Противовоспалительная активность настоя и водорастворимых полисахаридов травы короставника полевого (knautia arvensis (l.) coult.)

РЕЗЮМЕ

В статье представлены результаты изучения влияния настоя и водорастворимых полисахаридов травы короставника полевого на экссудативную и пролиферативную стадии воспаления. Результаты эксперимента показывают, что настой и водорастворимые полисахариды травы короставника полевого обладают противовоспалительными свойствами, проявляющимися в угнетении стадий экссудации и пролиферации. Влияние настоя и водорастворимых полисахаридов на различные стадии воспаления экспериментально изучено впервые.

Во флоре России произрастают 2 вида рода Короставник - Knautia L. семейства Ворсянковые (Dipsacaceae), из которых наиболее распространен короставник полевой (Knautia arvensis (L.) Coult.) [7,14]. Короставник полевой - многолетнее травянистое Евроазиатское растение, широко распространенное почти по всей Европе, в Западной Сибири, Казахстане. В России произрастает в Европейской части (кроме северных районов), на Северном Кавказе, на Юге Западной Сибири, как заносное - на Сахалине. В Средней России растет во всех областях. Общий ареал распространения: лесная зона, лесной и субальпийский пояс Европы, Западной Сибири и Предкавказья. Данный вид широко встречается во всех областях Центральной России по лугам, по разреженным лесам и опушкам, среди кустарников, по паровым полям, на пастбищах [7,9,14].

Короставник полевой издавна применяется в народной медицине в качестве противовоспалительного, отхаркивающего, антисептического средства [4,6]. Из данных литературы известно, что трава содержит витамин С (14,58 %) [1], сапонины, горькие и дубильные вещества, иридоиды, сахара, каротин (провитамин А) (до 140 мг%), и другие витамины, микро- и макроэлементы [1,2]. Однако до настоящего времени полисахариды данного вида изучены недостаточно, не установлена их фармакологическая активность.

Цель нашей работы заключалась в экспериментальном изучении влияния настоя и водорастворимых полисахаридов (ВРПС) из травы короставника полевого на различные стадии воспалительного процесса. Воспаление - сложный многоступенчатый процесс, представляющий собой динамический каскад биологических причинно-следственных явлений, проходящих в своем развитии через ряд стадий и фаз [13]. Поэтому оценку противовоспалительного действия изучаемого настоя и водорастворимых полисахаридов проводили с учетом их влияния на разные стадии воспалительного процесса.

Материалы и методы исследования. Объектом исследования являлся настой и водорастворимые полисахариды (ВРПС), полученные из травы короставника полевого. Сырье для получения настоя и ВРПС заготавливали в Курской области в 2008-2010 гг. в период массового цветения растений. Настой травы короставника полевого готовили согласно ГФ XI [3]. ВРПС из травы короставника полевого получали по методике Н.К. Кочеткова [5].

Экспериментальная часть. Противовоспалительные свойства оценивали на двух моделях. Исследование проводили на беспородных мышах массой тела 18-20 г, белых беспородных крысах массой 180220 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария Курского государственного медицинского университета. Исследования выполняли в соответствии с правилами, принятыми Европейской Конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей (г. Страсбург, 1986) и приказом №708н Минздравсоцразвития России «Об утверждении правил лабораторной практики» [8]. Антиэкссудативное действие ВРПС и настоя оценивали в условиях острого асептического воспаления стопы мышей, вызванного формалином, по степени ингибирования прироста отека стопы на фоне препаратов по сравнению с контролем - группой интактных животных [10].

Экссудативный отек вызывали путем субплантарной инъекции в правую заднюю стопу мышей 0,02 мл 2% водного раствора формалина. Исследуемые препараты вводили натощак однократно внутрижелудочно в дозах: ВРПС - 200мг/кг (в объеме раствора 0,2 мл на 20 г массы животного) в виде водной взвеси, настой травы короставника полевого (1:10) - 1 мл/кг за 45 минут до введения флогистика. Опыты проводили на мышах массой 18-20 г. В опыт брали три группы мышей.

Первой группе животных вводили внутрижелудочно (через зонд) ВРПС, второй - настой травы исследуемого растения, третьей - воду дистиллированную (контроль). Массу стопы измеряли через 3 часа (на пике отека) после инъекции флогистика на электронных весах, в качестве контроля использовали левую лапку того же животного, в которую параллельно с введением флогистика инъецировали равный объем изотонического раствора натрия хлорида. О выраженности воспалительного отека судили по приросту веса воспаленных лапок, который определяли по разнице в массе между воспаленными и невоспаленными лапками; об антиэкссудативной активности - по разнице между величиной отека лапы, вызванного формалином у контрольных животных и у мышей, получавших изучаемые ВРПС, настой.

