АННОТАЦИЯ
Определены основные группы биологически активных соединений в траве клевера лугового (Trifoliumpratense L.), произрастающего в Узбекистане. Установлено, что изофлавоноиды составляют 3,5%, кумарины - 0,57%, дубильные вещества - 3,4%, органические кислоты-1,75%, каротиноиды - 8,05%, полисахариды - 6,5% аскорбиновая кислота - 100мг%.Также, определены анатомо-диагностические признаки и числовые показатели характеризующие подлинности и качества исследуемого лекарственного сырья.
Ключевые слова: клевер луговой (Trifoliumpratense L.), лекарственное растение, биологические активные вещества, качественные реакции, количественное определение.
Успехи в области синтеза новых биологически активных веществ не снижают проблему поиска лекарственных средств растительного происхождения, а, наоборот, их значимость возрастает, расширяется ассортимент использования в медицинской практике. Перспектива лечения населения с использованием эффективных растительных лекарственных средств отмечено в национальной программе здравоохранения Узбекистана. Перед фармацевтической наукой определена важная задача о выявлении и изучении новых лекарственных растений отечественной флоры с целью создания на их основе эффективных лекарственных средств. Известно, Узбекистан характеризуется разнообразием географических и климатических условий и что республика является богатейшим регионом, где произрастают различные виды лекарственных растений, которые представляют научный интерес. И один из них является представитель рода клевера - Trifolium L.
Мировая флора насчитывает около 300 видов рода Trifolium L., которые распространены по всей Европе, Африке (Алжир), Северной Америке и т.д. На территории Узбекистана распространены семь представителей родаклевера:к. земляничный (T. fragiferum L.), к. полевой (T. campestreSchreb.), к. опрокинутый (T. resupinatum L.), к. ползучий (T. repens L.),k. пренебреженный(Т.пед1ес1ит С.), - к. репейниковый (T.lappaceum L.) и к. луговой (T. pratense L.). [1]. Клевер луговой(Trifo1шmpratense L.) - это многолетнее травянистое растение из семейства бобовых (Fabaceae) произрастает преимущественно в полосе предгорий и поливного земледелия, по берегам рек, ручьев и арыков, на сильно увлажняемых почвах (таблица 1).Также растет в поймах рек, по пониженным местам с высокими грунтовыми водами и встречается как сорное на поливных полях, преимущественно среди люцерны [1].
Принимая во внимание известный принцип филогенетического родства, а также достаточные сырьевые запасы клевера лугового с учетом его применения в народной медицине, фармакогностическое изучение этого растения с целью внедрения в медицинскую практику представляется практически важной задачей.
Целью настоящей работы является фармакогностическое изучение надземной части клевера лугового, которая была заготовленная в июле 2012г. в урочище Чимган Ташкентской области. Для выявления диагностических признаков, необходимых при идентификации лекарственного растительного сырья, нами изучены анатомическое строение листьев, цветков и стеблей клевера лугового [2]. При этом установили: Для листьев: при рассмотрении листа с верхней и нижней стороны видны вытянутые, многоугольные клетки эпидермиса с прямыми стенками; клетки верхнего эпидермиса несколько крупнее. Местами, особенно на верхнем эпидермисе, стенки клеток имеют четко видные утолщения. Устьица крупные, овальные, непогруженные, аномоцитного типа (окружены 4 около устьичными клетками) преобладают на нижней стороне листа. На обеих поверхностях листа встречаются простые, двухклеточные волоски, состоящие из короткой базальной клетки и длинной, часто обламывающейся терминальной клетки. Вокруг места приклепления волоска клетки эпидермиса расположены лучисто, образуя розетку. Волоски часто отпадают и в центре розетки виден круглый валик.
Для стеблей: на поперечном срезе полый, округлый; мелкоребристый (с 9-12 ребрами), слегка волосистый, имеет пучковый тип строения (каждому ребру соответствует проводящий пучок). Клетки эпидермиса вытянутые, с утолщенными наружными стенками, несут простые одноклеточные волоски. Под эпидермисом расположен один ряд клеток пластинчатой колленхимы. Далее идут 5-6 рядов овально-округлых, толстостенных клеток коровой паренхимой с межклетниками. Проводящие пучки коллатерального типа, окружены склеренхимой. Волокна склеренхимы образуют сплошное кольцо из толстостенных клеток.
