Флавоноиды ferula pachyphylla korov.

В данной статье описываются методы получения, выделения и идентификации флавоноидов из надземной части Ferula pachyphylla Korov. Далее при разделении смеси флавоноидов были получены три чистых флавоноидных вещества.

Ключевые слова: Ferula pachyphylla Korov., бензинная фракция, надземная часть Ferula pachyphylla Korov., УФ-спектроскопия.

Ранее нами были изучены терпеноиды, кумарины и сложные эфиры корней ферулы толстолистной (Ferula pachyphylla Korov.) [1]. Из нейтральной фракции суммы экстрактивных веществ были выделены и идентифицированы 4 вещества кумариновой природы: фарнезиферол А, конферол, полиантин, самаркандин. Из фенольной фракции суммы экстрактивных веществ были выделены еще 4 вещества, относящиеся к сложным эфирам терпеноидов. Из них три были идентифицированы с фероцином, фероцинином и юниферином, ранее выделенными из F. ceratophylla Rgl. et Schmalh. и F. junipherina Rgl. et Schmalh. [2,3]. Четвертое вещество, выделенное из данного растения и названное нами фероцидином, оказалось новым; для него установлено химическое строение как 10-изованилоил фецерола [3].

Цель исследования. Настоящая статья посвящена выделению и изучению флавоноидного состава надземной части Ferula pachyphylla Korov., заготовленной в Южно-Казахстанской области в период массового цветения.

Материалы и методы. 2 кг измельченного воздушно-сухого сырья экстрагировали 3 раза 96% этиловым спиртом. Объединенное спиртовое извлечение отгоняли до 1/3 части и разбавляли водой (1:2), после чего обрабатывали 5 раз экстракционным бензином для удаления балластных веществ и хлорофилла. Остаток, не перешедший в бензин, обрабатывали 3 раза хлороформом, затем 3 раза бутанолом. Таким образом, сумма экстрактивных веществ была разделена на бензиновую, хлороформную и бутанольную фракции.

Хроматографическое изучение бутанольной фракции на бумаге показало наличие в ней веществ флавоноидной природы. Для выделения флавоноидных веществ бутанольную фракцию обрабатывали сначала активированным углем, затем фильтровали и отгоняли до густого состояния, после чего смешивали с полиамидом и высушивали при комнатной температуре до сыпучего состояния.

Для разделения флавоноидов бутанольную фракцию пропускали через колонку с полиамидным сорбентом. Колонку промывали сначала водой для удаления водорастворимых сопутствующих веществ, затем 5% этанолом, постепенно увеличивая концентрацию спирта. Из элюата, содержащего 15% спирт, началось выделение вещества флавоноидной природы, окрашиваемого раствором AlCl3. После элюирования колонки 25% спиртом выделение указанных веществ прекратилось. Все фракции, предположительно содержащие флавоноиды, объединяли и отгоняли в вакууме досуха. Затем полученную сумму флавоноидных веществ рехроматографировали на колонке, заполненной полиамидом, элюируя индивидуальные вещества 5% этиловым спиртом, постепенно увеличивая концентрацию спирта. Фракции собирали по 200 мл и проверяли на наличие флавоноидов по характерной флуоресцепции веществ на хроматограммах в УФ-свете.

Результаты и обсуждение. Таким образом, были выделены в индивидуальном виде три вещества флавоноидной природы.

Вещеcтво I представляет собой желтые игольчатые кристаллы с Мм. 802, состава С15Н10О7, т.пл. 310-312оС. Уф-спектр (Etон, λ max, нм) 257,268 пл., 372. ИК-спектр (KBr, η max, см-1); 3385; 3300 (ОН); 1660 (> c=o γ-пирона); 1615,1565 (>c=c<); Rf 0,40 в системе СН3СООН-Н2О (6:4), БХ.

Вещество хорошо растворяется в водных растворах щелочей, метаноле, этаноле. При обработке хроматограммы 1% раствором FeCl3 вещество окрашивается в темно-зеленый цвет. Цианидиновая реакция положительная.

Методом дифференциальной УФ-спектроскопии с применением ионизирующих и комплексообразующих реагентов установлено наличие свободных гидроксильных групп при С3, С5, С7, а также при С'3 и С'4 , т.е. показано, что выделенное вещество является пентагидроксифлавоном. На основании полученных данных и по отсутствию депрессии температуры плавления в пробе смешения с достоверным образцом вещество I отождествлено с ранее известным флавоноидом кверцетином (рис. 1).

Вещество II желтые игольчатые кристаллы с Мм.464, состава С21Н20О12, т.пл. 235- 237 оС. Уф-спектр (EtOH, λ max, нм) : 258,266 пл., 362; + СН3СООNa : 276,395; + СН3ОNa : 276, 205; + СН3СООNa + HBO3: 272, 375.

