Актуальность. Силденафила цитрат является мощным и селективным ингибитором специфической фосфодиэстеразы типа 5. Используется в качестве средства для коррекции потенции. [1]. Максимальная общая концентрация силденафила в плазме крови после однократного приема препарата внутрь в дозе 100 мг в среднем составляет около 0,440 мкг/мл (коэффициент вариации - 40%) [1]. По другим источникам после однократного приема препарата внутрь в дозе 100 мг максимальная общая концентрация силденафила в крови составляла 0,325мкг/мл через 2,3часа и его метаболита N– десметилсилденафила 0,160мкг/мл через 2,5часа [2].
Исходя из ввышеуказанных данных необходимо знать какое количество силденафила в пробе мы сможем определить методом ТСХ при химико-токсикологическом исследовании.
Цель. Целью работы было определение предела обнаружения силденафила цитрата методом ТСХ на пластинах Silufol и Sigma Aldrich.
Пластины Silufol изготовленны из крупнопористого силикагеля Silpearl, закрепленного на алюминиевой фольге, с флуоресцентным индикатором 254нм. Пластины Sigma Aldrich изготовленны из среднепористого силикагеля, закрепленного на алюминевой фольге, с флуоресцентным индикатором 254нм, размер зерен 8-12мкм, толщина слоя 200мкм.
Материалы и методы. Для приготовления растворов силденафил цитрата решено было использовать этанол в качестве растворителя. Расчет концентрации силденафила цитрата в пробе вели с учетом растворимости силденафила цитрата в этаноле равной 1,3мг/мл [3,4]. Для этого таблетку Рамегра-100 содержащую 140,45мг силденафила цитрата тщательно измельчали и отделяли от оболочки. Полученный порошок растворяли в 10,0мл этанола, тщательно перемешивали и фильтровали полученный раствор, доводили до метки этанолом. Далее 1мл полученного раствора разбавляли этанолом до 10,0мл и наносили на пластины Silufol и Sigma Aldrich в виде пятен градуированным капилляром от 0,065мкг до 1,17мкг на пятно. Хроматографировали в системе хлороформ-этанол (9:1) на высоту 10см. По достижении 10см пластины высушивали в токе теплого воздуха. Просматривали в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254нм, проявляли в парах йода и реактивом Драгендорфа модифицированным по Мунье. Определяли значения Rf силденафила цитрата. Предел обнаружения регистрировали визуально. Силденафил цитрат в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254нм регистрируется в виде пятна синего цвета. В парах йода силденафил цитрат регистрируется в виде пятна светло-желтого цвета на белом фоне на пластинах Sigma Aldrich, в виде коричневого пятна на синем фоне на пластинах Silufol. С реактивом Драгендорфа силденафил цитрат на пластинах Sigma Aldrich дает красно-коричневые пятна на желтом фоне.
Полученные результаты. Результаты изучения предела обнаружения силденафила цитрата и значения Rf представлены в таблице 2.
Таблица 2
|
Проявитель |
Silufol |
Sigma Aldrich |
||
|
Rf |
Предел обнаружения мкг/пятно |
Rf |
Предел обнару- жения мкг/пятно |
|
|
УФ 254нм |
0,58 |
0,52 |
0,52 |
0,13 |
|
Пары йода |
1,17 |
1,04 |
||
|
Реактив Драгендорфа |
- |
- |
1,04 |
|
Предел обнаружения в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254нм на пластинах Sigma Aldrich составил 0,13мкг/пятно, а на пластинах Silufol – 0,52мкг/пятно, что в 4 раза выше, чем на пластинах Sigma Aldrich.
Предел обнаружения в парах йода и реактивом Драгендорфа на пластинах Sigma Aldrich составил 1,04мкг/пятно, а на пластинах Silufol – 1,17мкг/пятно, что в 1,125 раза выше, чем на пластинах Sigma Aldrich.
Выводы: Наиболее чувствительным проявителем является ультрафиолетовый свет с длиной волны 254нм, предел обнаружения силденафила цитрата на пластинах Sigma Aldrich составил 0,13мкг/пятно, а на пластинах Silufol – 0,52мкг/пятно. Концентрация силденафила цитрата определяемого на пластинах Sigma Aldrich в 4 раза ниже, чем на пластинах Silufol.
Пары йода и реактив Драгендорфа менее чувствительный проявитель по сравнению с УФ 254нм, предел обнаружения силденафила цитрата на пластинах Sigma Aldrich составил 1,04мкг/пятно, а на пластинах Silufol – 1,17мкг/пятно. Концентрация силденафила цитрата определяемого на пластинах Sigma Aldrich в 1,125 раза ниже, чем на пластинах Silufol.
При химико-токсикологическом обнаружении силденафила методом ТСХ концентрация должна быть не ниже 0,13мкг в наносимой пробе, пластины Sigma Aldrich, а в качестве проявителя ультрафиолетовый свет с длиной волны 254нм.
Литература
- Инструкция по применению Рамегра – 100// Утверждена Министерством Здравоохранения Республики Узбекистан Главное управление по контролю качества лекарственных средств и медицинской техники. Ташкент. 04 декабря 2014г.- №23.
- Anthony C Moffat, Clarke’s. Analysis of Drugs and Poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmortem material, Fourth Edition, Pharmaceutical Press 2011, p.2055.
- Faezeh H. Pirhayati, Ali Shayanfar, Anahita Fathi-Azarbayjani, Fleming Martinez, Sanaz Sajedi-Amin, Abolghasem Jouyban, Thermodynamic Solubility and Density of Sildenafil Citrate in Ethanol and Water Mixtures: Measurement and Correlation at Various Temperatures, Journal of Molecular Liquids (2016), doi:10.1016/j.molliq.2016.11.055