Резюме
Проведена валидация методик идентификации, количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственной форме по показателям “Специфичность”, “Правильность”. Методика соответствует валидацион- ной характеристике “Специфичность”, “Правильность”. Поскольку t =0,94 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки свободными от систематической ошибки.
Ключевые слова: валидация, аскорбиновая кислота, специфичность, правильность
Как известно, валидация на фармацевтическом производстве установлена в разделе “ Валидация” ОСТ 42-510-98 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств GMP». Пунктом 7.1. данного документа сформулировано следующее :«Валидация заключается в документированном подтверждение соответствия оборудования, условий производства, технологического процесса, качества полупродукта и готового продукта действующим регламентом и/или требованиям нормативной документации »(3). Следовательно, предприятие должно провести проверку и оценку надежности всех элементов производственного цикла для того, чтобы подтвердить свою способность стабильно выполнять соответствующий технологический регламент производства и выпускать готовый продукт, характеристики которого удовлетворяют требования соответствующей фармакопейной статьи, и письменно зарегистрировать полученные результаты и выводы (4). Так, цель валидации аналитических методик- демонстрация их пригодности для решения предполагаемых задач, т.е. установления измеряемых и оцениваемых показателей качества лекарственных средств,то есть пригодности проведения контроля качества. При валидации методик для оценки качества лекарственного препарата по показателю « Правильность», как правило, используются несколько методов. Все руководства по валидации методик измерений рекомендуют оценивать параметр “ Правильность” в ходе контролируемого эксперимента с использованием специально подготовленных проб с известным содержанием анализируемого вещества или в сравнении результатов, полученных при использовании другой давно используемой методики. Нами использован метод оценки на модельных смесях « плацебо».
Проведена валидация методик идентификации с различными реактивами. Приведена валидационная оценка методики количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственной форме по показателям “Специфичность”, “Правильность”. Методика соответствует валидационной характеристике “Специфичность”, “Правильность”. Поскольку t =0,94 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки свободными от систематической ошибки.
Возрастающие требования к безопасности, эффективности и качеству лекарственных средств обуславливают необходимость разрабатывать новые, а также стандартизовать существующие методы их анализа. Любая аналитическая методика должна быть утверждена в установленном порядке, что подтверждает ее метрологическая аттестация. Для этой цели в фармацевтической практике используют метод валидации, то есть экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для выполнения поставленных задач (1).
Цель и задачи исследования. Провести валидационную оценку методик качественного и количественного анализа кислоты аскорбиновой в растворе для инъекций по показателю “Специфичность”, “Правильность” .
Материалы и методы. Аскорбиновая кислота, титриметрия.
Результаты и обсуждение. Под специфичностью методики следует понимать способность достоверно определять анализируемое соединение в присутствии других компонентов образца – лекарственных веществ, вспомогательных веществ и посторонних примесей (включая потенциально возможные).
Для определения специфичности методики приготовили согласно прописи три модельных смеси (таб.1). Для установления специфичности в идентификационных тестах, основанных на качественных реакциях отмечено, что в отсутствии положительного эффекта реакции на сопутствующие вещества, так и в возможности ингибирования данной реакции компонентами образца.
Так, провели установление специфичности следующих реакций:К 1 мл каждой модельной смеси прибавляли 0,5 мл раствора серебра нитрата (для 5 % раствора);
С модельными смесями 1 и 2 выпадал темно-серый осадок (кислота аскорбиновая), с модельной смесью 3 осадок не образовывался.К 0,2 мл каждой модельной смеси разбавляли 10 мл воды и прибавляли по каплям раствор натрия 2, 6-дихлор-фенолиндофенолята;С модельными смесями 1 и 2 синяя окраска последнего исчезала (кислота аскорбиновая), с модельными смесями окраска сохранялась.
