Значимость дистантного ишемического прекондиционирования в кардиопротекции при ишемии-реперфузии миокарда у крыс с экспериментальной гиперлипидемией

Введение. Ишемическая болезнь сердца является основной причиной смертности в большинстве развитых стран мира, в том числе и в Республике Беларусь [3]. Поиск новых методов предотвращения или ослабления ишемического повреждения сердца остаются существенной задачей современной клинической и эксперимен-тальной медицины [2, 3]. Объектом внимания ученых в области кардиологии являются кардиопротекторные эффекты дистантного ишемического прекондиционирования (ДИПК), которое воспроизводится ишемией конечности до острой ишемии миокарда [2, 4]. Необходимость кардиопротекции от ишемического и реперфузионного повреждения чаще необходима пациентам с факторами риска сердечнососудистых заболева-ний, к которым относится и гиперлипидемия (ГЛЕ) [1].

Цель: выяснение воспроизводимости кардиопротекторных (противоишемических и антиаритмических) эффектов ДИПК при ишемии и реперфузии миокарда у крыс с экспериментальной ГЛЕ.

Материалы и методы исследования. Исследование кардиопротекторной эффективности ДИПК выполнено на 39 наркотизированных нелинейных белых крысах-самцах (масса 225±25 г, возраст 3-4 мес.), разделенных на 4 группы: Контроль (n=7), Контрольгле (n=11), ДИПК (n=7), ДИПКгле (n=14). ГЛЕ моделировалась однократным интрагастральным введением 10% р-ра холестерола на оливковом масле в дозе 10 мл/кг в течение 10 дней, крысам без ГЛЕ вводился 0,9% р-р NaCl (Ф.Р.). Для наркотизации животных внутрибрюшинно вводился тиопентал натрия в дозе 50 мг/кг. Крысы с помощью аппарата ИВЛ переводились на искусственное дыхание. ЭКГ регистрировалась во II стандартном отведении.

Моделирование постинфарктной сердечной недостаточности у крыс осуществляли путем окклюзии левой коронарной артерии [5]. Для этого наркотизированным животным вскрывали грудную клетку в IV межреберном промежутке слева. После 15-минутной стабилизации гемодинамики осуществляли 30-минутную окклюзию левой коронарной артерии путем ее механического пережатия фишкой. Окклюзия артерии идентифицировалась синюшностью ишемизированной участка, снижением АД на 15±5 мм рт. ст. и подъемом сегмента ST на ЭКГ. Реперфузия миокарда осуществлялась простым удалением фишки. Подтверждалась реперфузия исчезновением синюшности ишемизированного участка и возвратом сегмента ST на изолинию. Период реперфузии продолжался 120 минут. Животные, у которых воспроизводилось ДИПК, дополнительно подвергались воздействию 15-минутной окклюзии обеих бедренных артерий за 25 мин до 30-минутной острой ишемии миокарда.

Зону риска определяли с помощью внутривенного введения в левую общую яремную вену 0,5 мл 5% р-ра Эванс синий в конце реперфузии при непродолжительной повторной окклюзии левой коронарной артерии. Эванс синий окрашивает только перфузируемый миокард, а неперфузируемый остается неокрашенным, поэтому зона риска определялась как не окрашенная в синий цвет. Затем сердце извлекалось из грудной клетки и проводилось отделение левого желудочка сердца для дальнейшего изучения. Левый желудочек замораживали в морозильной камере при -20°С (30 мин), после чего его разрезали на 6 поперечных срезов размером по 1,5 мм. Срезы взвешивались на торсионных весах, затем проводилось их сканирование при помощи сканера Epson с обоих сторон. После этого, для идентификации зоны некроза, срезы помещали в 1% р-р трифенилтетразолия хлорида на 15 минут (37°С). Жизнеспособный миокард (клетки, которые сохранили дегидрогеназную активность) окрашивался в ярко-красный цвет, а некротизированная ткань оставалась неокрашенной (белесой). После 24часовой инкубации срезов в 10% р-ре формалина проводилось повторное сканирование срезов для определения отношения площади зоны некроза ко всей зоне риска. Размеры зоны риска и зоны некроза определяли в программе Adobe Photoshop СС 2018. Полученные в ходе выполнения исследования результаты вносились в таблицу Microsoft Excel 2013 и обрабатывались в программе Statistica 10. Статистическая значимость различий, полученных данных, оценивалась при помощи теста множественных сравнений Данна и дисперсионного анализа ANOVA. Данные представлены в виде M±m. Значения р<0,05 рассматривались как достоверные.

