Методы определение дабигатрана в биологических объектах

Введение. Определение препарата дабигатран в биообъектах, в том числе, таких как плазма крови, сыворотка и моча необходимо для изучения фармакокинетики, оценке его эффективности и безопасности, проведения терапевтического лекарственного мониторинга [1,2].

Цель работы. Провести научно-обоснованный выбор методов количественного определения дабигатрана в биологических жидкостях по современным научным базам данных.

Материалы и методы. Научный поиск проводился по базам данных PubMed, а также научным электронным ресурсам Scopus, Web of Science и еLibrary.

Результаты и обсуждения. Результаты научного поиска показали, что концентрацию дабигатрана в биологических жидкостях определяют двумя методами - хромогенным и хроматографическим. Для количественного хромогенного анализа в плазме, сыворотке и моче используют два индикатора - прямой ингибитор тромбина (DTI) и S2238(табл. 1) [4].

Таблица 1 - Концентрации дабигатрана измеренная S2238 хромогенным методом и DTI в плазме, сыворотке и моче.

Биологический объект

n

S2238

DTI

Средний показатель, ng/mL

CV, %

SD, ng/mL

Средний показатель, ng/mL

CV, %

SD, ng/mL

Плазма

295

113.5

74.3

84.3

143.1

71.3

102.0

Сыворотка

164

71.1

95.2

67.7

23.6

89.0

21.0

Моча

144

5641.6

76.6

4319.7

4730.0

79.7

3770.2

В литературе описано сопоставление результатов количественного анализа дабигатрана в плазме крови, полученные с помощью хроматографического и хромогенного анализа. При хроматографическом методе анализа с использованием тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ/МС/МС) пробоподготовку образцов проводили следующим образом: к 100 мкл плазмы прибавляли 10 мкл раствора дабигатрана. Далее проводили осаждение белков, добавляя 400 мкл смеси CH3OH/ HCl Н 0,1 (90:10), а затем центрифугировали. После этого из 100 мкл супернатанта отбирали аликвотную долю, объем которой составлял 20 мкл. Для разделения и количественного определения дабигатрана в плазме использовали масс-спектрометр. При хромогенном методе анализа

пробоподготовку плазмы, сыворотки или мочи проводили с помощью Трис буфера (0,05 М Трис 0.075 М ЭДТА, 0.175 М NaCl, рН 8.4). 100 мкл смешивали и инкубировали в течение 5 мин в 96- луночном планшете при 37 °С. Затем смесь инкубировали при 37 °C в течение 1 мин после добавления 100 мкл предварительно нагретого очищенный человеческого тромбина. Затем добавляли 50 мкл хромогенного индикатора, растворенного в дистиллированной воде, и инкубировали 5 мин при 37 °С. Реакцию останавливали путем добавления 25 мкл 20% уксусной кислоты. Оптическую плотность измеряли с помощью спектрофотометра при 450 нм или 405 нм. Результаты, полученные двумя методами подвергали сравнительному анализу(табл.2)[2,3,4]. Представленные в таблице данные показывают, что полученные значения концентрации дабигатрана сопоставимы.

Таблица 2 - Сравнение концентраций препарата в плазме полученные двумя методами

Параметры

Методы анализа дабигатрана

HPLC-MS/MS (высокоэффективня хроматография)

chromogenic anti-IIa dabigatran level (хромогенный анализ)

Средняя коцентрация (ng/mL)

161.1

161.9

Стандартное отклонение (ng/mL)

104.1

104.8

Выводы. Проведенный научный поиск показал, что в целом для количественного определения дабигатрана в биологических объектах могут быть использованы два методы - хромогенный и хроматографический. Однако вопросы валидации (чувствительность, селективность, и другие) с точки зрения применимости метода для конкретных задач остаются и требуют дальнейшего практического изучения.

 

Список литературы

  1. J Stangier, Karin Rathgen, Hildegard Stahle, Dietmar Gansser & Willy Roth. The pharmacokinetics, pharmacodynamics and tolerability of dabigatran etexilate, a new oral direct thrombin inhibitor, in healthy male subjects. // British Journal of Clinical Pharmacology B. 2007. № 64(3). P. 292-303
  2. Luigi Brunetti, James P. Luyendyk and Lauren M. Aleksunes, Betty Sanchez-Catanese, Leonid Kagan, Xia Wen, Min Liu, Brian Buckley. Evaluation of the chromogenic anti-factor IIa assay to assess dabigatran exposure in geriatric patients with atrial fibrillation in an outpatient setting. // Journal Thrombosis B. 2016. № 14. P. 10
  3. Michael Schmohl, Dietmar Gansser, Viktoria Moschetti, Joachim Stangier. Measurement of dabigatran plasma concentrations by calibrated thrombin clotting time in comparison to LC-MS/MS in human volunteers on dialysis. // Journal of Thrombosis Research B. 2015. № 135. P. 532-536.
  4. Shanshan Du, Christel Weiss, Giese Christina, Sandra Kramer, Martin Wehling, Roland Kramer, Job Harenberg. Determination of dabigatran in plasma, serum, and urine samples: Comparison of six methods // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM), 2015, Vo. 53, № 8, P. 1237-1247.
Год: 2016
Город: Шымкент
Категория: Медицина