Резюме Ввиду целебных свойств кунжутного масла и его большой пользы в практической медицине важно более тщательное изучение свойств кунжутного масла и создание на его основе лекарственных средств. Для изучения и определения α–токоферолов (витамина Е) в кунжутном масле использовалась методика высокоэффективной жидкостной хроматографии. Результаты проведенных исследований, показывают, что содержание α-токоферола в кунжутном масле составляет в среднем 191,4 мг/%, а ошибка предлагаемой методики находится в пределах допустимого.
Ключевые слова: кунжутное масло, α–токоферол, витамин Е, высокоэффективная жидкостная хроматография, жирорастворимые витамины.
Кунжутное масло – это древнейшее целительное средство, которым лекари пользовались ещё во времена египетских фараонов. Растение кунжут культивируется с древнейших времен (более 7000 лет назад) и по сей день, ввиду наличия полезных свойств кунжутного масла, так как этот продукт позволяет
добиться таких результатов, которые труднодостижимы или вовсе недостижимы средствами ортодоксальной западной медицины. Упоминания о целебной силе кунжутных семян встречаются в медицинских трактах Авиценны, а в древнем Египте кунжутное масло уже в 1500 г до н.э. находило широкое применение в народной медицине [1]. Кунжутное масло прежде всего является источником полезных жиров. В состав преимущественно входят мононенасыщенная олеиновая жирная кислота и полиненасы- щенная жирная кислота омега-6 класса – линолевая. Кунжутное масло также содержит высокую концентрацию токоферола (Витамин Е), а также витамины А и К и др. Ввиду такого богатого состава кунжутного масла, высокой концентрации α–токоферола (Витамина Е) и его большой пользы в практической медицине важно более тщательное изучение свойств кунжутного масла и создание на его основе лекарственных средств.
Цель исследования: определение α–токоферола (Витамина Е) в кунжутном масле.
Анализ литературы за последние годы показал, что при контроле качества лекарственных препаратов, содержащих витамин Е, предпочтение отдается физико-химическим методам, как наиболее экспрессным, чувствительным и информативным [2, 3].
Материалы и методы исследования. Более объективные качественные и количественные анализы позволяют получить хроматографические методы, из которых наибольшее распространение получила высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). ВЭЖХ - наиболее быстрый и точный метод анализа жирорастворимых витаминов. Высокоселективные детекторы позволяют определять микроколичества веществ в сложных смесях. По времени удерживанию и симметричности пиков нами выбраны следующие условия для хроматографирования: высокоэффективный жидкостной хроматограф марки
Agilent Technologies, 1200 series; колонка Zorbax XDB С - 18, размером 150x4,6 мм, заполненную сорбентом с размером частиц 5мкм; температуру колонки поддерживали при 30°С; детектирование проводили при длине волны 230 нм; подвижная фазы - метанол: очищенная вода (97:3); скорость подвижной фазы 1,2 мл/мин; объем вводимой пробы - 20 мкл.
Хроматограммы представлены на рисунках 1 и 2.
Как видно из представленных рисунков, время удерживания α - токоферола в кунжутном масле совпадает со временем удерживания пика рабочего стандартного образца α - токоферола - 14,0 мин.
Для получения достоверных результатов анализа, подготовку пробы из сырья для ВЭЖХ проводили следующим образом: около 5,0 г (точная навеска) помещали в коническую колбу вместимостью 50 мл и прибавляли 50 мл гексана (1:5), перемешивали и оставляли в защищенном от света месте на 24 часа при комнатной температуре (20°С), периодически перемешивая. По истечению времени массу фильтровали через бумажный фильтр, затем промывали экстрагентом в коническую колбу вместимостью 100 мл.
