АННОТАЦИЯ
При получении эфирного масла из побегов багульника болотного отходами производства становятся шрот и водное извлечение, которые содержат значительное количество БАВ. Нами был исследован качественный состав и количественное содержание основных групп БАВ в экстракте, полученном из отходов производства эфирного масла, и определена его противовоспалительная активность. Полученные результаты подтверждают возможность создания нового лекарственного средства на основе продуктов комплексной переработки трави багульника болотного.
Ключевые слова: багульник болотный, эфирное масло, фенольные соединения, комплексная переработка, противовоспалительная активность
Цель исследования
Перспективным направлением развития современной фитохимии является создание новых лекарственных препаратов путем комплексной переработки растительного сырья. Комплексная переработка сырья при изготовлении новых лекарственных средств очень актуальна в наше время, так как обеспечивает экономически выгодное использование сырья и способствует сохранению его запасов.
При получении эфирного масла из побегов багульника болотного отходами производства становится шрот и водная вытяжка, которые содержат значительное количество БАВ, в том числе фенольной природы.
Поэтому целью нашей работы было провести фитохимическое исследования продуктов комплексной переработки побегов багульника болотного для создания на их основе нового лекарственного средства с противовоспалительной активностью.
Материалы и методы.
Объектом исследования стал сухой экстракт, полученный из побегов багульника после выделения эфирного масла.
30 г побегов Ledum palustre, помещают в колбу вместимостью 1000 мл и заливали 400 мл воды очищенной. Эфирное масло получали по методике Государственной фармакопеи СССР XI издания, время перегонки составляло 4 часа [1, 2]. Водный экстракт, оставшийся после получения эфирного масла, фильтровали и устанавливали его объем. К шроту, оставшемуся после получения эфирного масла добавляли 400 мл 50% спирта этилового с учетом воды очищенной, что осталась в шроте побегов багульника обыкновенного после получения эфирного масла. Экстракцию проводили в течение суток, после чего экстракт фильтровали и устанавливали его объем. Полученный водный экстракт и спиртовой экстракт объединяли и упаривали в сушильном шкафу до получения сухого экстракта. Из полученного экстракта готовили 1% спиртовой раствор (спирт этиловый 50%), который и использовали для дальнейшего анализа.
Идентификацию производных гидроксикоричной кислоты, флавоноидов и полифенольных соединений проводили бумажной хроматографией и качественными реакциями.
Флавоноиды. После обработки двухмерной хроматограммы парами аммиака и 2% спиртовым раствором алюминия хлорида пятна агликонов приобретали ярко-желтую флуоресценцию, темнокоричневые пятна становились желто-зелеными, что характерно для флавоноидных гликозидов. Для установления природы их агликонов проводили кислотный гидролиз гликозидов 8% соляной кислотой и хроматографировали с достоверными образцами агликонов флавоноидов с последующей обработкой хроматограмм парами аммиака и раствором алюминия хлорида [2,5].
Производные гидроксикоричной кислоты. Раствор сухого экстракта хроматографировали с достоверным образцами производных гидроксикоричной кислоты в системах: I - н-бутанол - кислота уксусная - вода (4: 1: 2) и II - 15% кислота уксусная с последующей обработкой хроматограмм парами аммиака и диазореактивом [6].
Полифенольные соединения. В результате хроматографического изучения спиртового экстракта и продуктов его гидролиза (5% серной кислотой) с помощью бумажной хроматографии (БХ) в системах: I - н-бутанол- кислота уксусная-вода (4: 1: 2), II - 5%, III -30% и IV - 60% кислота уксусная с использованием 1% спиртового раствора железа хлорида (III), как хромогенного реактива [7].
Количественное определение производных гидроксикоричной кислоты, флавоноидов и полифенольных соединений проводили спектрофотометрическим методом [2].
Содержание производных гидроксикоричной кислоты определяли в пересчете на хлорогеновую кислоту при 327 нм. Раствором сравнения служил 20% спирт этиловый [6].
