К настоящему времени известно множество препаратов, предлагаемых для ускорения заживления гнойных ран, в их числе значительную часть составляют препараты растительного происхождения. Новая отечественная субстанция, получаемая из верблюжьей колючки киргизской – алхидин, представляет собой биологически активный комплекс, состоящий из полимерного проантоционидина (полифлавон), водорастворимого гетерополисахарида, аминокислот, флавоноидов и микроэлементов. По данным доклинических исследований предполагается, что этот комплекс может обладать обладает антиоксидантными, цитопротекторными и ранозаживляющими свойствами [1].
Настоящая работа имеет своей целью подробное описание антиоксидантного потенциала субстанции алхидин, имея ввиду разработку нового ранозаживляющего препарата.
Материалы и методы. Работа выполнена на 30 белых беспородных крысах-самцах массой 180 – 220 г. Для проведения исследований использовались животные одного помёта и приблизительно одинаковые по весу. В контрольные и опытные группы отбирались экземпляры из одной партии, внешне здоровые, без видимых дефектов на коже и признаков общей патологии. Выбраковывались крысы с подозрением на наличие спонтанной патологии.
Рану моделировали следующим образом. Раны животным наносились в области спины под общим ингаляционным эфирным наркозом с использованием устройств для фиксации и наркотизации мелких лабораторных животных в эксперименте [2,3]. Создавали гнойную рану, удаляя кожный лоскут, площадью 3 см2 на спине в межлопаточной области. Края раны фиксировали с помощью тефлонового кольца (подшивали), так, что поверхность раны оставалась открытой. Проводили путем инфицирования поверхности раны взвесью суточной агаровой культуры Staphylococcus aureus штамм 592 в количестве 109 микробных тел. Через 3 дня формировалась типичная гнойная рана. Из 30 крыс, взятых в эксперимент, стандартная гнойная рана была получена у 26.
Все животные были разделены на 2 группы: группа плацебо – животным в течение 7 дней вводили ежедневно, в утренние часы за 30 мин до выдачи в кормушку корма внутрижелудочно 1% крахмальный раствор в объеме 0,5 мл; группа «алхидин» - в аналогичных условиях животным вводили в том же объеме крахмала взвесь алхидина. В качестве контроля использованы 7 здоровых беспородных крыс.
Описывалось влияние алхидина на показатели свободнорадикальных процессов в сыворотке крови крыс [4,5,6,7].
Результаты и обсуждение. В табл. 1 приведены количественные данные, характеризующие изменение уровня генерации супероксиданионов в крови крыс под влиянием субстанции “алхидин”.
Таблица 1. Влияние алхидина на генерацию супероксид анионов в плазме крови крыс с моделью гнойной раны (n=6)
|
Группы
|
Скорость генерации супероксид анионов (%) |
Р < 0,05 |
|
Плацебо |
79,9 ± 14,46 |
* |
|
Алхидин |
47,4 ± 8,7 |
* ** |
|
Контроль (здоровые крысы) |
14,0 ± 4,4 (n = 6) |
|
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Как видно из данных, представленных в таблице, эффект исследуемой субстанции достаточно выражен в отношении скорости генерации супероксиданионов. По сравнению с плацебо алхидин снижает скорость генерации супероксиданионов на 40%. В табл. 2 охарактеризован потенциал влияния субстанции алхидин на уровень генерации оксида азота. Как видно, алхидин в определенной степени уменьшает генерацию оксида азота, причем, это статически значимое различие с эффектом плацебо.
Таблица 2.- Влияние алхидина на генерацию оксида азота в плазме крови крыс с моделью гнойной раны (n=6)
|
Группы |
мкмоль/л |
Р < 0,05 |
|
|
Плацебо |
45,3 + 8,36 |
* |
|
|
Алхидин |
25,1 ± 1,33 |
* ** |
|
|
Контроль |
3,1 ± 0,208 |
||
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
В табл. 3 приведены данные, характеризующие воздействие алхидина на уровень нитратов. Как видно из приведенных данных, значимого влияния алхидина на содержание нитритов в крови в условиях нашего наблюдения выявить не удалось.
Таблица 3 - Влияние алхидина на содержание нитритов (NO2-) в сыворотке крови крыс с моделью кожной раны (n=6)
|
Группы |
нМ/мг белка |
Р < 0,05 |
|
|
Плацебо |
16,4 ± 1,7 |
* |
|
|
Алхидин |
20,8 ± 1,8 |
* |
|
|
Контроль |
8,8 ± 1,2 |
||
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Таблица 4 содержит данные, относящиеся к концентрации в эритроцитах крови продукта ПОЛ - малонового диальдегида.
Таблица 4 - Влияние алхидина на содержание малонового диальдегида в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)
|
Группы |
мкмоль/мл |
Р < 0,05 |
|
Плацебо |
28,3 ± 3,15 |
* |
|
Алхидин |
10,39 ± 0,5 |
* ** |
|
Контроль |
6,96 ± 0,297 |
|
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Таблица 5 - Влияние суттигена и алхидина на содержание каталазы в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)
|
Группы |
мкмоль/л |
Р < 0,05 |
|
Плацебо |
0,133 ± 0.052 |
* |
|
Алхидин |
0,60 ± 0,08 |
* ** |
|
Контроль |
0,792 ± 0,086 |
|
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Как следует из данных табл. 4, алхидин более чем в 2 раза по сравнению с плацебо уменьшают содержание малонового диальдегида.
Как видно из данных табл. 5, уровень одного из ферментов системы антиоксидантной защиты – каталазы эритроцитов меняется под влиянием введения алхидина. Алхидин обеспечивает повышение этого показателя в 4,5 раза.