Для оценки антиаритмического эффекта ДИПК подсчитывалась общая длительность аритмий – пароксизмальные желудочковые тахикардии, фибрилляции желудочков, желудочковые бигеминии, парные желудочковые экстрасистолии – при ишемии-реперфузии миокарда. По полученным данным рассчитывалась медиана (Me) и интерквартильный размах (25-й; 75-й процентили). При сравнении групп использовали критерий Крускала–Уоллиса и тест множественных сравнений Данна.

Результаты исследования. С учетом выживаемости крыс с ГЛЕ после острой коронарной окклюзии для последующего анализа было отобрано по 7 животных: Контроль (n=7), Контрольгле (n=7), ДИПК (n=7), ДИПКгле (n=7). Для подтверждения ГЛЕ у животных с помощью автоматического анализатора Random Access A-25 (BioSystems, Испания) определялось содержание общего холестерола (ОХ) и триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови. У крыс с ГЛЕ содержание ТГ в сыворотке крови составило 1,54±0,12 ммоль/л (р<0,01), ОХ – 5,86±0,38 ммоль/л (р<0,01). У крыс без ГЛЕ содержание ТГ составило 0,62±0,06 ммоль/л, ОХ – 2,62±0,09 ммоль/л. Так, у крыс с ГЛЕ имело место повышение содержания ТГ в 2,5 раза и ОХ в 2,2 раза по сравнению с их содержанием у крыс без ГЛЕ.

Продолжительность аритмий при ишемии-реперфузии миокарда у крыс были следующими: в группе Контрольгле – 316 (137; 563) с, ДИПКгле – 48 (31; 80) с (р<0,05), Контроль – 198 (14; 239) с, ДИПК – 30 (3; 133) с (р<0,05), таким образом у крыс с ГЛЕ и без ГЛЕ имеет место выраженный антиаритмический эффект ДИПК

Размеры зоны некроза миокарда левого желудочка были следующими: в группе Контрольгле – 38±4%, ДИПКгле – 46±4%, Контроль – 46±4%, ДИПК – 19±1% (р<0,01), что указывает о наличии противоишемического эффекта ДИПК у крыс без ГЛЕ.

Выводы. ДИПК не эффективно в плане ограничения размеров зоны некроза в миокарде левого желудочка при ишемии и реперфузии миокарда у крыс с ГЛЕ, но эффективно в плане снижения длительности аритмий.

Список литературы

  1. Липовецкий, Б. М. Дислипидемии, атеросклероз и их связь с ишемической болезнью сердца и мозга : рук. для врачей и студентов-медиков / Б. М. Липовецкий. – СПб.: Эко-Вектор, 2012. – 75 с.
  2. Любимов, А. В. Ишемия, реперфузия и прекондиционирование: традиционные и новые подходы в лечении инфаркта миокарда / А. В. Любимов, П. Д. Шабанов // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. – 2016. – Т. 14, № 3. – С. 3–11.
  3. Мрочек, А. Г. Сердечно-сосудистые заболевания в Республике Беларусь: анализ ситуации и стратегии контроля / А. Г. Мрочек [и др.] – Минск: Беларус. навука, 2011. – 341 с.
  4. Basalay, M. Remote ischaemic pre- and delayed postconditioning – similar degree of cardioprotection but distinct mechanisms / М. Basalay, V. Barsukevich, S. Mastitskaya // Exp Phys. – 2012. – Vol.97, №8. – P. 908–917.
  5. Clark, C. Coronary artery ligation in anesthetized rats as a method for the production of experimental dysrhythmias and for the determination of infarct size / C. Clark // J Pharmacol Methods. – 1980. – Vol.3, №4. – P. 357– 368.
Год: 2018
Город: Шымкент
Категория: Медицина