Другие статьи

Цель нашей работы - изучение аминокислотного и минерального состава травы чертополоха поникшего
2010

Слово «этика» произошло от греческого «ethos», что в переводе означает обычай, нрав. Нравы и обычаи наших предков и составляли их нравственность, общепринятые нормы поведения.
2010

Артериальная гипертензия (АГ) является важнейшей медико-социальной проблемой. У 30% взрослого населения развитых стран мира определяется повышенный уровень артериального давления (АД) и у 12-15 % - наблюдается стойкая артериальная гипертензия
2010

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения препарата «Гинолакт» для лечения ВД у беременных.
2010

Целью нашего исследования явилось изучение эффективности и безопасности препарата лазолван 30мг у амбулаторных больных с ХОБЛ.
2010

Деформирующий остеоартроз (ДОА) в настоящее время является наиболее распространенным дегенеративно-дистрофическим заболеванием суставов, которым страдают не менее 20% населения земного шара.
2010

Целью работы явилась оценка анальгетической эффективности препарата Кетанов (кеторолак трометамин), у хирургических больных в послеоперационном периоде и возможности уменьшения использования наркотических анальгетиков.
2010

Для более объективного подтверждения мембранно-стабилизирующего влияния карбамезапина и ламиктала нами оценивались перекисная и механическая стойкости эритроцитов у больных эпилепсией
2010

Нами было проведено клинико-нейропсихологическое обследование 250 больных с ХИСФ (работающих в фосфорном производстве Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции)
2010


C использованием разработанных алгоритмов и моделей был произведен анализ ситуации в системе здравоохранения биогеохимической провинции. Рассчитаны интегрированные показатели здоровья
2010

Специфические особенности Каратау-Жамбылской биогеохимической провинции связаны с производством фосфорных минеральных удобрений.
2010

"ВЭЖХ-МС/МС в биоаналитических исследованиях: надлежащая и ненадлежащая практика"

Регулирование обращения лекарственных средств (ЛС) путём создания грамотной нормативноправовой базы всегда было и остаётся актуальной задачей здравоохранения. В настоящее время в рамках Евразийского экономического союза (ЕАЭС) на межгосударственном уровне наблюдается стремление к гармонизации подходов к проведению исследований биоэквивалентности (БЭ) лекарственных препаратов. Важнейшим результатом этих усилий стало утверждение "Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза" [1], в которых, в частности, отражены рекомендации по проведению валидации биоаналитических (БА) методик. Данный документ, несомненно, можно признать большим шагом вперёд по сравнению с бывшими актуальными ранее в Российской Федерации рекомендациями по валидации биоаналитических методик, изложенными в "Руководстве по экспертизе лекарственных средств" [2]. Вместе с тем следует отметить, что многие положения нормативно-правовой базы требуют обсуждения и разъяснений, в особенности когда речь заходит об использовании метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-селективным детектором (ВЭЖХ-МС/МС).

В последнее время распространение современного оборудования привело к тому, что некоторые исследователи решили, что при наличии масс-спектрометрического детектирования (МСД) хроматографическое разделение отходит на второй план и едва ли требуется. Более того, эти мифы теперь начинают широко пропагандироваться как достоинство метода [3]. Но, исходя из практических наработок, нам бы хотелось предостеречь научный мир от этих заблуждений.

Одной из важнейших характеристик БА методики, которая устанавливается в ходе валидации в первую очередь, является её селективность - способность БА методики определять и различать исследуемое анализируемое вещество и внутренний стандарт в присутствии компонентов, которые могут содержаться в образце.

Укоренилось заблуждение, что ВЭЖХ-МС/МС при детектировании в режиме мониторинга множественных реакций (multiple reaction monitoring, MRM) позволяет достигнуть едва ли не абсолютной селективности, является «панацеей» и избавляет исследователя от необходимости тщательной разработки методики пробоподготовки и хроматографического разделения. Возможно, такой подход окажется оправданным в ряде ситуаций, однако опыт проведения БА исследований показывает, что при работе с реальными образцами от добровольцев/пациентов возникают ситуации которые невозможно смоделировать на ранних этапах разработки методики. Например, при определении нифедипина в сыворотке крови методом ВЭЖХ-МС/МС с детектированием в режиме MRM на хроматограмме образца интактной сыворотки крови с добавлением стандартного раствора анализируемого вещества наблюдается один пик (Рис. 1), соответствующий нифедипину ("красный пик"). В то же время, при анализе образца сыворотки крови, полученной от пациента, принимавшего нифедипин, на хроматограмме присутствуют уже два хорошо разделённых пика (Рис. 2). Как оказалось в дальнейшем, "лишний" пик на хроматограмме ("синий пик") во втором случае соответствует метаболиту, имеющему ту же молекулярную массу, что и целевое соединение и аналогичный путь фрагментации. Очевидно, что отсутствие эффективного хроматографического разделения в этой ситуации привело бы к недостоверным результатам исследований.