В табл. 6 приведены данные, характеризующие влияние исследуемого соединения на уровень активности ещё одного фермента антиоксидантной защиты – глютатионпероксидазы (ГПО).
Установлено, что под влиянием алхидина происходит повышение концентрации ГПО на 22,6% по сравнению с плацебо.
В табл. 7 приведены данные, характеризующие влияние алхидина на уровень средних молекул.
Таблица 6 - Влияние алхидина на содержание глютатионпероксидазы в эритроцитах крови крыс с моделью кожной раны (n=6)
|
Группы |
мкмоль/мл/мин |
Р |
|
Плацебо |
58,2 ± 3,72 |
* |
|
Алхидин |
71,4 + 6,7 |
* ** |
|
Контроль |
82,81+ 3,7 |
|
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Таблица 7- Влияние алхидина на уровень средних молекул у крыс с моделью кожной раны (n=6)
|
Группы |
Условные единицы |
Р |
|
Плацебо |
0,22 ± 0,043 |
* |
|
Алхидин |
0,1 ± 0,013 |
* ** |
|
Контроль |
0,07 ± 0,0022 (n=5) |
|
Условные обозначения:
* - достоверность различий по сравнению с контролем,
** - достоверность различий по сравнению с группой плацебо.
Влияние алхидина проявляется и в уровне концентрации средних молекул: алхидин снижают этот показатель примерно вдвое. Интегральные параметры, характеризующие состояние системы ПОЛ-АОЗ, описывались в аналогичных условиях и приведены в следующей таблице. Как можно судить по данным таблицы, алхидин угнетал интенсивность ПОЛ, снижая содержание в сыворотке как диеновых конъюгатов, так и оснований Шиффа. Введение алхидина сопровождалось существенным увеличением общей антиокислительной активности. При этом, через неделю после начала введения алхидина активность СОД в сыворотке крови уменьшалась на 36,5 %.
Таблица 8. Влияние алхидина на показатели свободнорадикальных процессов в сыворотке крови крыс
|
Показатели |
Плацебо |
Алхидин |
|
Величина перекисной хемилюминесценции, усл. ед. |
7,40 +/- 0,99
|
4,53 +/- 0,61***
|
|
Диеновые конъюгаты, нМ/мг белка |
0,99 +/- 0,12 |
0,28 +/- 0,36* |
|
Шиффовы основания, усл. ед./мг белка |
4,87 +/- 0,36 |
3,39 +/- 0,35** |
|
Антиокислительная активность, усл. ед./мг белка |
0,82 +/- 0,03
|
1,12 +/- 0,03*
|
|
Активность супероксиддисмутазы (СОД), ед./мг белка |
1,93 +/- 0,03 |
1,32 +/- 0,07* |
|
Церулоплазмин, мг% |
34,7 +/- 3,9 |
29,0 +/- 2,1 |
Примечание: В каждом определении объединяли сыворотку крови от 2-3 животных. Различие с плацебо достоверно: * p < 0,001; ** p < 0,01; *** p < 0,05.
Аналогичная картина отмечалась и в отношении содержания в сыворотке крови церулоплазмина, показатели которого, однако, колебались в пределах нормы. Снижение активности СОД при воздействии алхидина сопровождалось тенденцией к увеличению содержания нитритов, образующихся при окислении продуцируемого эндотелием сосудов оксида азота. Полученные результаты подтверждают более ранние данные [1] об антиокислительном действии алхидина. По-видимому, антиоксидантные свойства алхидина связаны с его антирадикальной активностью, то есть способностью непосредственно связывать свободные радикалы, образующиеся в организме из молекулярного кислорода, а также при перекисном окислении липидов, в частности, гидроксильный (ОН) и пероксильный (ROO.) радикалы [8].
Литература
- Рахимова А.К. Цитопротекторные свойства лекарственных препаратов /А.К. Рахимова, Д.Д.Кусаинова, А.Е.Гуляев.- Алматы, 2007.- 340с.
- Билич Г. Л. Влияние некоторых стимуляторов репарации на заживление операционных ран у молодых животных /Г.Л.Билич, А.З. Бузина // Здравоохранение Казахстана.- 1971.-№ 12.- С. 141-143.
- Лазарев Н. В. Воспроизведение заболеваний у животных для экспериментально-терапевтических исследований /Н.Л.Лазарев. – М.: Медгиз, 1954.- 391с.
- Экспресс-метод определения антирадикальной активности лекарственных веществ /Т.В.Починок, М.Л.Тараховский, В.А.Портнягина и др. //Хим.-фармацевт. журн.- 1985.- N 5.- C. 565-569.
- Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов /Т.В.Починок, М.Л.Тараховский, В.А.Портнягина и др. //Биофизика.- 1992.- Т.37.- C.1041-1047.
- Возрастные изменения активности свободнорадикальных процессов в тканях и сыворотке крови крыс /В.Н.Анисимов, А.В.Арутюнян, Т.И.Опарина и др. //Физиол. журн. им. И.М.Сеченова.- 1999.- Т.-84.- С. 502-507.
- Антиоксидазная активность сыворотки крови /Г.И.Клебанов, Ю.О.Теселкин, И.В.Бабенкова и др. //Вестн. РАМН.- 1999.- № 2.- С.15-22.
- Sawada M, Carlson J.C. Changes in superoxide radical and lipid peroxide formation in the brain, heart and liver during the lifetime of the rat /М.Sawada, J.C.Carlson //Mech.Ageing Dev.-1987.-Vol. 41.-P.125-137.