Аннотация. Исследована потенциальная мутагенная активность представителей класса терпеноидных, флавоноидных, алкалоидных соединений – арглабина, оксимпиностробина, гармина гидрохлорида. Исследование проводилась в микропланшетном варианте теста Эймса (Ames MPF™ Penta I). По результатам исследование установлено, что ни для одного штамма Salmonellatyphimurium не обнаружено статистически достоверного дозозависимого увеличения числа колоний ревертантов в присутствии препарата и веществ в изученном диапазоне доз.
Ключевые слова: генотоксичность, цитотоксичность.
Введение. В настоящее время в плане поиска новых лекарственных веществ активно изучается растительное сырье. Но при этом оценка генотоксичности растительных веществ проводиться недостаточно [1].Исследование мутагенности новых фармакологических средств и вспомогательных компонентов лекарственных форм проводятся на этапе доклинического изучения и предусматривают оценку способности лекарственных средств к индукции разных типов мутаций в зародышевых и соматических клетках, для обнаружения ДНК реактивных генотоксичных веществ (мутагены). С этой целью используют комплекс методов, выполняемых на разных тест-объектах [2]. Наиболее используемым для оценки безопасности лекарственных средств является краткосрочный тест Эймса [3].
Целью исследования является оценить безопасность (генотоксичность) растительных веществ. На генотоксичность были исследованы соединения алкалоидного, терпеноидного и флавоноидного класса. Растительные вещества данных типов составляют подавляющую часть фармакологических средств, поэтому их проверка на мутагенность имеет большое значение.
Материалы и методы. Объекты исследования: таблетки«Арглабин», капсулы «Гармина гидрохлорид», капсулы«Оксимапиностробин».
Исследование проводилось в условиях invitroв тесте Эймса(Ames MPF™ Penta I), с использованием индикаторных штаммов S.typhimurium (ТА98, ТА100, ТА1535) [4,5,6]. Для каждого тест-штамма использовался свой позитивный контроль: 2-нитрофлуорен (ТА98), 4-нитрохинолин-N-оксид (ТА100), N4-аминоци- тидин (ТА1535).
Оценка мутагенности осуществлялась с фракцией S9 (для обнаружения мутагенности возможных метаболитов субстанции) и в ее отсутствии.
Для каждой концентрации тестируемого образца проводился подсчет количества лунок с ревертант- ными колониями, полученные показатели сравнивались с показателем для негативного контроля. Увеличение количества ревертантных колоний под действием тестируемого образца по сравнению с негативным контролем свидетельствовала о том, что образец проявляет мутагенную активность в тесте Эймса (Ames MPF™ Penta I).
Результаты. При предварительном тестировании цитотоксичности арглабина, гидрохлорида гармина, оксимапиностробина в условиях без метаболической активации и с полной метаболической активацией выявлено цитотоксическое действие в концентрациях, превышающих 250 мкг/мл, для арглабина, 100 мкг/мл – для гидрохлорида гармина, 1000 мкг/мл – для оксимапиносробина в отношении штаммов S. typhimurium.
Исследованный диапазон доз таблетки «Арглабин» для штаммов ТА100, ТА1535 составлял от 5,0 до 100 мкг/мл, а для штаммов ТА98, ТА1537 – от 5,0 до 250 мкг/мл. Таблетки «Арглабин» ни в одной из концентрации, не вызывали увеличение количества ревертантов штаммов S. typhimurium относительно негативного контроля.
В исследуемом диапазоне доз капсулы «Гарминагидрохлорид» – от 0,5 мкг/мл до 100,0 мкг/мл и капсулы «Оксимапиностробин» – от 10 мкг/мл до 100 мкг/мл, не способствовали увеличению числа колоний ревертантов относительно базового уровня спонтанных мутаций. В присутствии и отсутствии метаболической активацией фракцией S9 ни в одной из концентрации, не вызывали увеличение количества ревертантов штаммов S. typhimurium относительно негативного контроля. Кратность превышения относительно нулевой линии в исследуемом диапазоне доз составляла менее, чем 2.0 (уровень значимости p>0,05).
Обсуждение результатов. Антимутагенный эффект таблетки «Арглабин» зависит от противоопухолевого эффекта. Флавоноид оксимапиностробин взаимодействует с мутагенными метаболитами радикального характера, вызывая нейтрализацию, или торможение деятельности ферментных систем продуцирующий мутагенный метаболит.
Выводы. Установлено, что все вещества в изученном диапазоне концентраций, в присутствии или отсутствии системы метаболической активации не индуцировали генные мутации в тесте Эймса на штаммах S. TyphimuriumТА 98, ТА100, ТА1535, ТА1537.
Список литературы
- Astulla A., Zaima K., Matsuno Y., Hirasawa.Y., Ekasari W., Widyawaruyanti A., Zaini N.C., Morita H. Alkaloids from the seeds of Peganumharmala showing antiplasmodial and vasorelaxant activities. //J. Nat. Med. 2008; 62(2):.470-472.
- EFSA Recent developments in the risk assessment of chemicals in food and their potential impact on the safety assessment of substances used in food contact materials. //EFSA J. 2016; 14: 4357.
- M. Honma, A. Kitazawa, A. Cayley, R. V. Williamset all. Improvement of quantitative structure–activity relationship (QSAR) tools for predicting Ames mutagenicity: outcomes of the Ames/QSAR International Challenge Project.Mutagenesis. 2019 Mar; 34(1): 3–16.
- Цао Ихай, Цао Жэньхай. Ангиогенез подавляется при употреблении чая //Природа. 1999. №398. С. 6726.
- Ang E.L., Obbard J.P., Zhao H.M. Probing the molecular determinants of aniline dioxygenase substrate specificity by saturation mutagenesis. //FEBS J. 2007; 274: 928–93.
- Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. РАМН – 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО "Издательство "Медицина", 2005, - 832 с.