Введение. Определения суммы флавоноидов посредством комплексообразования с ионом алюминия является распространенным способом их оценки в ЛРС и фитопрепаратах. Стехиометрия комплексов с мультидентантнымилигандами различается для различных групп флавоноидов, положение максимумов полос поглощения и их интенсивность зависят от среды (кислой, нейтральной и основной) и от структуры содержащихся в ЛРС флавоноидов [1,2].Предприняты попытки на основе спектральных характеристик провести подразделение суммы флавоноидов на подгруппы после нитрозирования с последующим комплексо- образованиемс AlCl3[2, 3].
Цель исследования. Выяснение возможности раздельной оценки содержания конкретных групп флавоноидов спектрофотометрическим методом.
Материалы и методы.Стандартные образцы (СО): нарингенин, апигенин, лютеолин, кверцитин, дигидрокверцитин, рутин, морин, феруловая кислота, кофейная кислота. Реактивы: алюминия хлорид, натрия нитрит, натрия гидроксид, уксусная кислота, 96% этанол, диметилформамид.
Навески 5 мг СО растворяли в 1 мл ДМФА, добавляли 4 мл этанола (раствор А).
Нитрозирование:К 0,1 мл р-ра А добавляли 0,3 мл 5% р-ра NaNO2, затем добавляли 4,6 мл этанола.
Спектрофотометрия: Методика 1; К 0,1 мл р-ра А добавляли 5 мкл СН3СООН, 4,7 мл этанола и 0,2 мл 10% р-раА1С13. Методика 2; К 0,1 мл р-ра А добавляли 0,3 мл 5% р-раNaNO2 и 2,9 мл этанола, через 5 мин - 5 мклСН3СООН и 0,2 мл 10% р-раА1С13, затем - 1,5 мл 1М NaOH. В канале сравнения растворы СО заменяли на этанол.
Результаты и их обсуждение. В исследование включены флавоны - лютеолин, апигенин; флавонолы - морин, кверцетин и дигликозидкверцетина рутин; флаваноннарингенин; флаванонолдигидрокверцетин; гидроксикоричные кислоты - кофейная, феруловая. Результаты представлены в табл. 1.
Таблица 1 - Спектральная характеристика методов определения суммы флавоноидов
|
Вещество |
^max, нм |
/.,,,,,.после нитрозировани я, нм |
Повышен ие А, раз |
max методика 1, нм |
max методик а 2, нм |
Сдвиг ^max, нм |
|
Кверцетин |
376 |
363 |
1,63 |
430 |
477 |
47 |
|
Рутин |
368 |
357 |
3,25 |
409 |
531 |
122 |
|
267 |
268 |
1,38 |
||||
|
Морин |
393 |
364 |
1,40 |
423 |
- |
- |
|
266 |
268 |
1,24 |
||||
|
Апигенин |
342 |
348 |
4,02 |
389 |
389 |
0 |
|
269 |
269 |
2,49 |
||||
|
Лютеолин |
353 |
354 |
2,94 |
398 |
517 |
119 |
|
Дигидро- |
329 |
341 |
2,21 |
413 |
507 |
94 |
|
кверцитин |
290 |
291 |
1,41 |
|||
|
Нарингенин |
328 |
341 |
2,50 |
379 |
- |
- |
|
291 |
292 |
1,52 |
|
|
Кофейная |
317 |
317 |
1,39 360 - - |
|
кислота |
289 |
287 |
1,41 |
|
Феруловая |
314 |
314 |
1,34 338 - - |
|
кислота |
288 |
287 |
1,41 |
Вывод.Нитрозированиефлавоноидов и гидроксикоричных кислот приводит к увеличению интенсивности полос поглощения с небольшим батохромным сдвигом (для морина с гипсохромным сдвигом). Комплексообразование с хлоридом алюминия как непосредственно исследуемых образцов, так и их нитрозопроизводных, не является селективным для различных групп флавоноидов. Наиболее длинноволновые полосы поглощения (свыше 500 нм) наблюдаются для рутина (флавонол; но отсутствуют у кверцетина) лютеолина (флавон) и дигидрокверцитина (флаванонол).
Список литературы
- Fossen T. et al. Spectroscopic techniques applied to flavonoids //Flavonoids: chemistry, biochemistry and applications. - 2006. - С. 37-142.
- Pekal A. Evaluation of AluminiumComplexation Reaction for Flavonoid Content Assay / A. Pekal, K. Pyrzynska // Food Anal. Methods - 2014. - Т. 7 - № 9 - 1776-1782с.
- Mammen D. A critical evaluation on the reliability of two aluminum chloride chelation methods for quantification of flavonoids / D. Mammen, M. Daniel // Food Chem. - 2012. - Т. 135 - № 3 - 13651368с.