Культивирование различных тканей и органов взрослых хвойных пород в условиях invitro представляет большие трудности. Это связано с тем, что с увеличением возраста первичного экспланта в тканях этих растений происходят процессы, приводящие к ингибированию роста и способности их к регенерации. Образовавшиеся побеги взрослых хвойных растений характеризуются медленным ростом и низкой способностью к укоренению. Однако, несмотря на эти проблемы, многие исследователи пытаются найти пути решения культивирования invitro органов и тканей взрослых хвойных пород [1].
В наших исследований былоотработаны условия культивирования тканей взрослых растений сосны обыкновенной и ели обыкновенной invitro в зависимости от возраста первичного экспланта. Для этого были введены в культуру верхушечные и боковые почки, изолированные в период покоя с 2-, 5- и 10-летних растений (январь-апрель), и молодые побеги в период вегетации (май-конец июня), а также сегменты стеблей с хвоей и без нее, срезанных с ветвей в средней части ствола.
На первом этапе исследований стимулировали образование адвентивных почек из различных частей побега (верхушка побега, сегмент стебля с хвоей и без хвои) сосны обыкновенной.
Проростки из зародышей сосны, полученные на безгормональной среде Гресхофа и Доя (ГД), с добавлением 0,5% активированного древесного угля, делили на следующие сегменты: апекс проростка с хвоей и без хвои; апекс с частью гипокотиля; одиночные хвоинки; пучки хвоинок; сегменты гипокотиля и корня.апекс проростка с хвоей и без хвои; апекс с частью гипокотиля; одиночные хвоинки; пучки хвоинок; сегменты гипокотиля и корня в зависимости от состава питательной среды/
Образование адвентивных почек из различных сегментов проростков сосны стимулировали на срде ГД с добавлением витаминов, фитогормонов БАП и ИУК в концентрациях соответственно 13,33 и 2,85 мкМ. [2]
Исследования показали, что при культивировании верхушек проростков с хвоей или без нее на среде, содержащей цитокинин и ауксин в соотношении 10:1, наблюдалось развитие верхушечной почки в побег, в основании которого образовывались адвентивные почки. Интенсивность образования этих почек зависела от корреляционных взаимоотношений между семядолями и верхушкой проростка. Так, на верхушке с хвоей образовывалось 7-9 почек и в единичных случаях до 15 шт., а на верхушке без хвои – 3-5 шт. При использовании в качестве первичного экспланта верхушки проростка с частью гипокотиля (длиной 1,5-2 см) так же наблюдалось образование адвентивных почек (4-6 шт.).
Эти почки отличались более интенсивным ростом по сравнению с адвентивными почками, которые индуцировались на верхушке проростка без гипокотиля. Через 5-6 недель почки развивались в хорошо сформировавшиеся побеги длиной 0,5-1 см, не требующие дополнительного доращивания.После отделения от материнского экспланта побеги размножали, а часть побегов укореняли.
Образование адвентивных почек на изолированной одиночной хвое проростков сосны обыкновенной было также нами отмечено при культивировании их на модифицированной питательной среде ГД, содержащей БАП в концентрации 13,33 мкМ в сочетании с ИУК 2,85 3703 мкМ. При этом в 42% случаев наблюдалась дифференциация адвентивных почек непосредственно в тканях экспланта. Однако рост сформировавшихся почек был замедлен и нам не удалось получить из них хорошо растущих побегов, способных к укоренению.