В ИК-спектре (KBr, η max, см-1) присутствовали полосы поглощения при 3300 (ОН), 1665 (> c=o γ-пирона); 1615,1565,1515 (c=c); 1095,1030 (с-о). Rf 0,72 в системе СН3СООН-Н2О (6:4), БХ.

Вещество хорошо растворяется в спирте, горячей воде и не растворяется в эфире и хлороформе. Цианидиновая реакция отрицательная. При помощи дифференциальной УФ-спетроскопии с применением ионизирующих и косплексообразующих реагентов установлено наличие свободных гидроксильных групп при С5, С7, С'3 и С'4.

Вещество II гидролизуется при нагревании с разбавленными минеральными кислотами, образуя агликон. На основании сопоставления физико-химических свойств, результатов хроматографирования на бумаге со свидетелями, а также по отсутствию депресии температуры плавления в пробе смешения агликон идентифицирован с кверцетином. В гидролизате обнаружен углеводный компонент, который идентифицирован хроматографически с Д-галактозой. Место присоединения углеводного компонента установлено при помощи УФ-спектроскопии с ионизирующими и комплексообразующими реагентами, а также по положительной цианидиновой реакции агликона. Показано, что Д- галактоза присоединена к агликону кверцетину при С3. Таким образом, вещество II идентифицировано с гиперозидом, что подтверждается также отсутствием депрессии температуры плавления в пробе смешения вещества с достоверным образцом гиперозида (рис. 1).

Рис.1 Строение выделенных веществ: вещество I (кверцетин), R-H; вещество II (гиперозид), R- галактоза; вещество III (рутин), R- рутиноза.

Вещество III желтые пластинчатые кристаллы, состава С27Н30О16, с т. пл. 190-192 оС (водный этанол). УФ- спектр (Etон, λ max, нм) 258,266 пл., 360. В ИК-спектре вещества III отмечаются полосы поглощения, характерные для гидроксильных (3400 см-1) и карбоксильных (1670 см-1) групп, ароматической системы (1615, 1520, 1515 см -1).

При помощи дифференциальной УФ-спектроскопии с ионизирующими и комплексообразующими реагентами определено у вещества III наличие свободных фенольных гидроксильных групп при С5, С7, С'3 , С'4 и отсутствие при С3. При кислотном гидролизе вещество III расщепляется с образованием агликона с т.пл. 310-312 оС, идентифицированного на основании сравнения спектральных даннах и по отсутствию депрессии температуры плавления в пробе смешения с достоверным образцом с кверцетином.

При количественном кислотном гидролизе получено 45,5 мг агликона, что указывает на принадлежность вещества III к биозидам. После гидролиза в мягких условиях с 1% раствором серной кислоты в гидролизате хроматографически установлено наличие одного Rf (0,16) рутинозы. Отщепление рутинозы при ферментативном гидролизе вещества III рамнодиастазой и наличие в его ИК-спектре полосы поглощения при 880 см-1 показывает β- конфигурацию гликозидной связи. Принимая во внимание химические свойства, спектральные данные и отсутствие депрессии температуры плавления в пробе смешения с достоверным образцом вещество III идентифицировано с флавоноидным глюкозидом рутином (рис.1).

Выводы. Таким образом, в результате проведенных исследований из надземной части ферулы толстолистной (Ferula pachyphylla Korov.) выделены и идентифицированы на основании изучения физико-химических свойств и сравнения с достоверными образцами три индивидуальных веществ флавоноидной природы: 3,5,7,3',4'- пентагидроксифлавон (кверцетин), кверцетин -3-0-β- -галактопиранозид (гиперозид) и кверцетин-3-0-β-рутинозид (рутин).

Литература

  1. Комилов Х.М., Омирали М.А. Терпеноидные кумарины и сложные эфиры (Ferula pachyphylla Euq. Kor.) // Вестник ЮКГМА –Шымкент, 2004-№20-21.- С.499.
  2. Омирали М.А. Биологически активные компоненты корней ферулы толстолистной, произрастающей в Казахстане// Сборник республиканской научной конф. студентов «Студенческая наука: вчера, сегодня, завтра», посвященной 50- летию Западно-Казахстанской государственной медицинской академии им. М.Оспанова - Актобе, 2007.-С.30.
  3. Комилов Х.М., Омирали М.А. Строение фероцидина (Ferula pachyphylla Euq. Kor.) //Химия природных соединений.-Ташкент, 2004.-№6.–С.499.
Год: 2019
Город: Шымкент
Категория: Медицина