Таблица 1 - Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой
|
Модельная смесь |
1 |
2 |
3 |
|
Навеска кислоты аскорбиновой (г) |
5,0 |
5,0 |
|
|
Трилона Б (г) |
0,025 |
0,025 |
|
|
Натрия гидрокарбоната(г) |
2,385 |
2,385 |
|
|
Натрия сульфита безводного(г) |
0,200 |
0,200 |
|
|
Воды для инъекций |
До 100 мл |
До 100 мл |
До 100 мл |
Методики, используемые для количественного определения также подвергались валидационной оценке по данному критерию. Главным является то, что растворители и сопутствующие компоненты не вступили в реакцию с титрантом, а также необходимо убедиться в специфичности индикатора. При анализе конкретных объектов приготовили модельную смесь и провели титрование. Поскольку, в ряде случаев, затрачивается часть титранта на взаимодействие с растворителем, проводился контрольный опыт.
Таблица 2 -Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой
|
Модельная смесь |
1 |
2 |
3 |
|
Навеска кислоты аскорбиновой (г) |
4,0 |
5,0 |
6,0 |
|
Трилона Б (г) |
0,02 |
0,025 |
0,03 |
|
Натрия гидрокарбоната (г) |
1,908 |
2,385 |
2,862 |
|
Натрия сульфита безводного (г) |
0,16 |
0,200 |
0,24 |
|
Воды для инъекций |
До 100 мл |
До 100 мл |
До 100 мл |
Так, провели установление специфичности йодатометрической методики количественного определения аскорбиновой кислоты: К 1,0 мл каждой модельной смеси прибавляли 5 мл воды и титровали 0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек. При этом установлено, что на титрование модельной смеси 1 и 2 затрачены равные количества титранта, модельная смесь 3 в данных условиях не титровалась.
Также валидировалась эта методика по показателю правильность. Как известно, правильностью аналитической методики называется степень близости экспериментальных результатов к истинному значению во всей области измерений. Главным фактором, определяющим правильность, является значение систематической погрешности. Согласно рекомендациям ICH необходимо проанализировали не менее 9 образцов на 3 уровнях концентраций. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием послужила открываемость (R) (2). Результаты приведены в таб.3.
Таблица 3 - Результаты определения правильности методики йодатометрического
количественного определения
|
№ п/п |
Уровень |
Взятомодельной смеси,(г или мл) |
Взятолекарств енного вещества, г |
Объем титранта, мл |
Найденолекарст венного вещества, г |
Открываем ость |
Метрологи ческие характ-ки |
|
1 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
4,9 |
0,0406 |
101,4 |
100,4 SD=1,913 RSD=1,27 t=0.94 |
|
2 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
5,8 |
0,0474 |
102,3 |
|
|
3 |
1 |
1,0 мл |
0,04 |
5,0 |
0,0412 |
103,5 |
|
|
4 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,7 |
0,0498 |
99,6 |
|
|
5 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
5,9 |
0,0488 |
97,7 |
|
|
6 |
2 |
1,0 мл |
0,05 |
6,1 |
0,0502 |
100,4 |
|
|
7 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,4 |
0,0607 |
101,6 |
|
|
8 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,2 |
0,0590 |
98,4 |
|
|
9 |
3 |
1,0 мл |
0,06 |
7,2 |
0,0595 |
99,1 |
Таким образом, R должна находиться в пределах от 98 до 102, следовательно, данная методика соответствует валидационной характеристике “Правильность”. Поскольку t =0,94 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки результатов свободными от систематической ошибки.
Выводы: Проведена валидация методик идентификации, количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственной форме по показателям “Специфичность”, “Правильность”. Методика соответствует валидационной характеристике “Специфичность”, “Правильность”. Поскольку t =0,94 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки свободными от систематической ошибки.
Литература
- Лекарственные растения и лекарственное растительное сырье, Содержащие витамины, поли-сахариды, жирные масла /Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов фармацевтического факультета//Издательско-полиграфический центр Воронежского государственного университета. – 2008. - 88 с.
- Оценка правильности количественного определения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника тремя колориметрическими методами / Е.В. Зыкова, Г.П. Дудченко, В.Г. Зайцев, Е.В. Денежко, О.В. Островский // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр.– Пятигорск, 2008. – Вып. 63. – С. 254-255.
- Валидация аналитических методик для производителей., Москва, Издательство “ Литерра”, 2008.- С.70.
- ОСТ 42-510-98 “ Правила производства и контроля качества лекарственных средств GMP».
- Ж.И.Аладышева, В.В.Береговых, А.П.Мешковский,Л.М.Левин./Основные принципы проведения валидации на фармацевтическом производстве., Москва- С.73.