Изменение окислительного метаболизма липидов крови при индометациновом поражении желудка под влиянием фитопрепаратов из астрогала и корня солодки - рувимин

Резюме

При индометациновой поражения желудка накопление продуктов пероксидации липидов в гомогенатах желудка, содержание ДК и, концентрация МДА повысилась на 257% и 266%по сравнению с контрольной группой, в гомогенатах слизистой желудка при ИПЖ повышается,а под влиянием фитопрепаратов астрогала и корни солодки снижаются уровень ДК на -28,1% и 50%, концентрации МДА -32% и 45,5% по сравнению с группой получивших плантоглюцида. При ИИПЖ имеет место депрессия антиоксидантных систем крови, об этом свидетельствует снижение активности каталазы 37,6%%, ГП на 53,8%, ГР на 44,9% в гомогенатах слизитой желудка, а СОД на 38,5% в эритроцитах крови. После астрогаловой и рувиминотерапии при ИИПЖ активность СОД в эритроцитах крови увеличивается, по сравнению с плантоглюцидной показателем, на 3,2% и 19,3%. Активность ГП и ГР-энзимов, окисляющих и восстанавливающих глутатион в слизистой оболочке желудка, повышается после применение экстракта астрогала при ИИПЖ на 100% и 55%, по сравнению с фоновым показателем. Активность ГР и ГП повышается после применение рувимина при ИПЖ по сравнению с группой получивших плантоглюцида на 40,8% и 68,9%. Проведенные исследования показали, что состояниеИК СРОЛ-АОСв гомогенатах слизистой желудка при ИИПЖ повышается,а под влиянием фитопрепаратов астрогала и корни солодки снижаются уровень на 47,3% и 66,1%,по сравнению с группой получивших плантоглюцида ( контрольная,стандартная).

Ключевые слова:индометацин,поражения желудка ,перекисное окисления липидов,метаболизм, фитопрепараты астрогал,корни солодки, рувимин,плантоглюцид ( препарат сравнения)

Введение. Представление о физиологических и патологических процессах в организме человека основы-вается на признании ведущей роли клеточных биомембран. Биомембраны обеспечивают пространственную и структурную организацию клеток и субклеточных субстанций.Все биомембраны состоят из липидов и белка. Центральной частью биомембран считается биомолекулярный слой липидов, состоящий преимущественно из фракций фосфолипидов.Среди факторов, влияющих на липидную фазу биомембран особое место отводится процессам перекисного окисления липидов.

К настоящему времени накоплен достаточный материал, показывающий, что в клетке непрерывно протекают процессы ПОЛ [1-4] и вследствие этого мембранные структуры клетки находятся под постоянной угрозой повреждающего действия этих процессов. Анализ общих механизмов свободнорадикального окисления липидов в мембранных системах позволяет объяснить широкий круг явлений, протекающих в мембране при перекисном окислении, и помогает в разработке методов регуляции этого процесса.

При воздействии индометацина значительно ускоряется ПОЛ органических компонентов живой системы, раз вивающихся по свободно-радикальному механизму, кроме этого показатели окислительного метаболизма рассматриваются, как биохимические детерминанты резистентности организма к внешним агентам [16 ]

Материалы и методы исследования. Иммобилизационный стресс вызывали путем фиксации животных в положении «на спине» в течении 24 часов. «Экстракт астрогала» фитопрепарата из корня солодкив вводили внутрижелудочно в форме водного раствора в дозе 30,0 мг/кг в течение 7 дней (1 раз в сутки) до иммобилизации крыс. Индометациновое повреждение слизистой оболочки желудка вызывали путем внутрижелудочного однократного введения индометацина в дозе 25 мг/кг «Вентрофит» в дозе 50 мг/кг вводили в течение 5 дней (1 раз в сутки) до введения ульцерогенного агента. В качестве препарата сравнения использовали плантаглюцид в дозе 300 мг/кг. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в аналогичном режиме в соответствующем объеме.

Исследования проводились на 370 белых крысах-самцах с исходной массой тела 180-200 г.Определение диеновых конъюгатов (ДК) в гомогенате желудка проводилось общепринятым методом Placer Z. [5] в модификации В.В. Гаврилова и М.И. Мишкорудной [6], и УФ-спектру первичных продуктов окисления ненасыщенных липидов с максимумом поглощения при 233 нм. Содержание диеновых конъюгатов выражали в единицах оптической плотности на мг/липидов. Содержание конечного продукта ПОЛ – малонового диальдегида (МДА) в исследуемых объектах определяли по модифицированной методике Л.И. Андреевой с соавторами [7]. Расчет содержания продуктов, реагирующих с ТБК, проводили с учетом коэффициента молярной экстинкции МДА, равного 1,56* 10⁵ моль см^-1.Определение общей антиокислительной активности (АОА) ткани желудка осуществлялось методом Е.Б. Спектор [8]. Принцип метода заключается в оценке АОА исследуемого объекта посредством определения ее ингибирующего действия на свободнорадикальное окисление, активизируемое УФ-светом. АОА выражалась в процентах ингибирования свободнорадикального окисления в опытной пробе по отношению к контрольной.

