Обнаружение ß-адреноблокаторов (Анаприлин, Эгилок) при химико-токсикологической экспертизе

В статье приведены методы обнаружения и количественного определения ß-адреноблокаторов (анаприлина и эгилока) в трупном материале при химико-токсикологической экспертизе с использованием тонкослойной хроматографии, УФ- спектрофотометрии.

В судебно-медицинской практике СКФ РГКП ЦСМ встречаются отравления β-адреноблокаторами, причём, отмечена тенденция использования препаратов этой группы с суицидальной целью. β-адреноблокаторы не вызывают в организме специфических морфологических изменений, поэтому основным способом доказательства отравления являются результаты химико-токсикологической экспертизы.

Эксперементальная часть. Важнейший этап химико-токсикологического анализа это изолирование β-адреноблокаторов из биологического материала. Большинство β-адреноблокаторов слабые основания (рК=9,0-9,8). Вследствие этого для их эффективной экстракции из биологических жидкостей необходима щелочная среда. Липофильность этих соединений значительно варьирует, поэтому важную роль играет правильный выбор растворителя. Изучение растворимости и экстракционной способности анаприлина (пропранолол,обзидан) и эгилока (метапролол, вазокордин) показало, что для их изолирования из биологического материала наилучшим растворителем является вода, затем – этанол. Отсюда следует, что анаприлин и эгилок могут быть изолированы двумя общепринятыми методами- подкисленной водой (по Васильевой) и подкисленным спиртом (по Стасу-Отто). Подкисление проводили серной кислотой до рН 2,0. Для очистки водного извлечения от соэкстрактивных веществ может быть использован эфир при рН 1,0-3,0. Для экстракции анаприлина и эгилока из водного извлечения лучше использовать хлороформ, который позволяет изолировать при рН 9,0 до 97% добавленных анаприлина и эгилока, которые в последующем используется как «свидетели», а из кислой среды при рН 2,0-3,0 экстрагируются они до 17%. Идентификацию выделенных из биообъектов ана- прилина и эгилока проводили по соответствию параметров Rf пятен стандартным растворам анаприлина и эгилока: по цветным реакциям с реактивом Манделина (пятна сине-зелёного цвета и сиреневого цвета соответственно), у анаприлина с концентрированной азотной кислотой пятна синего цвета с переходом от зелёного до жёлтого. Хроматографическое исследование осуществляли восходящим способом на хроматографических пластинках «sorbfil» силикагель СТХ-1А с пробегом фронта растворителей 10 см, в качестве подвижной фазы использовали следующие системы: ¡– метанол: 25%раствор аммиака (100:1,5), II -толуол:ацетон:этанол:25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5). В качестве реактивов по проявлению хроматографических пластинок использовали модифицированный реактив Драгендорфа (ГФ X изд.) (у анаприлина пятна оранжевого цвета, с эгилоком наблюдали пятна малиновооранжевого цвета), раствор п-диметиламинобезальдегида в концентрированной серной кислоте (у анаприлина рыжие пятна на белом фоне), с реактивом, состоящим из формальдегида в концентрированной серной кислоте (1:10) (у анаприлина пятна бирюзового цвета), с реактивом Либермана, состоящим из 1г нитрита натрия в 10мл концентрированной серной кислоты у эгилока наблюдали быстроисчезающие пятна темно-коричневого цвета, обнаружить анаприлин и эгилок с продуктами их разложения позволяет обработка пластинки 50% водным раствором этилендиамина, нагревание до полного удаления паров избытка реактива и просмотр пластинки в УФ-свете(254нм), в результате этого у анаприлина наблюдали жёлто-зелёнаю флюоресценцию на тёмном фоне, у эгилока наблюдали темно-зеленую флюоресценцию на светло-зеленом фоне. При хроматографическом исследовании обнаруженные вещества располагались параллельно стандартному образцу анаприлина и эгилоеа, проявлялись соответствующими реактивами с аналогичными окрасками в системах^- Rf 0,49; II- Rf 0,55(анаприлин) и I- Rf 0,43; II- Rf 0,50(эгилок). Предел обнаружения анаприлина по сумме реакций составил 0,2 мг в 100г органа.

