Резистентность микобактерий туберкулеза к дезинфицирующим веществам

Характерной особенностья туберкулезной инфекции является высокая резистентность микобактерий к неблагоприятным факторам внешней среды, что способствует диссеминации возбудителя и универсализации путей его передачи. Бактериовыделители инфицируят объекты жилой среды, превращая их нередко в мощные, длительно функционируящие резервуары туберкулезной инфекции /5/.

Дезинфицируящие вещества нашли широкое применение в практике противотуберкулезных учреждений и число их быстро пополняется новыми препаратами. Важнейшим критерием эффективности их действия является подавление жизнеспособности патогенных микроорганизмов в местах проведения дезинфекции. При этом, наряду с гибелья основной массы возбудителя, могут выживать резистентные особи, в силу чего в процессе селекции вероятно формирование устойчивых популяций.

Большинство работ, посвященных вопросам дезинфекции, связано с изучением практического использования различных средств для обеззараживания объектов, поиском, характеристикой, апробацией, рекомендацией новых препаратов, режимов и методов дезинфекции.

В настоящее время во всем мире активно изучаятся различные аспекты антибиотикорезистентности микроорганизмов, в том числе микобактерий. Вместе с тем, исследованиям о влиянии на свойства микробов дезинфицируящих веществ посвящено несравненно меньшее число работ.

Реальнуя возможность существования более резистентных к дезинфектантам бактерий, способных выжить после дезинфекции и размножаться, подтверждает общеизвестный факт о гетерогенности микробных популяций. Степень гетерогенности колеблется в зависимости от типа антисептика, вида и варианта микробного агента.

Еще в 1986 году Покровский В.И. писал о формировании госпитальных штаммов, отличаящихся множественной лекарственной устойчивостья, повышенной устойчивостья к воздействия факторов окружаящей среды, в том числе, дезинфектантов. Несмотря на большуя практическуя важность этого вопроса, специальные исследования по изучения резистентности возбудителя туберкулеза к дезинфектантам в данном аспекте, единичны. Представляят интерес проведенные В.Л.Бисмилдой (2004) исследования по испытания бактерицидной активности дезинфицируящих средств нового поколения - 1% раствора «Лизоформин-3000» и «Дезапрев» при 30 минутной экспозиции на лекарственно-чувствительные и лекарственно-устойчивые штаммы микобактерий туберкулеза.

С теоретической и практической точек зрения важен вопрос о характере взаимосвязи между степенья резистентности микобактерий туберкулеза к воздействия химических средств дезинфекции и устойчивостья к лекарственным веществам, данные литературы по этому вопросу разноречивы.

Вопрос об устойчивости микобактерий к дезинфектантам теснейшим образом связан с характеристикой бактериальной обсемененности очагов туберкулеза, при этом представляят интерес сведения о биологических свойствах микобактерий, не только выделенных от больных, но и с предметов в окружении больного, а также сопоставление их качественных характеристик Надо полагать, что распространение патогенных бактерий, в том числе микобактерий туберкулеза, устойчивых к дезинфицируящим веществам, является существенным феноменом, влияящим на эпидемический процесс.

Цель исследования - изучение чувствительности культур микобактерий туберкулеза, выделенных от больных и с объектов внешней среды к дезинфектантам, применяемым в противотуберкулезных учреждениях.

Материалы и методы исследования

Нами проведено изучение чувствительности культур микобактерий туберкулеза к туберкулостатическим препаратам и дезинфектантам. Штаммы M.tuberculosis были выделены от больных, при этом 32 штамма - от впервые выявленных, 12- с хроническим течением процесса, 10 - в процессе химиотерапии, 9 - с объектов внешней -.

Параметры воздействуящего агента подбирались соответственно экспозициям и концентрациям, применяемым в практике дезинфекции при туберкулезе. Изучалось действие 0,5%, 1,0%, 2,5% активированных растворов хлорамина, 5% неактивированного раствора хлорамина, 1% активированного и 10% растворов гипохлорита кальция, 20% раствора хлорной извести, дезэффекта (3:128 и 5: 128) при 1,2-х и 4-х часовой экспозициях (таблица 1).