Содержание токоферола в гомогенате желудка определяли по модифицированной методике Н.К. Рудаковой-Шилиной, Н.П. Матюховой [9]. Метод основан на определении суммы токоферолов в липидах исследуемых объектов калориметрической реакции Эммери-Энгеля с FeCl3 и a1, a2– дипридилом. Содержание а-токоферола выражали в мг/г.Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) проводилось по методу С. Beauchamp et al. [10] в модификации В.Н. Чумакова и Л.Ф. Осинской [11]. Активность СОД выражали в условных единицах на грамм гомогената желудка. Определение активности глутатионепроксидазы (ГП) осуществляли по изменению поглащения восстановлен-ного глутатиона после инкубации в присутствии перекиси водорода (Paglia D.E., Valentine W.N.) [12]. Оптическую плотность измеряли на СФ-26 или СФ-46 при длине волны 255 нм. Активность энзима рассчитывали по разнице поглощения контрольной и опытной проб (DЕ) с использованием оптической плотности стандарта. Результаты выражались мМ ГSN/кг в минуту.Активность глутатионредук-та-ы (ГР) печени определяли методом R.E. Pinto et al. [13]. по скорости окисления НАДФН в присутствии окисленного глутатиона, спектрофотометрически при длине волны 320нм. Результаты выражали в мМ НАДФН/кг в минуту.Определение активности каталазы (КТ) проводили методом М.А.Королюк с соавторами [14]. Метод основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс. Интенсивность развившейся окраски измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм [15,17]..

Результаты исследования. Для выяснения состояния окислительного метаболизма липидов нами изучены содержание продуктов ПОЛ и состояние АОС гомогената желудка при индуцированном индометацином и влияние фитопрепаратов астрогала и корни солодки. Полученные данне представлены в таблице 1 и рисунке 1.

Результаты исследования показали повышенное накопление продуктов пероксидации липидов в гомогенатах желудка, содержание ДК и, концентрация МДА повысилась на 257% и 266%по сравнению с контрольной группой, что представлено в таблице-1.

При анализе изменений показателей ПОЛ в гомогенатах слизистой желудка на фоне индометациновой поражении, под влиянием фитопрепаратов, включающего астрогала ирувимин, происходило достоверное снижение содержания продуктов ПОЛ, в частности, содержания ДК и МДА.

Как свидетельствуют результаты исследований, введение экстракта астрогала а дозе 30 мг/кг снижает накопление токсических продуктов пероксидации липидов в слизистой оболочке желудка (таблица1, рисунок 1). Содержание диеновых конъюгатов и маловового диальдегида (МДА) под влиянием исследуемого экстракта астрогала при индометациновой повреждения желудка (ИПЖ) снижается после курсового введения на 50,7% и 54,5%,а платоглюцида уменьшение уровня диеновых конъюгатов состаляло 30,7% и 33,5%.Более выраженное уменьшение содержания промежуточных и конечных продуктов ПОЛ при ИИПЖ установлено при введении фитопрепарата корни солодки и составляло 65,4% и 63,6%, однако его уровень еще оставался повышенным по сравнению с интактными животными на 23,8% и34,4%.

Таблица 1-Влияние «фитопрепаратов Astragalus unifoliolatus Bunge и корня солодки» на пероксидацию липидов и антиоксидантную системы при повреждении желудка индометацином

Таким образом, проведенные исследования показали, что состояниепероксидации липидов в гомогенатах слизистой желудка при ИПЖ повышается,а под влиянием фитопрепаратов астрогала и корни солодки снижаются уровень ДК на -28,1% и 50% , концентрации МДА -32% и 45,5% по сравнению с группой получивших плантоглюцида ( контрольная,стандартная).

Для изучения механизмов, способствующих длительному поддержанию при индометациновом поражении желудка по свободно-радикальных реакций на высоком уровне, мы провели исследование антиоксидантной системы (АОС)гомогенатах слизистой желудка при ИПЖ .Изучили параметры антиоксидантной системы биобъектов при ИПЖ, по сравнению с контрольной группой. При ИИПЖ имеет место депрессия антиоксидантных систем крови, об этом свидетельствует снижение активности каталазы 37,6%%, ГП на 53,8%, ГР на 44,9% в гомогенатах слизитой желудка, а СОД на 38,5% в эритроцитах крови( Таблица 1, рисунок 2).

Активность СОД в эритроцитах крови при ИИПЖ увеличивается под влиянием экстракта астрогала на 36,7%, а под влиянием терапии, включающей рувимин, в течении 10 дней этот показатель повышается на 55%, по сравнению с фоновым показателем; После астрогаловой и рувиминотерапии при ИИПЖ активность СОД в эритроцитах крови увеличивается, по сравнению с плантоглюцидной показателем, на 3,2% и 19,3%.