Экстрагент отгоняли водяной бане при температуре не выше 50 °С в токе азота. Для выделения α— токоферола, к сухому остатку добавляли 0,2 г аскорбиновой кислоты, 10 мл свежеприготовленного раствора едкого натрия с концентрацией 1 моль/л и нагревали с обратным холодильником при температуре кипения смеси на водяной в течение 30 мин. Содержимое колбы охлаждали до комнатной температуры, и количественно переносили в длительную воронку 50 мл очищенной воды. Неомыляемую часть экстрагировали эфиром один раз 50 мл диэтилового эфира и два раза по 30 мл. Объединённый экстракт промывали водой порциями по 30 мл до исчезновения щелочной реакции промывных вод (проба с фенолфталеином). Экстракт медленно фильтровали через бумажный фильтр, на который помещено около 8 г безводного сернокислого натрия, в круглодонную колбу вместимостью 250мл. Сернокислый натрий промывали три раза эфиром порциями по 10 мл, сливая раствор ту же колбу. Эфир отгоняли на водяной бане при температуре не выше 40 °С в токе азота. Сухой остаток растворяли в 96 % этиловом спирте [2,4].
Приготовление раствора рабочего стандартного образца (РСО) α—токоферола. 0,0611 г (т.н.) α- токоферола помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл и растворяли в абсолютизированном спирте до метки (раствора А). Из раствора А с помощью пипетки взяли 1 мл, также разбавляли в мерной колбе вместимостью 25 мл до метки тем же раствором.
Полученные растворы фильтровали, через фильтр "Миллипор", с размером частиц пор 0,45 мкм и хроматографировали в выше указанных условиях. На основании площади пиков рассчитывали количественное содержание α—токоферола в кунжутном масле по следующей формуле:
Где S1; S0- площади пиков исследуемого образца и стандарта, соответственно; a1; a0- навески кунжутного масла и стандартного образца, г; V10разв; V30разв - объем, в котором растворяли стандарта; V11разв; V20разв - объем аликвоты образца и стандарта; W - потеря в массе при высушивании сырья, %.
Результаты и обсуждения исследования. Результаты количественного содержания представлены в таблице ниже.
Таблица - Метрологические характеристики методики ВЭЖХ количественного определения α-токоферола в кунжутном масле (при f=4; t=2,78; Р=95%)
|
№ |
Навеска образца, г |
Хмг% |
Метрологические характеристики |
|
1 |
5,0003 |
191,4 |
|
|
2 |
5,0012 |
191,5 |
|
|
3 |
5,0020 |
191,6 |
|
|
4 |
5,0055 |
191,3 |
|
|
5 |
5,0060 |
191,3 |
Выводы. Результаты проведенных исследований, представленных в таблице показывают, что содержание α-токоферола в кунжутном масле составляет в среднем 191,4 мг/%, а ошибка предлагаемой методики находится в пределах допустимого. Таким образом, нами разработана методика разделения, обнаружения и определения количественного содержания α-токоферола в кунжутном масле методом ВЭЖХ.
Литература
- Ибн Сина Абу Али. Канон врачебной науки: Пер. с. араб. -2-е изд. – Ташкент, 1980. – Кн. 5. – С. 129-130.
- Анышков В.И., Алпеева И.С., Брыкина Г.Д., Лазарева Е.Е. Определение витамина Е методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с косвенным спектрофотометрическим детектированием Вестн. моек, ун-та. Сер. 2. Химия. 2000. Т. 41. № 4 -С.233-235
- Беляев Д.С., Тхинь Ф.В., Хорохордина Е.А. и др. Экспресс - анализ триглицеридов и биологически активных компонентов растительных масел методом микроколоночной ВЭЖХ с УФ - детектором // Тез. Докл. 3-ей Всероссийской научно - методической конференции: Фармобразование - 2007. -Воронеж, 2007. - С. 66-68
- Прохватилова С.С. Определение витамина Е в фармацевтических препаратах методом ВЭЖХ. Фармация, 1998.-№3.-С.41-44
- Сизова Н.В., Андреева Н.Ю. Определение витамина Е в растительных маслах методом микрокалориметрии // Химико-фармацевтический журнал. - Москва, 2007. -№6 (41). -С.49-52