Биообразцы, как правило, не являются однородными по составу и качеству, например, может наблюдаться гемолиз крови, часто встречаются образцы с повышенным содержанием липидов, поэтому, проводя разработку и валидацию методики, данные факты необходимо принимать во внимание, т.к. различие в составе и качестве биообразцов сказывается не только на селективности методики, но и на степени извлечения аналита и эффекте матрицы.

Эффект матрицы – прямое или непрямое влияние или воздействие на результаты анализа, обусловленные наличием в биологическом образце непредусмотренных анализом анализируемых веществ или иных влияющих на него веществ. Данная характеристика оценивается только при использовании МСД и до недавнего времени в руководствах методология её определения описывалась недостаточно чётко и понятно, что приводило к ошибкам. Однако в Правилах ЕАЭС вслед за передовыми научными коллективами [4] определение эффекта матрицы изложено достаточно чётко.

Наибольшие споры вызывают требования, предъявляемые к нижнему пределу количественного определения (НПКО) методики, который, согласно Правилам ЕАЭС, необходимо адаптировать к ожидаемым концентрациям и цели исследования (например, в исследовании биоэквивалентности НПКО не должен быть выше, чем 5 % от максимальной концентрации на фармакокинетической кривой (Cmax), а точнее минимальной величины Cmax из всей выборки субъектов). Данное требование едва ли выполнимо и теряет всякий смысл, когда речь заходит об анализе ЛС с высокой вариабельностью фармакокинетики (Рис. 3). В приводимом примере пациентам, принимающим одинаковый препарат в одинаковой дозе проводили терапевтический лекарственный мониторинг, и получилось, что у кого-то Cmax составил порядка 150 нг/мл, а у кого-то едва привысил 3 нг/мл. В соответствии с Правилами, НПКО методики должен быть валидирован на уровне 3/20 = 0,15 нг/мл, в то время как ни в одной пробе от пациентов не наблюдалась концентрация ниже 1 нг/мл, что и являлось реальным валидированным НПКО, таким образом в данной ситуации и для данной задачи требования Правил избыточны. По нашему мнению, вопрос о планировании НПКО методики должен тщательно прорабатываться в каждом конкретном случае с учётом дизайна исследования и всех доступных данных о фармакокинетике определяемого вещества.

детектора остаётся линейным пусть и в широком, но в ограниченном диапазоне концентраций определяемого вещества (Рис. 4). Например, в случае ВЭЖХ с МСД при ионизации вещества методом электораспыления (ESI) важно учитывать, что выше определённой концентрации аналита процесс ионизации достигает насыщения и протекает с меньшей интенсивностью. Таким образом, нельзя бесконечно расширять аналитический диапазон методики, например, пытаясь снизить НПКО.

С НПКО тесно связана другая характеристика БА методики – аналитический диапазон – интервал между высокой и низкой концентрацией (содержанием) анализируемого вещества в образце (включая указанные концентрации), для которых показано, что аналитическая методика удовлетворяет требованиям по прецизионности, правильности и постоянству функции отклика. Стоит помнить о том, что отклик

Таким образом, всегда следует помнить, что проведение исследований с использованием ВЭЖХ- МС/МС является научно- исследовательской работой, требующей высококвалифицированных специалистов и больших затрат на материально-техническое обеспечение. Только вдумчивый научноориентированный подход позволит проводить первоклассные исследования мирового уровня и обеспечит надлежащее качество ЛП.

