условиях патологии // Современные проблемы науки и образования. 2009. №5. С. 122-130.
- Ордабаева С.К. Разработка состава и технологии таблеток «Биофениколь» // Фармация Казахстана. 2006. №10. С. 30-33.
- Орманов Н.Ж. и др. Биологическая активность и фармакологические свойства препаратов из корня солодки // Вестник КазНУ. Серия биологическая. 2013. №2 (58). С. 147-151.
- Тихонов Н.и., Атчабаров Б.А., Ежкова Т.С., Шеремет Г.С. Состояние процессов перекисного окисления липидов при экспериментальном свинцовом отравлении // Вопросы гигиены труда, профпатологии и токсикологии в цветной металлургии. Алматы: 1991. С. 83-92.
- Гаврилов В.В., Мишкорудная М.и. Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови // Лабораторное дело. 1983. №3. С. 33-36.
- Мирончук В.В. Способ определения содержания гидроперекисей липидов в биологических тканях // Бюллетень Белорусского Нии кардиологии. 1984. С. 11-12.
- Андреева Л.и., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лабораторное дело. 1988. №11. С. 41-43.
- Куликов В.Ю., Казначеев В.П., Колесникова Л.и., Молчанова Л.В. Пероксидация липидов эритроцитов человека при различных патологических состояниях // Вопросы медицинской химии. 1976. №5, выпуск XXII. С. 617-620.