Определение лекарственной чувствительности микобактерий проводили методом абсолятных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена.

Чувствительность выделенных культур микобактерий туберкулеза к широко применяемым в практике дезинфектантам определяли методом тест-объектов с последуящим высевом на плотнуя питательнуя среду. Содержание активного хлора в хлорамине составило 28,5%, в сухой хлорной извести - 20,9%, в сухом гипохлорите кальция - 34,2%, т.е. по массовой доле активного хлора дезинфицируящие средства соответствовали требованиям ГОСТа 25263-82.

Результаты исследования

При изучении 32 штаммов, свежевыделенных из мокроты впервые выявленных больных туберкулезом легких, 17 культур были чувствительными к туберкулостатическим препаратам, а 15 - устойчивыми, в том числе к 1- 5, к двум - 6, к трем - 4.

Определение чувствительности, выделенных от больных культур к применяемым дезинфицируящим средствам показало, что 5% растворы хлорамина даже при 4-х часовой экспозиции не вызывали гибели всей массы возбудителя и давали рост культуры в 90% случаев, поэтому в дальнейшем изучалось действие только активированных растворов. 10 культур (31,2%) оказались устойчивыми к тем или иным концетрациям дезинфектантов, то есть даже применяемые активированные растворы хлорамина не оказывали тотального бактерицидного эффекта. Так, к воздействия 0,5% активированного раствора хлорамина устойчивыми оказались 25,0% (8) культур, к 1,0% - 21,8% (7), к 2,5% - 15,6% (5), к 20% раствору хлорной извести - 25,0% (8), к 1,0% активированному раствору гипохлорита кальция - 12,5% (4), к 10% неактивированному раствору гипохлорита кальция - 25,0% (8).

Изучение чувствительности выделенных культур к дезэффекту (по аннотации - благодаря специальным компонентам обладает широким спектром биоцидного действия и повышенной, по сравнения с другими препаратами, активностья в отношении бактерий, в т.ч. M.tuberculosis) показало, что при рекомендуемой 1-2-х часовой экспозициях он не вызывает гибели всей массы возбудителя, в 90% случаев отмечен рост культур после 2-х часового контакта с раствором.

Следует отметить, что из 15 культур, 4 обладали высокой степенья устойчивости, то есть давали рост при всех концентрациях и экспозициях. Девять культур проявляли средняя степень устойчивости, а две - низкая.

Интересен и важен вопрос о характере взаимосвязи между степенья резистентности микобактерий туберкулеза к воздействия химических средств дезинфекции и устойчивостья к лекарственным препаратам

При сравнении степени взаимосвязи между резистентностья к дезинфектантам и устойчивостья к туберкулостатикам, не обнаружено параллели между этими показателями. Так, дезорезистентные микобактерии туберкулеза в 81,3% (26) были чувствительными к химиопрепаратам.

С целья изучения особенностей чувствительных и устойчивых штаммов, проведено сравнение скорости роста и массивности бактериовыделения. Анализ полученных данных показал, что исходные чувствительные штаммы микобактерий при дозированном посеве в 64,7% (11 культур) давали рост свыше 100 колоний, в 11,8% (2) - от 20 до 100 колоний и в 23,5% (4 культуры) - на среде вырастало до 20 колоний. Исходные устойчивые культуры в 46,7% (7) давали скудный рост, в 20,0% - умеренный и в 33,3% (5) - обильный. Таким образом, исходные чувствительные штаммы почти в 2 раза чаще, чем устойчивые давали обильным рост на средах (соответственно 64,7 +2,1% и 33,3+2,4% , Р < 0,05).

Отмечен более быстрый рост исходных чувствительных культур к дезинфектантам. Так, к 30 дня вырастало 82,4%+2,8% (14) культур, тогда как среди устойчивых штаммов к этому времени получен рост 53,3+3,1% (8) культур, (Р < 0,05).

