АННОТАЦИЯ
Исследована возможность применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе пиридоксина гидрохлорида. В результате получены хроматограммы с четкими пиками и временем удерживания при использовании в качестве элюента смеси ацетонитрил-вода на обращенно-фазной хроматографической колонке, наполненной силикагелем С18, и спектрофотометрическом детектировании.
Ключевые слова: производные пиридина, анализ, высокоэффективная жидкостная хроматография.
Производные пиридина широко применяются в медицине как лекарственные средства (1). Представителями группы являются кислота никотиновая (ее амид и диэтиламид (никетамид), пикамилон), а также производные изоникотиновой кислоты природного и синтетического происхождения, витаминные препараты производные оксиметилпиридинов и другие препараты. В связи с ростом выпуска на рынке разнообразных лекарственных средств, в том числе, производных пиридина, возрастают и требования к безопасности, эффективности и качеству лекарственных препаратов. Возникает необходимость в применении более чувствительных и селективных методов анализа. Одним из таких методов является метод жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (2). Метод ВЭЖХ в настоящее время все шире применяется в анализе лекарственных средств. В анализе производных пиридина данный метод рекомендован для количественного определения субстанции пиридоксина гидрохлорида (3).
На базе кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии БГМУ начаты исследования в области анализа лекарственных средств методом ВЭЖХ. Время выхода компонента из колонки при одних и тех же условиях разделения постоянно и служит характеристикой данного компонента (качественный анализ), а площадь пика - пропорциональна количеству данного компонента в пробе (количественный анализ).
Цель исследования.
Определить возможность качественного анализа субстанции и раствора для инъекций пиридоксина гидрохлорида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Материалы и методы.
Анализу подвергались лекарственные средства, соответствующие требованиям государственной фармакопеи и фармакопейных статей (4-9).
Объекты исследования:Пиридоксина гидрохлорид, субстанция. Раствор пиридоксина гидрохлорида 5%.
Состав: пиридоксина гидрохлорида 50 г. Воды для инъекций до 1 л
Оборудование: жидкос тной хроматограф LC-20 "Prominence" фирмы Shimadzu. Хроматографические колонки - обращенно-фазные, заполненные силикагелем С18 с привитыми гидрофобными группами. Подвижная фаза, элюент - ацетонитрил-вода в соотношении 5:5. Концентрация растворов для введения в хроматограф составляла 20мкг/л. Исследование проводили в интервале температур 20-25°С.
Для спектрофотометрического детектирования хроматограмм исследуемых соединений были использованы данные по максимумам поглощения в УФ области из соответствующих фармакопейных статей. Детектирование проводили в УФ области с фиксированной длиной волны при 290 нм и 324 нм.
Таблица 1 - Данные хроматограммы пиридоксина гидрохлорида, субстанции Detector A Ch1 290 nm
|
Пик # |
Время удерживания |
Площадь |
Высота |
Площадь% |
Высота% |
|
1 |
2.200 |
552998 |
25986 |
100.00 |
100.00 |
|
Общий |
552998 |
25986 |
100.00 |
100.00 |
Detector A Ch2 324 nm
|
Пик # |
Время удерживания |
Площадь |
Высота |
Площадь% |
Высота% |
|
1 |
2.199 |
337521 |
16592 |
100.00 |
100.00 |
|
Общий |
337521 |
16592 |
100.00 |
100.00 |
Таблица 2 - Данные хроматограммы раствора пиридоксина гидрохлорида 5% Detector A Ch1 290 nm
|
Пик # |
Время удерживания |
Площадь |
Высота |
Площадь% |
Высота% |
|
1 |
2.218 |
311149 |
13344 |
100.00 |
100.00 |
|
Общий |
311149 |
13344 |
100.00 |
100.00 |
Detector A Ch2 324 nm
|
Пик # |
Время удерживания |
Площадь |
Высота |
Площадь% |
Высота% |
|
1 |
2.215 |
190896 |
8310 |
100.00 |
100.00 |
|
Общий |
190896 |
8310 |
100.00 |
100.00 |
Результаты и обсуждение.
Установлено, что для субстанции пиридоксина гидрохлорида при 290 нм время удерживания составляет 2.200 мин., при 324 нм - 2.199 мин., для раствора пиридоксина гидрохлорида 5% при 290 нм время удерживания 2.218 мин., при 324 нм - 2.215 мин. (табл. 1,2).
ВЫВОДЫ.
Таким образом, применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для качественного анализа субстанций и раствора для инъекций пиридоксина гидрохлорида, возможно. Четкие пики хроматограмм получены в условиях обращенно-фазовой ВЭЖХ на колонках, заполненных силикагелем С18, элюент - ацетонитрил-вода в соотношении 5:5, концентрация вводимых растворов в хроматограф 20мкг/л при температуре 20-25°С.
ЛИТЕРАТУРА
- Машковский, М. Д. Лекарственные средства: пособие для врачей / М. Д. Машковский. - 16-е изд., перераб. и доп. - М. : Новая волна, 2012. - 1216 с. - ISBN 978-5-7864-0218-7.
- Государственная фармакопея. XII издание. - М.: «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2007.
- Пиридоксина гидрохлорид, субстанция. Нормативный документ НД 42-7593-02. Такеда Кемикал Индастриз, Япония.
- Пиридоксина гидрохлорид, субстанция. Фармакопейная статья ФС 42-0270-07-08.