Методика. Определение количественного содержания анаприлина и эгилока в трупном материале покажем на примере проведённых экспертиз, так как сама методика спектрофотометрического количественного определения плохо изучена и вызывает затруднения на «Спекорд205». Количество экстрагируемых анаприлина и эгилока и определения их с количественным содержанием в трупном материале определяли по калибровочному графику спектрофотометрическим методом на «Спекорд205», раствором сравнения служила 0,1н серная кислота. Определение их проводили после предварительной хроматографической очистки на пластинке покрытой слоем силикагеля. Элюировали 10 мл 0,1н. серной кислоты. Из двух максимумов поглощения области 220 и 290 нм (у анаприлина), 225 и 275 нм (у эгилока) использовали последние, так как до 240 нм поглощают вещества естественного состава организма человека. Для приготовления стандартного раствора 0,05г анаприлина растворяли в мерной колбе емкостью 50 мл в 0,1н растворе серной кислоты. 10мл полученного растворапереносили в мерную колбу на 100мл, объем доводили до метки 0,1н раствором серной кислоты (100мкг/мл). По 20, 10 и 5мл полученного раствора переносили в мерные колбы на 100мл, объемы доводили до метки 0,1 н раствором серной кислоты. В 1мл полученных стандартных растворов содержится 0,02мг, 0,01мг и 005мг анаприлина. Отмечались характерные максимумы анаприлина при 220 нм и 290 нм в стандартных растворах и в извлечениях. Расчет содержания анаприлина производили по стандартному раствору, содержащему 100мкг анаприлина в 1мл 0,1н серной кислоты при длине волны 290нм (рис.1стандартный раствор анаприлина-1, извлечение из щелочной среды ткани почки-2). Для приготовления стандартного раствора 0,05г эгилока растворяли в мерной колбе емкостью 50 мл в 0,1н растворе серной кислоты. 10мл полученного раствора переносили в мерную колбу на 100мл, объем доводили до метки 0,1н раствором серной кислоты (100мкг/мл). По 5, 10, 20, 50 мл полученного раствора переносили в мерные колбы на 100мл, объемы доводили до метки 0,1 н раствором серной кислоты. В 1мл полученных стандартных растворов содержится 5мкг/мл, 10мкг/мл, 20мкг/мл, 50мкг/мл эгилока. Отмечались характерные максимумы светопоглощения эгилока при 225нм и 275 нм. Расчет содержания эгилока производили по стандартному раствору, содержащему 20мкг эгилока в 1мл 0,1н серной кислоты при длине волны 275нм (рис. 21стандартный раствор эгилока-1, извлечение из щелочной среды ткани почки-2). Формула для расчета анаприлина и эгилока:

Duucc.xCcm.x50x100

Dcc ..∖'Γ∖'l0.∖'l000

где

Х – содержание анаприлина (эгилока) в 100г биологического материала (в мг);

⑉ст. - оптическая плотность стандартного раствора;

Dиссл. - оптическая плотность исследуемого раствора;

V - объём хлороформного извлечения, взятый для анализа, мл;

Сст. - концентрация анаприлина (эгилока) в стандартном растворе (100мкг/мл);

50 - общий объём хлороформного извлечения, мл; 100/10 - пересчет на 100г биологического материала; 1000 - перевод мкг в мг.

Выводы

1. Изучение растворимости и экстракционной способности анаприлина и эгилока показало, что для их изолирования из биологического материала наилучшим растворителем является вода, затем этанол. Отсюда следует, что анаприлин, эгилок могут быть изолированы двумя общепринятыми методами - подкисленной водой и подкисленным спиртом.
2. Для экстракции анаприлина и эгилока из водного извлечения лучше использовать хлороформ.
3. Для очиски водного извлечения от соэкстрактивных веществ может быть использован эфир при рН от 1,0 до 3,0.
4. Представлена апробированная методика количественного спектрофотометрического определения анапри- лина и эгилока в трупном материале.

Литература:

1. « Судебная химия» Медицина 1965г.М.Д.Швайкова.
2. «Химико- токсикологический анализ» Киев, 1982г.В.Ф.Крамаренко.
3. «Судебно-медицинская экспертиза» №2 1982г. (стр. 41-42),. №4 1982г. (стр. 44-45).
4. «Практикум по токсикологической химии» Карташов В.А., Чернова Л.В., 2004г.
5. Сборник научных трудов. Москва,1986г «Химикотоксикологический анализ ß-адреноблокаторов» Тихонов В.В., стр.195.
6. Научно-практический журнал № 2 (том 7 апрель-июнь 2007). Проблемы экспертизы в медицине. « Случай острого отравления лекарственным веществом группы избирательных (кардиосе- лективных) ß-адреноблокаторов- метопролол(эгилок)».
7. Информационный листок. Москва1988г «Судебно-химическое определение корданума в трупном материале»
8. «Фармация» № 4 1981г.
9. «Сочетание различных методов для определения лекарственных веществ» В.А. Панов, А.Н.Лаврешин, Е.С.Мизелева, Москва, 2002г.