Содержание суммы флавоноидов определяли спектрофотометрическим методом в пересчете на рутин при длине волны 417 нм, после образования комплекса AlCl3. Раствором сравнения служил раствор, содержащий экстракт без AlCl3. Перед измерением оптической плотности растворы фильтровали через бумажный фильтр [2,5].
Содержание суммы полифенольных соединений определяли спектрофотометрическим методом в пересчете на галловую кислоту. Измерения проводили при 270 нм. В качестве раствора сравнения использовали 40% спирт этиловый [7].
Противовоспалительную активность сухого экстракта из побегов багульника обыкновенного изучали в опытах на белых мышах массой 18 - 23 г на модели формалинового воспаления.
Препаратом сравнения был вольтарен. Опытные животные были поделены на три группы: контрольная группа; группа, которую лечили экстрактом из побегов багульника болотного и группа леченная препаратом сравнения. Степень противовоспалительной активности экстракта оценивали по антиэкссудативному эффекту [3,4].
Для воспроизведения острого асептического экссудативного воспаления использовали в качестве флогогена 2% раствор формалина, который вводили субплантарно в количестве 0,05 мл через 1 час после перорального введения исследуемого экстракта из багульника болотного, препарата сравнения Вольтарена и в контрольной группе - воды. Активность исследуемых препаратов изучали по их способности уменьшать развитие отека по сравнению с контролем [3,4].
Результаты и обсуждение.
В результате качественного анализа в сухом экстракте было идентифицировано: не менее 7 веществ флаваноидной природы, агликонами которых являлись кверцетин, лютеолин и кемпферол; производные гидроксикоричной кислоты: хлорогеновая и кумаровая кислоты; галловая и эллаговая кислоты и гало- и элаготанины.
В результате количественного анализа было установлено содержание производных гидроксикоричной кислоты, флавоноидов и полифенольных соединений 20,36 ± 0,7%, 2,054 ± 0,09% и 12,479 ± 0,62% соответственно.
Результаты исследования противовоспалительной активности экстракта приведены в таблице.
Таблица - Противовоспалительная активность экстракта из побегов багульника болотного
|
Препарат |
Доза, мг/кг |
Антиэкссудативный эффект, % |
|
Екстракт багульника |
30 |
61,05 |
|
Вольтарен |
2,3 |
63,54 |
|
Контроль |
0 |
0 |
Анализ противовоспалительной активности экстракта из побегов багульника болотного проведенный на модели формалинового воспаления у мышей показал антиэкссудативный эффект в дозе 30 мг / кг - 61,05%, что на уровне препарата сравнения.
Выводы.
Проведенные фитохимические исследования продуктов комплексной переработки побегов багульника болотного показали возможность создания на их основе нового лекарственного средства с противовоспалительной активностью.
ЛИТЕРАТУРА
- Государственная фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа./ МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: «Медицина», 1987. -336с.
- Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: «Медицина», 1989. - 400с.х
- Пат. 60948 Украіна, МПК7 A 61 K 9/06, A 61 K 31/125. Протизапальний засіб „артрал“ / Кучер В. Г., Пивоваров I. Д. - N 2003076479; Заявл. 11.07.2003; Опубл. 15.10.2003.
- Пат. № 14493 Украіна, МПК А61К 36/61 9/14 127/00. Спосіб одержання засобу з протизапальною та анаболічною активністю / О.М. Кошовий, О.М. Гомон, І.М. Мудрик та ін. (Украіна). - № u 2005 11277; Заявл. 28.11.2005; Опубл. 15.05.2006, Бюл. № 5.
- Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге / Бандюкова В.А. и др. // Растительные ресурсы.- Т. 1.- № 4.- 1965.- С. 591-597.
- Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / Бандюкова В.А.// Химия природных соединений.- № 3.- 1983.- С. 263-272.
- Шмидт О. Природные дубильные вещества. Биохимические методы анализа растений. - М.:,1960. - с.539-578.