Антипролиферативную активность ВРПС и настоя изучали на модели «ватной гранулемы» у беспородных белых крыс массой 180-220 г [10,12]. Крысам, находящимся под легким эфирным наркозом, в области спины тщательно выстригали шерсть и в асептических условиях делали продольный разрез кожи и подкожной клетчатки длиной 1-2 см. Затем пинцетом через образовавшийся разрез кожи в подкожной клетчатке формировали полость, в которую помещали предварительно простерилизованный ватный шарик массой 25 мг и накладывали 1-2 шва. Через 7 дней имплантированный шарик с образовавшейся вокруг него грануляционной тканью извлекали и высушивали до постоянной массы при 55-60°С.

Массу образовавшейся грануляционно-фиброзной ткани определяли по разнице между массой высушенной гранулемы и массой имплантированного ватного шарика. ВРПС вводили в дозе 100 мг/кг массы животного на протяжении всего эксперимента ежедневно. Дистиллированную воду (контроль) и настой травы короставника полевого (1:10) вводили в аналогичных условиях в дозе 1мл/кг массы тела в сутки.

Статистическая обработка результатов эксперимента проводилась согласно ГФ XI с использованием критерия Стьюдента [3,11].

Результаты и их обсуждение. Антиэкссудативная активность. Изучение антиэкссудативной активности исследуемых ВРПС и настоя на модели воспаления, вызванного формалином, показало, что они влияют на фазу экссудации процесса воспаления, вызывая уменьшение отека конечности мышей (таблица 1). Из данных таблицы видно, что при введении ВРПС и настоя травы короставника полевого обнаруживается тенденция к уменьшению объема отека. При введении ВРПС в дозе 200 мг/кг отек уменьшался на 12,27%, настоя в дозе 1мл/кг - 16,97%, по сравнению с контролем. Исследуемый настой в большей степени влияет на фазу экссудации по сравнению с ВРПС изучаемого растения.

Таблица 1 - Влияние настоя и ВРПС травы короставника полевого на отек лап, вызванный у мышей формалином (n=6)

Примечание: * - достоверность различий с контролем (Р<0,05).

Антипролиферативное действие. Результаты исследования влияния изучаемых ВРПС и настоя на пролиферативный компонент воспаления представлены в таблице 2. Из данных таблицы 2 видно, что в контрольной группе животных вес грануляционной ткани составил 94,33±0,71 мг. Эту величину мы приняли за 100%. В остальных сериях опытов под влиянием исследуемых препаратов величина грануляционной ткани по сравнению с контрольными данными была меньше: настой травы короставника полевого (1:10) (доза 1мл/кг) - 80,67±0,88 мг, ВРПС травы короставника полевого (доза 100мг/кг) - 51,83±1,30 мг. По результатам эксперимента для настоя травы короставника полевого в дозе 1мл/кг % угнетения образования гранулемы составил 14,5%, для ВРПС травы короставника полевого - 45,1%. Исследуемые ВРПС угнетают процесс образования гранулемы в большей степени по сравнению с настоем изучаемого растения.

Таблица 2 - Влияние настоя и ВРПС травы короставника полевого на образование грануляционнофиброзной ткани у крыс (n=6)

Примечание: * - достоверность различий с контролем (Р<0,05).

Выводы. Таким образом, в результате проведенных исследований было установлено, что настой и водорастворимые полисахариды травы короставника полевого обладают противовоспалительной активностью. Влияние настоя и водорастворимых полисахаридов на различные стадии воспаления экспериментально изучено впервые.

ЛИТЕРАТУРА

1. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер. - M.: Наука, 2001. - Т. II. - 764 с.
2. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головкин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер. - M.: Наука, 2002. - Т. III. - 216 с.
3. Государственная фармакопея СССР. Вып.1. Общие методы анализа. M3 СССР. - XI изд., доп. - M.: Медицина, 1987. - 334 с.
4. Дикорастущие полезные растения России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. - Спб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663 с.
5. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.К. Кочетков. - M.: Химия, 1970. - 378 с.
6. Лавренов, В.К. Энциклопедия лекарственных растений народной медицины / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. - СПб: Нева, 2003. - 272 с.
7. Mаевский, П.Ф. Флора средней полосы Европейской части России / n.M. Mаевский. - M.: Товарищество научных изданий КMК, 2006. - 600 с.
8. Приказ Mинистерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики».
9. Прудников, Н.А. Сосудистые растения Курской области / Н.А. Прудников, А.В. Полуянов. - Курск: КГУ, 2005. - 80 с.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - M.: Mедицина, 2000. - 398 с.
11. Сернов C.M., Гацура В.В. Элементы экспериментальной фармакологии. - M., 2000. - 352 с.
12. Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, И.А. Mохорт, S.M. Клебанов. - Киев, 1975. - 240 с.
13. Тринус, Ф.П. Фармакологическая регуляция воспаления / Ф.П. Тринус, В.К. Клебанов, О. Ганжа. - Киев: Здоровье, 1987. - С. 144.
14. Флора средней полосы России: Атлас-определитель / Киселева К.В., Mайоров С.Р., Новиков В.С. - M.: 3АО «Фитон+», 2010. - 544 с.