Разработка условий изолирования атомоксетина из биологических жидкостей методом жидкостной экстракции

Зарегистрированы неоднократные случаи острых и летальных отравлений антидепрессантом атомоксетином, который применяют в фармакотерапии синдрома дефицита внимания и гиперактивности, а также при терапевтически резистентной депрессии [1, 2]. Посмертные концентрации атомоксетина в биологических жидкостях составляли: артериальная кровь – от 0,1 до 8,3 мг/л, моча – 0,1 мг/л [2].

Целью исследований была разработка методики выделения атомоксетина из крови и мочи методом жидкостно-жидкостной экстракции, оптимизированной на основании ранее полученных нами данных о степени экстракции препарата из водных растворов органическими растворителями.

Материалы и методы. В исследовании использовали модельные пробы крови (10 мл) и мочи (20 мл), которые содержали 50, 100 и 200 мкг атомоксетина. При изолировании антидепрессанта из биологических жидкостей предварительно проводили экстракционную очистку с помощью диэтилового эфира (рН 1 – 2) и экстрагировали антидепрессант хлороформом в присутствии высаливателя аммоний сульфата из щелочной среды (рН 12). При этом форменные элементы крови осаждали добавлением 10 % раствора трихлорацетатной кислоты. Полученные экстракты очищали методом ТСХ, используя две подвижные фазы последовательно: хлороформ и этилацетат – метанол – 25% раствор аммония гидроксида (85:10:5). Количественное определение проводили методом ВЭЖХ с мультиволновым спектрофотометрическим детектированием. Использовали микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром А-02» (ЗАО «Эконова», Россия). Условия хроматографирования: колонка размером 2х75 мм с обращенной фазой С18 (ProntoSIL-120-5-C18 AQ); элюент 0,2 М перхлорат лития + 0,005 М перхлорная кислота – ацетонитрил (1:1), изократический режим элюирования; скорость подачи подвижной фазы 100 мкл/мин; температура термостата колонки 40º С; объем вводимой пробы 5 мкл.

Результаты и их обсуждениеВремя удерживания атомоксетина составило 4,4 ±0,1 мин (n = 3, RSD = 1,34 %). Количественное определение проводили при λ = 270 нм, соответстветствующей области максимального специфического светопоглощения препарата в метаноле. Концентрацию препарата в экстрактах рассчитывали по уравнению градуировочного графика, представляющего зависимость площади хроматографического пика от концентрации (мкг/мл). Методика количественного определения линейна в пределах 10 – 1000 мкг/мл, значения LOD (S/N = 3) и LOQ (S/N = 10) составили 3 мкг/мл и 10 мкг/мл соответственно. С помощью разработанной методики пробоподготовки из крови было выделено 32,7 + 2,7 % (RSD = 13,2 %) атомоксетина, из мочи – 68,2 + 3,2 % (RSD = 7,5 %) препарата.

 

Список литературы

  1. [1] Paxton, G. A. Acute suicidality after commencing atomoxetine / G. A. Paxton, N. E Cranswick. // J. Paediatr. Child Health. – 2008. – Vol. 44, Issue 10. – P. 596–598.
  2. [2] Clarke's analysis of drugs and poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmortem material: 4-th edition / Ed. by A. C. Moffat, M. D. Osselton, B. Widdop. – London, Chicago: Pharmaceutical Press, 2011. – 2736 p.
Год: 2018
Город: Шымкент
Категория: Медицина