Активность ГП и ГР-энзимов, окисляющих и восстанавливающих глутатион в слизистой оболочке желудка, повышается после применение экстракта астрогала при ИИПЖ на 100% и 55%, по сравнению с фоновым показателем. Активность ГР и ГП повышается после применение рувимина при ИПЖ по сравнению с группой получивших плантоглюцида на 40,8% и а 168,9%.

Таким образом, изучение влияния фитопрепаратов экстракта астрогала и из корня солодки- рувимина в течение 1 дней на систему СРОЛ и АОС в слизистой оболочке желудка показало, что фитопрепараты экстракта астрогала и рувимин обладал определенной антирадикальной, антиоксидантной активностью, о чем свидетельствует уменьшение содержание продуктов ПОЛ, а также активация антиоксидантной защиты исследуемых биообъектов, об этом свительствует динамика интегрального коэффициента ПОЛ-АОС гомогената слизистой оболочки желудка при введении фитопрепаратов на фоне ИПЖ..

ИК СРОЛ-АОС слизистой оболочке желудка у эксперментальных животных с ИПЖ увеличивается более чем в 5 раз, по сравнению с контрольной группой. После 10 дневного применения экстракта астрагала и биосластилина(фитопрепарат корни солодки) снижается ИК СРОЛ-АОС в слизистой оболочке желудка у эксперментальных животных с ИИПЖ на 65,6% и 77,8%, однако этот показатель остается увеличенным на 97% и 27%, по сравнению с КГ(рисунок 3).

Проведенные исследования показали, что состояние ИК СРОЛ-АОС в гомогенатах слизистой желудка при ИИПЖ повышается,а под влиянием фитопрепаратов астрогала и корни солодки снижаются уровень на 47,3% и 66,1%,по сравнению с группой получивших плантоглюцида(контрольная,стандартная) ( рисунки 2,3).

Литература

1. Орманов Н.Ж., Юнусметов И.Р., Бердыходжин М.Т., Адильбекова Д.А. Показатели перекисного окисления липидов при хронической фосфорной интоксикации // Здравоохранение Казахстана–1986.– №4.–С.46-47.
2. 2.Орманов Н.Ж. Пероксидация липидов и состояние антиперекисных систем у больных с хронической интоксикацией соединениями фосфора // Гигиена труда и профзаболеваний. –1990.– №4. – С.52-54.
3. 3.Орманов Н.Ж. Қорғасын.Асқын тотығу гомеостзы және фитофармакология. Шымкент,2011,256 бет.
4. Есалиев А. А., Орманов Н.Ж. Абдразаков А.У. Окислительный гомеостаз при хронической свинцовой интоксикации и его митофармакологическая коррекция Шымкент, 2017,140 с.
5. Placer Z. Lipperoxidations systeme in biologischen material. 2. Miff. Bestimmung der lipoperoxidation im songeticrorganismus // Hahrung, – 1968. – Vol.12. – № 6. – P.679-684.
6. ГавриловаВ.В.,МишкоруднаяМ.И.Спектрофотометрическоеопределениесодержаниягидроперекис ей липидов в плазме крови // Лаб. дело. –1983. – №3. – С. 33-36.
7. Андреева Л.И., Кожемякин Л.А., Кишкун А.А. Модификация метода определений перекисей липидов в тусту с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. дело. – 1988. – №11. – С. 41-43.
8. Спектор Е.Б., Аноненко А.А., Политова Л.Р. Определение общей АОА плазмы крови и ликвора // Лаб. дело. –1984. – №1. – С. 26-28.
9. Рудакова-Шилина Н.К., Матюхова Н.П. Оценка антиоксидантной системы организма // Лаб. дело. – 1982. – №1. – С. 19-21.
10. Beauchamp C., Fridouich S. Superoxide olis mutase improvrol ass ays and assay applicable to aсrytamide gels // Analyt. Biochim. –1971. – Vol.44,– №1. – P.276-281.
11. Чумакова В.Н., Осинская Л.Ф. Количественный метод определения активности цинк-медь. зависимой супероксиддисмутазы в биологическом материале // Вопр. мед. химии. – 1977. – №5. – С. 712716.
12. Paglia D.E., Valentine W.N. Studies no the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutatione peroxidase // J. Lab.Clin. Med.– 1967. –Vol.70, – №1. – P.158-169.
13. Pinto R.E., Bartley W. The effect of age and sex of glutatione reductase and glutatione peroxidase activities and on aerobis glutatione in rat liver // Biochem. J. – 1969. – Vol.112, № 1.
14. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лаб.дело. – 1988. – №1.– С. 16-19.
15. Арутюнян А.В., Дубинина Е.Е., Зыбина Н.А. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма //Спб.: ИКФ-Фолиант;2000.-С.104.
16. Орманов Н.Ж. Разработка и внедрение методов ранней диагностики хронической интоксикации соединениями фосфора: Автореф. доктора мед. наук. – Алма-Ата, 1992.– 57 с.
17. Орманов Н.Ж.,Адильбекова Д.А. Окислительный гомеотаз и фосфорная патология.Шымкент ,2011,120 с.