Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

Современный подход к анализу олигопептидов методом вэжх-мс/мс

Лекарственные средства пептидной природы обладают избирательным действием, оказывают фармакологический эффект при низких концентрациях в крови, к тому же считаются относительно безопасными для применения [1]. В настоящее время препараты пептидной природы приобретают все большее распространение на рынке, проводятся их клинические и доклинические исследования фармакокинетики, что в свою очередь требует создания соответствующих биоаналитических методик. При определении пептидов в биологических образцах требуется высокая чувствительность методики, так как данные вещества обычно активны в низких концентрациях. В свою очередь при работе с биологическими образцами, имеющими сложный состав, необходима высокая селективность аналитического метода. В связи с вышесказанным для определения пептидов часто используется метод ВЭЖХ-МС/МС.

Данное исследование посвящено решению проблем, возникающих при разработке методики количественного определения олигопептидов методом ВЭЖХ-МС/МС. Во-первых, большая молекулярная масса олигопептида (до 10 000 Да) не всегда позволяет определить однозарядные ионы исследуемого вещества, поскольку верхний предел сканирования отношений m/z составляет около 2000 для наиболее распространенных квадрупольных масс-анализаторов. Во-вторых, молекулы олигопептидов довольно часто обладают большим количеством кислотных и основных центров, что обеспечивает многообразие n-зарядных ионов при ионизации электрораспылением [2]. В-третьих, молекулярные ионы олигопептидов не всегда склонны к фрагментации при столкновении с атомами инертного газа (Collision-induced dissociation – CID) из-за эффективной делокализации заряда и устойчивых внутримолекулярных связей, что затрудняет использование высокоселективного режима детектирования путем мониторинга множественных реакций (multiple reaction monitoring, MRM) [3]. Также следует отметить гидрофильную природу многих олигопептидов, что осложняет выбор условий разделения методом обращенно-фазовой хроматографии. Целью данного исследования была демонстрация способов решения обозначенных проблем на примере тетрадекапептида(треонил-глутамил-лизил-лизил-аргинил-аргинил-глутамил- треонил-валил-глутамил аргинил-глутамил-лизил-глутамата).

Теоретически рассчитанная молекулярная масса исследуемого тетрпдекапепида составила 1818,02 Да. Получен масс-спектр нативного тетрадекапептида при ионизации электрораспылением. Наблюдается ряд n- протонированных квазимолекулярных ионов, значения m/z которых рассчитываются по формуле: m/z = (M + nH+) / n, что полностью согласуется с теоретически рассчитанными для исследуемого вещества (909,9, 607,0, 455,5, 364,6) (рис.1).

A

b

Рисунок 1. Масс-спектр нативного вещества (a) и пропионилированного производного(b) при положительной ионизации электрораспылением.

Вместе с тем, данные ионы практически не подвергаются фрагментации в ячейке соударений, что исключает работу в режиме MRM, поэтому было принято решение о проведении дериватизации исследуемой молекулы. В качестве дериватизирующих агентов были рассмотрены: дансилхлорид, тозилхлорид, фенилизотиоционат (ФИТЦ), пропионовый ангидрид [4]. Для всех производных были получены масс-спектры, согласующиеся с теоретическими расчетами.

Все производные в отличие от нативного пептида демонстрировали хорошее удерживание на колонке с сорбентом С18, поскольку в дериватизации участвуют аминогруппы, и продукты замещения обладают более высокой липофильностью. Однако, обнаружено, что дансилированные производные тетрадекапептида практически не подвергаются фрагментации, как и нативная форма. В случае тозилированных и ФИТЦ- производных удалось достигнуть незначительной фрагментации ионов, но при этом был затруднён контроль полноты протекания дериватизации в модельных образцах плазмы крови.

Лучшие результаты были получены при взаимодействии тетрадекапептида с пропионовым ангидридом. При этом для модельного образца плазмы крови удалось подобрать условия реакции, исключающие получение 3-замещённых производных в пользу 4-замещённых. В результате проведенной работы удалось достичь CID-фрагментации 4-пропионилированного производного тетрадекапептида, что позволило подобрать и оптимизировать условия детектирования в MRM-режиме.

Таким образом, изучены особенности хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования тетрадекапептида, а также продуктов его взаимодействия с дансилхлоридом, тозилхлоридом, ФИТЦ-реагентом и пропионовым ангидридом. Установлено, что наиболее перспективна для разработки биоаналитической методики дериватизация тетрадекапептида пропионовым ангидридом.

 

Список литературы

  1. Бабина С.А. Желтышева А.Ю., Шуклин Г.О., Шуклина А.А., Япаров А.Э., «Лекарственные средства на основе пептидов: применение, технологии получения,» Международный студенческий научный вестник, № 3, pp. 21-21, 2019.
  2. Miladinović SM, Fornelli L, Lu Y, Piech KM, Girault HH, Tsybin YO, «In-spray supercharging of peptides and proteins in electrospray ionization mass spectrometry,» Analytical chemistry, № 84(11), pp. 4647-51, 2012.
  3. Ciccimaro E, Ranasinghe A, D’Arienzo C, Xu C, Onorato J, Drexler DM, Josephs JL, Poss M, Olah T., «Strategy to improve the quantitative LC-MS analysis of molecular ions resistant to gas-phase collision induced dissociation: application to disulfide-rich cyclic peptides,» Analytical chemistry, № 86(23), pp. 11523-7, 2014.
  4. Koller M, Eckert H., «Derivatization of peptides for their determination by chromatographic methods,» Analytica chimica acta, № 352(1-3), pp. 31-59, 1997.
  • Год: 2021
  • Город: Шымкент
  • Категория: Медицина

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.