Внедрение метода проточной цитометрии в диагностике хронических лимфопролиферативных заболеваний МЦ ЗКМУ им.М.Оспанова

Онкогематологическая патология уже в течение многих лет занимает важное место в структуре онкозаболеваемости Актюбинской области. На базе МЦ ЗКМУ им.М.Оспанова функционирует гематологическое отделение, отделение трансплантации и клеточной терапии. На протяжении последних лет общее количество впервые выявленных и наблюдаемых онкогематологических больных постепенно увеличивается, за 2020 год по заболеванию крови составило 640 случаев из них 92 случая хронические лимфопролиферативные заболевания (ХЛПЗ)[1].

За последние 10-15 лет достигнут значительный прогресс в диагностике онкогематологических заболеваний, что позволило определить новые диагностические маркеры. Тем не менее, несмотря на все большее проникновение молекулярных методов в онкогематологию, морфологический анализ имеет свою нишу и остается важным первичным звеном в диагностике лейкозов в МЦ ЗКМУ им.М.Оспанова. Лабораторная медицина является ведущей и формирует базу для доказательной медицины, поэтому в 2020 году было решено внедрить для диагностики лейкозов в большинстве случаев ХЛПЗ метод проточной цитометрии, без которого сегодня невозможно существование онкогематологии, трансплантологии, да и принятие клинических решений по большему числу заболеваний.

Диагностические исследования проводятся на анализаторе Beckman Coulter Navios. Анализатор способен измерять малоугловое (до 3-х углов) и боковое светорассеяние, а также регистрировать флуоресценцию на десяти длинах волн, с использованием 3-х различных лазеров, обеспечивая, таким образом, возможность одновременного исследования множества параметров.

На сегодня есть рабочая панель, разработанная в соответствии с наличием монокланальных маркеров и больных с определенными диагнозами. При острых лейкозах панель для определения моноклональных антител СD 15, CD 64, CD 44, CD11c, CD34, CD117, CD13,CD 33, CD14, CD56, CD45, хронические лимфопролиферативные заболевания СD 103, СD19, СD200, СD5, СD7, СD3, СD45, СD4, СD8, СD79а, СD25, СD38, СD138, СD 20.

Проточная цитофлюориметрия успешно используется в диагностике злокачественных лимфопролиферативных заболеваний. Однако иногда встречаются атипичные ситуации, сложные для интерпретации, что служит основанием для поиска новых маркеров, имеющих дифференциальнодиагностическое значение. Поэтому мы включили в панель анализ экспрессии СD200 у больных со злокачественными В-клеточными лимфопролиферативными заболеваниями [2] для дифференциальной диагностики.

Разработанные алгоритмы диагностики позволяют успешно дифференцировать большинство иммуноморфологических вариантов В-клеточных ХЛПЗ. На первом этапе традиционно выделяются группы опухолей с фенотипами CD19+CD5+, CD19+10+ и CD19+CD5–CD10–. Следующим шагом у больных с экспрессией CD19+CD5+ является анализ экспрессии на поверхностной мембране антигенов СD23, CD22, CD79b, CD20, позволяющий диагностировать типичный ХЛЛ и лимфому из клеток зоны мантии (ЛЗМ) [36]. Однако встречаются наблюдения с атипичной экспрессией, когда диагностика затруднена. Например, при ХЛЛ описаны случаи атипично низкой экспрессии CD5, CD23, CD43 и выраженной экспрессии CD20, CD22, CD79b. Кроме того, есть наблюдения с экспрессией CD23, снижением и отсутствием экспрессии СD5 при ЛЗМ. Следует отметить, что, нередко в группу с экспрессией СD19+CD5+ попадают другие лимфомы (не ХЛЛ и не ЛЗМ), в частности лимфомы из клеток маргинальной зоны (ЛМЗ), лимфоплазмоцитарная лимфома, волосатоклеточный лейкоз (ВКЛ), при которых экспрессия CD5 нехарактерна [6]. В таких ситуациях диагноз может быть верифицирован по совокупности данных гистологического, иммуногистохимического и цитогенетического исследований. Таким образом, хотя диагностика В- клеточных ХЛПЗ методом проточной цитометрии на основании изучения лимфоидных клеток крови и костного мозга имеет преимущества, в ряде случаев не представляется возможным избежать более инвазивных, трудоемких и требующих большего времени методов. Из этого следует, что диагностическая панель нуждается в усовершенствовании. Одним из маркеров, рекомендуемых для включения в диагностическую панель многими авторами, является CD200.

На данный момент ведется научно-исследовательская работа на тему: «Анализ основных и малых популяций лимфоцитов периферической крови больных лимфопролиферативными заболеваниями с использованием метода многоцветной проточной цитофлуориметрии», где гипотезой исследования является: моноклональные антитела CD200, CD103, CD 11c в основной многоцветной панели являются высокоинформативными маркерами для дифференциальной диагностики различных форм лимфопролиферативных заболеваний.

Задачами исследования:

1. Исследовать основные и малые популяции лимфоцитов больных лимфопролиферативными заболеваниями и установить фенотипические особенности экспрессии поверхностных клеточных маркеров CD 200, CD103, CD11c на В-лимфоцитах хронического лимфолейкоза (ХЛЛ), волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ), лимфомы из клеток мантийной зоны (ЛКМЗ), лимфомы маргинальной зоны селезенки (ЛМЗС).

2. Сопоставить результаты иммунофенотипирования с морфологическими методами исследования для постановки окончательного диагноза.

Литература

  1. ОМО МЦ ЗКМУ org_met2016@mail.ru
  2. YuV Mirolyubova., EA Stadnik., TS Nikulina., VV Strugov., TO Andreeva., YuV Virts., RV Grozov., AYu Zaritskey. Clinical oncohematology. 2017;10(2):169–75
  3. Луговская С.А.,Кисиличина Д.Г., Почтарь М.Е. и др. Новые маркеры (CD160, CD200, LAIR-1) в диагностике В-клеточных лимфопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. 2013;6(1):45–52.
  4. Купрышина Н.А.,Тупицын Н.Н. Проточная цитометрия в онкогематологии. Часть II. Основы и нововведения в диагностике хронического лимфолейкоза. Клиническая онкогематология. 2012;5(4):349–54.
  5. Стадник Е.А., Стругов В.В., Вирц Ю.В., Зарицкий А.Ю. Хронический лимфолейкоз. Рекомендации по диагностике и лечению. Трансляционная медицина. 2012;17:104–15.
  6. Swerdlow SH, Campo E, Harris NL, et al, eds. WHO Classifi cation of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. 4th edition. Lyon: IARC Press; 2008. 4. Kohnke T, Wittmann VK, Sauter D, et al. Proposal For a Novel Scoring System For The Diagnosis оf CLL. Blood. 2013;122(21):47–5599 (Plenary Abstracts).
Год: 2021
Город: Шымкент
Категория: Медицина