Список литературы

  1. Правила проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза. Утверждены распоряжением №178 Коллегии Евразийской экономической комиссии от 25.12.2015 г
  2. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Под.ред. проф. А.Н. Миронова. Том I. - М.: Гриф и К, 2013. - 328 с
  3. Васильева М.В. Жидкостная хроматография и капиллярный электрофорез сердечно-сосудистых лекарственных средств: диссертация … кандидата химических наук: 02.00.02; [Место защиты:Саратовский национальный исследовательский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского] — Саратов, 2017. — С. 31.
  4. Matuszewski B. K., Constanzer M. L., Chavez-Eng C. M. Strategies for the assessment of matrix effect in quantitative bioanalytical methods based on HPLC- MS/MS //Analytical chemistry. – 2003. – Т. 75. – №. 13. – С. 3019-3030.
  • Год: 2018
  • Город: Шымкент
  • Категория: Медицина

Разделы знаний

Архитектура

Научные статьи по Архитектуре

Биология

Научные статьи по биологии 

Военное дело

Научные статьи по военному делу

Востоковедение

Научные статьи по востоковедению

География

Научные статьи по географии

Журналистика

Научные статьи по журналистике

Инженерное дело

Научные статьи по инженерному делу

Информатика

Научные статьи по информатике

История

Научные статьи по истории, историографии, источниковедению, международным отношениям и пр.

Культурология

Научные статьи по культурологии

Литература

Литература. Литературоведение. Анализ произведений русской, казахской и зарубежной литературы. В данном разделе вы можете найти анализ рассказов Мухтара Ауэзова, описание творческой деятельности Уильяма Шекспира, анализ взглядов исследователей детского фольклора.  

Математика

Научные статьи о математике

Медицина

Научные статьи о медицине Казахстана

Международные отношения

Научные статьи посвященные международным отношениям

Педагогика

Научные статьи по педагогике, воспитанию, образованию

Политика

Научные статьи посвященные политике

Политология

Научные статьи по дисциплине Политология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Психология

В разделе "Психология" вы найдете публикации, статьи и доклады по научной и практической психологии, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. В своих работах авторы делают обзоры теорий различных психологических направлений и школ, описывают результаты исследований, приводят примеры методик и техник диагностики, а также дают свои рекомендации в различных вопросах психологии человека. Этот раздел подойдет для тех, кто интересуется последними исследованиями в области научной психологии. Здесь вы найдете материалы по психологии личности, психологии разивития, социальной и возрастной психологии и другим отраслям психологии.  

Религиоведение

Научные статьи по дисциплине Религиоведение опубликованные в Казахстанских научных журналах

Сельское хозяйство

Научные статьи по дисциплине Сельское хозяйство опубликованные в Казахстанских научных журналах

Социология

Научные статьи по дисциплине Социология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Технические науки

Научные статьи по техническим наукам опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физика

Научные статьи по дисциплине Физика опубликованные в Казахстанских научных журналах

Физическая культура

Научные статьи по дисциплине Физическая культура опубликованные в Казахстанских научных журналах

Филология

Научные статьи по дисциплине Филология опубликованные в Казахстанских научных журналах

Философия

Научные статьи по дисциплине Философия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Химия

Научные статьи по дисциплине Химия опубликованные в Казахстанских научных журналах

Экология

Данный раздел посвящен экологии человека. Здесь вы найдете статьи и доклады об экологических проблемах в Казахстане, охране природы и защите окружающей среды, опубликованные в научных журналах и сборниках статей Казахстана. Авторы рассматривают такие вопросы экологии, как последствия испытаний на Чернобыльском и Семипалатинском полигонах, "зеленая экономика", экологическая безопасность продуктов питания, питьевая вода и природные ресурсы Казахстана. Раздел будет полезен тем, кто интересуется современным состоянием экологии Казахстана, а также последними разработками ученых в данном направлении науки.  

Экономика

Научные статьи по экономике, менеджменту, маркетингу, бухгалтерскому учету, аудиту, оценке недвижимости и пр.

Этнология

Научные статьи по Этнологии опубликованные в Казахстане

Юриспруденция

Раздел посвящен государству и праву, юридической науке, современным проблемам международного права, обзору действующих законов Республики Казахстан Здесь опубликованы статьи из научных журналов и сборников по следующим темам: международное право, государственное право, уголовное право, гражданское право, а также основные тенденции развития национальной правовой системы.