Введение. Определение препарата дабигатран в биообъектах, в том числе, таких как плазма крови, сыворотка и моча необходимо для изучения фармакокинетики, оценке его эффективности и безопасности, проведения терапевтического лекарственного мониторинга [1,2].
Цель работы. Провести научно-обоснованный выбор методов количественного определения дабигатрана в биологических жидкостях по современным научным базам данных.
Материалы и методы. Научный поиск проводился по базам данных PubMed, а также научным электронным ресурсам Scopus, Web of Science и еLibrary.
Результаты и обсуждения. Результаты научного поиска показали, что концентрацию дабигатрана в биологических жидкостях определяют двумя методами - хромогенным и хроматографическим. Для количественного хромогенного анализа в плазме, сыворотке и моче используют два индикатора - прямой ингибитор тромбина (DTI) и S2238(табл. 1) [4].
Таблица 1 - Концентрации дабигатрана измеренная S2238 хромогенным методом и DTI в плазме, сыворотке и моче.
|
Биологический объект |
n |
S2238 |
DTI |
||||
|
Средний показатель, ng/mL |
CV, % |
SD, ng/mL |
Средний показатель, ng/mL |
CV, % |
SD, ng/mL |
||
|
Плазма |
295 |
113.5 |
74.3 |
84.3 |
143.1 |
71.3 |
102.0 |
|
Сыворотка |
164 |
71.1 |
95.2 |
67.7 |
23.6 |
89.0 |
21.0 |
|
Моча |
144 |
5641.6 |
76.6 |
4319.7 |
4730.0 |
79.7 |
3770.2 |
В литературе описано сопоставление результатов количественного анализа дабигатрана в плазме крови, полученные с помощью хроматографического и хромогенного анализа. При хроматографическом методе анализа с использованием тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ/МС/МС) пробоподготовку образцов проводили следующим образом: к 100 мкл плазмы прибавляли 10 мкл раствора дабигатрана. Далее проводили осаждение белков, добавляя 400 мкл смеси CH3OH/ HCl Н 0,1 (90:10), а затем центрифугировали. После этого из 100 мкл супернатанта отбирали аликвотную долю, объем которой составлял 20 мкл. Для разделения и количественного определения дабигатрана в плазме использовали масс-спектрометр. При хромогенном методе анализа
пробоподготовку плазмы, сыворотки или мочи проводили с помощью Трис буфера (0,05 М Трис 0.075 М ЭДТА, 0.175 М NaCl, рН 8.4). 100 мкл смешивали и инкубировали в течение 5 мин в 96- луночном планшете при 37 °С. Затем смесь инкубировали при 37 °C в течение 1 мин после добавления 100 мкл предварительно нагретого очищенный человеческого тромбина. Затем добавляли 50 мкл хромогенного индикатора, растворенного в дистиллированной воде, и инкубировали 5 мин при 37 °С. Реакцию останавливали путем добавления 25 мкл 20% уксусной кислоты. Оптическую плотность измеряли с помощью спектрофотометра при 450 нм или 405 нм. Результаты, полученные двумя методами подвергали сравнительному анализу(табл.2)[2,3,4]. Представленные в таблице данные показывают, что полученные значения концентрации дабигатрана сопоставимы.
Таблица 2 - Сравнение концентраций препарата в плазме полученные двумя методами
|
Параметры |
Методы анализа дабигатрана |
|
|
HPLC-MS/MS (высокоэффективня хроматография) |
chromogenic anti-IIa dabigatran level (хромогенный анализ) |
|
|
Средняя коцентрация (ng/mL) |
161.1 |
161.9 |
|
Стандартное отклонение (ng/mL) |
104.1 |
104.8 |
Выводы. Проведенный научный поиск показал, что в целом для количественного определения дабигатрана в биологических объектах могут быть использованы два методы - хромогенный и хроматографический. Однако вопросы валидации (чувствительность, селективность, и другие) с точки зрения применимости метода для конкретных задач остаются и требуют дальнейшего практического изучения.
Список литературы
- J Stangier, Karin Rathgen, Hildegard Stahle, Dietmar Gansser & Willy Roth. The pharmacokinetics, pharmacodynamics and tolerability of dabigatran etexilate, a new oral direct thrombin inhibitor, in healthy male subjects. // British Journal of Clinical Pharmacology B. 2007. № 64(3). P. 292-303
- Luigi Brunetti, James P. Luyendyk and Lauren M. Aleksunes, Betty Sanchez-Catanese, Leonid Kagan, Xia Wen, Min Liu, Brian Buckley. Evaluation of the chromogenic anti-factor IIa assay to assess dabigatran exposure in geriatric patients with atrial fibrillation in an outpatient setting. // Journal Thrombosis B. 2016. № 14. P. 10
- Michael Schmohl, Dietmar Gansser, Viktoria Moschetti, Joachim Stangier. Measurement of dabigatran plasma concentrations by calibrated thrombin clotting time in comparison to LC-MS/MS in human volunteers on dialysis. // Journal of Thrombosis Research B. 2015. № 135. P. 532-536.
- Shanshan Du, Christel Weiss, Giese Christina, Sandra Kramer, Martin Wehling, Roland Kramer, Job Harenberg. Determination of dabigatran in plasma, serum, and urine samples: Comparison of six methods // Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (CCLM), 2015, Vo. 53, № 8, P. 1237-1247.