Таблица 1 - Участие клевера лугового в растительном покрове Республики Узбекистан
|
Формация |
Ассоциация |
Географическое распространения |
|
Смешанно Ивовая |
Хвощево-ивовая |
Хребет Байсунтау, горы Кугитанг, верховье реки КичикУрадарья, правобережье рекиШордарьи |
|
Ажреково-ивовая |
Гиссарский хребет, среднее течение бассейна рекиТупаланг |
|
|
Березовая |
Хвощево- разнотравно -березовая |
Западный Тянь-Шань, бассейн реки Чирчик |
|
Тростниково-березовая |
Долина реки Акбулак, тугай по левому берегу |
|
|
Тополевая |
Тростниково-ежевиково- березово-тополевая |
Западный Тянь-Шань, долина реки Акбулак |
|
Разнотравно-тополевая |
Западный Тянь-Шань, долина реки Акбулак, Кураминский хребет, верховья рекиЧадаксай |
|
|
Облепиховая и лоховая |
Ивово-облепиховая |
Хребет Байсунтау, бассейн рекиШерабаддарья. ГиссарскийХребет, бассейн реки Шаргунь. |
|
Разнотравно-облепиховая |
Джизакская обл., Бахмальский район, Ур. Акчекмен. |
|
|
Лисохвостово-лоховая |
Хребет Байсунтау, бассейн рекиШерабаддарья. |
|
|
Разнотравно-ивово-лоховая |
||
|
Смешанногребенщиковая |
Облепихово-гребенщиковая |
Хребет Байсунтау, бассейн рекиКичикУрадарья, рекаБайсунтау, среднее течение реки КаттаУрадарьи. |
|
Тополево-гребенщиковая |
Бассейн реки Ангрен. |
|
|
Барбарисово-гребенщиковая |
Хребет Байсунтау, бассейн реки КаттаУрадарья. |
|
|
Солодково -гребенщиковая |
Гиссарскийхребет, бассейн рекиТуполанг. |
|
|
Разнотравно-гребенщиковая |
Хребет Байсунтау, долина Шерабаддарьи. |
|
|
Ивовая |
В ейниково -ивовоя |
Зарафшан, Саразмскийтугай. |
Серцевина широкая, представлена тонкостенными, овальными и округлыми клетками; в центре частично облитерирована. При определении подлинности сырья, наряду с установлением его внешних и анатомо-диагностических признаков, ГФ XI рекомендует проведение качественных реакций на основные действующие вещества. С целью изучения химического состава проведено предварительное исследование клевера лугового на содержание основных групп биологически активных веществ (БАВ) с использованием общеизвестных качественных реакций и методов хроматографии на бумаге и тонких слоях сорбента [3].
Таблица 2 - Результаты количественного определения БАВ в надземной части клевера
лугового(среднее из 5 определений в %)
|
№ Образца |
Биологически активные вещества (БАВ) |
||||||
|
Изофлавонои ды |
Дубильн ые веществ а |
Кумарин ы |
Органические кислоты |
Каротиноды |
Витам ин С мг % |
Водорастворим ые полисахариды |
|
|
1 |
3,850 |
3,520 |
0,530 |
1,600 |
8,050 |
100 |
6,500 |
|
2 |
3,160 |
3,163 |
0,700 |
1,843 |
8,203 |
85 |
6,840 |
|
3 |
3,500 |
4,040 |
0,623 |
2,035 |
7,840 |
115 |
7,000 |
|
4 |
3,350 |
3,042 |
0,439 |
1,745 |
7,640 |
95 |
6,400 |
|
5 |
3,450 |
3,330 |
0,545 |
1,543 |
8,540 |
105 |
7,505 |
Для проведения качественных реакций готовили водные, спиртовые (95% этилового спирта) и гексановые извлечения из травы клевера лугового. Водные извлечения (1:10) исследовались на дубильные вещества, углеводы, сапонины, аскорбиновую кислоту, антрацен производные, органические кислоты. Эфирное масло определялось перегонкой сырья с водяным паром. Спиртовые извлечения (1:5) исследовались на содержание изофлавоноидов, кумаринов и сердечных гликозидов. Гексановые извлечения (1:10) исследовались на содержание каротиноидов [4]. Затем проделали соответствующие характерные реакции с необходимыми извлечениями на каждую группу [5]. В результате проведенных качественных реакций установлено наличие в траве клевера лугового изофлавоноидов, кумаринов, углеводов, дубильных веществ, органических кислот, аскорбиновой кислоты и отсутствие алкалоидов, антрацен производных, сапонинов, сердечных гликозидов и эфирного масла. Количественное определение БАВ проводили методами, описанными в ГФ XI [3].