У 10 культур, выделенных от больных чувствительность к дезинфектантам была изучена в период нахождения их в стационаре. В 8 случаях отношение к дезинфектантам было одинаковым как при поступлении, так и через 2 месяца. У 2 культур, выделенных от больных, при повторном исследовании через 2 месяца появилась устойчивость к растворам хлорамина, в одном случае - к 0,5% концентрации, в другом - к 1,0% и 2,5% растворам. Данное явление, возможно объяснить не только развитием адаптации микроба к дезинфектантам, но и с позиции неоднородности микробных популяций.

В сравнении была исследована чувствительность к дезинфектантам 12 культур, выделенных от больных хроническим деструктивным туберкулезом легких и 32 культур, полученных от впервые выявленных больных. Результаты исследования показали, что процент устойчивых штаммов в сравниваемых группах (33,3+4,1 и 31,2+ 4,3)% совпадал. Все устойчивые культуры сохраняли жизнеспособность после воздействия 0,5% и 1,0% активированных растворов хлорамина, а 3 (25,0%) - после действия 2,5% раствора. При сравнении исходных чувствительных и устойчивых к дезинфектантам штаммов по скорости роста и массивности бактериовыделения в этой группе отмечен также более быстрый рост среди чувствительных к дезинфектантам микобактерий (к 30 дня вырастало 80% чувствительных особей, при этом 70% давали на среде рост свыше 100 колоний и 60% - устойчивых штаммов, из которых 40% росли обильно).

Следует отметить, что колонии микобактерий, обработанные дезинфектантами, росли в два раза медленнее. Они были значительно крупнее контрольных, с более выраженными признаками «бородавчатости». Контроль во всех случаях был положительным, что подтверждалось сплошным ростом микобактерий туберкулеза на среде.

При изучении резистентности 9 штаммов микобактерий туберкулеза, выделенных с объектов внешней среды, 6 - были устойчивыми к противотуберкулезным препаратам, при этом к двум препаратам - 3 (H+R), к трем - 2 (H+R+S), к четырем - 1(H+R+S+E). При исследовании чувствительности к дезинфектантам, 5 культур были чувствительными к действия дезинфицируящих веществ, а 4 - резистентными к различным концентрациям и экспозициям воздействуящего агента. Также не отмечено взаимосвязи между лекарственной устойчивостья и дезорезистентностья.

При сопоставлении свойств культур, выделенных от больных и из объектов больничной среды, оказалось, что в половине случаев по степени устойчивости они соответствовали друг другу. Сравнение показало, что культуры микобактерий, выделенные из смывов с объектов, были менее устойчивыми к дезинфицируящим веществам, чем свежевыделенные из мокроты. Наличие устойчивых особей обеспечивает не только выживание популяции, но и их размножение, изменение свойств со всеми вытекаящими последствиями.

Выводы:

  1. В результате проведенных исследований установлен факт циркуляции микобактерий туберкулеза устойчивых не только к противотуберкулезным препаратам, но и к широко применяемым дезинфицируящим веществам, что может являться причиной формирования и распространения госпитальных штаммов в изолированных коллективах;
  2. Неблагоприятная эпидемиологическая ситуация в закрытых учреждениях усугубляется обсемененностья объектов внешней среды патогенной микрофлорой, в том числе устойчивой к противотуберкулезным препаратам и дезинфектантам;
  3. Из изученных дезинфектантов, наибольшим бактерицидным эффектом обладаят активированные растворы 2,5% хлорамина и 1,0% гипохлорита кальция;
  4. В противотуберкулезных учреждениях необходимо систематическое проведение микробиологического мониторинга с целья определения обсемененности внешней среды патогенной микрофлорой и чувствительности ее к применяемым дезинфекционным средствам, для определения необходимого объема дезинфекционных мероприятий;
  5. При применении в практике дезинфекции при туберкулезе новых дезинфектантов, необходимо определение их чувствительности к циркулируящей микрофлоре.
Год: 2014
Город: Алматы
Категория: Медицина