При разработке критериев доброкачественности сырья клевера лугового в соответствии с указаниями статьи ГФ XI «Травы» [3] определяли следующие числовые показатели: - содержание действующих веществ; - влажность; -содержание золы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты; - измельченность и содержание примесей. Исходя из результатов химического анализа травы клевера лугового, нами установлены нормы числовых показателей, регламентирующие качество предлагаемого сырья.
Таблица 3 - Результаты определения числовых показателей травы клевера лугового (среднее из 5 определений в %)
|
Номер образц а |
Числовой показатель |
|||||||
|
Влажнос ть |
Зола |
Частиц, не проходящ их сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм |
Частиц, не проходящ их сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм |
Пожелтевш их или побуревших частей травы |
Примесь органическ ая |
Примесь минеральн ая |
||
|
обща я |
нерастворим ая в 10% р- ре HCL |
|||||||
|
1 |
8,00 |
9,50 |
0,50 |
1,0 |
2,0 |
5,0 |
0,3 |
0,3 |
|
2 |
8,55 |
9,00 |
0,60 |
2,0 |
1,0 |
3,0 |
0,5 |
0,2 |
|
3 |
9,25 |
9,20 |
0,44 |
2,4 |
3,0 |
6,0 |
0,4 |
0,1 |
|
4 |
7,54 |
8,90 |
0,55 |
0,7 |
3,5 |
6,5 |
0,2 |
0,4 |
|
5 |
8,40 |
9,40 |
0,40 |
0,8 |
1,5 |
4,5 |
0,3 |
0,6 |
Таким образом, разработаны методические приемы качественного и количественного определения основных действующих веществ, определены надежные анатомо-диагностические признаки, характеризующие подлинность сырья. Разработаны научно обоснованные критерии качества предлагаемого сырья (содержание действующих веществ, влажность, содержание золы общей и золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, измельченность и содержание примесей). Установлено, что изофлавоноиды составляют 3,5%, кумарины- 0,57%, дубильные вещества - 3,4%, органические кислоты -1,75%,полисахариды - 6,5%, каротиноиды - 8,05%, аскорбиновая кислота - 100мг%.Результаты исследования послужат основой для разработки проекта нормативной документации (Временной фармакопейной статьи) на траву клевера лугового.
ЛИТЕРАТУРА
- Флора Узбекистана: 3 т. - Ташкент: Уз АН, 1962. - С.439-442.
- Халилова Ш.Р., Урманова Ф.Ф., Халматов Х.Х., Шамсувалиева Л. Морфолого-анатомическое исследование клевера лугового (Trifoliumpratense L.), произрастающего в Узбекистане// Фармацевтический журнал. - Ташкент, 2012.-№3. - С.53-56.
- Государственная фармакопея СССР. - Изд. XI. - М.: Медицина, 1987. - вып.1. - С.336; 1990. - вып.2, С.398.
- Халилова Ш.Р., Урманова Ф.Ф. Количественное определение каротиноидов надземной части клевера лугового // Сборник материалов конференции, III Всероссийская научная конференция студентов и аспирантов «Молодая фармация - потенциал будущего». - Санкт-Петербург, 2013. - С.284-285.
- Химический анализ лекарственных растений / Под редакцией проф. Гринкевич Н.И., доц. Софронич Л.Н. Москва: Высшая школа, 1987. - С.285.