Цикламетазол (3-циклогексиламинометилтиазоло[3,2-а]бензимидазола дигидрохло-рид), обладающий иммунокорректными антиагрегатным свойствами [1] ,[2], синтезирован на кафедре фармацевтической химии БГМУ (г. Уфа). В настоящее время на лекарственное средство идет подготовка нормативной документации и выполняются доклинические испытания. ЛД50 Цикламетазола для крыс составляет 280 мг\кг, летальная доза для человека, очевидно, может составить 90-180 мг\кг. Его применение в перспективном будущем с учетом относительно высокой токсичности обуславливает необходимость изучения этого соединения в химико-токсикологическом отношении.
Цель настоящего исследования - разработка методики изолирования биологически активной субстанции из биологического материала и ее количественная оценка.
Таблица 1-Результаты определения нейтрального красного в биологическом материале
|
Проба |
D исследуемого раствора |
Выделено нейтрального красного |
Метрологическая характеристика |
|
|
Мг |
% |
|||
|
1. |
0,29 |
0,0680 |
68,09 |
x̅ = ± 71,76 |
|
2. |
0,30 |
0,0726 |
72,64 |
S = ± 1,963 |
|
3. |
0,31 |
0,0726 |
72,64 |
S x = ± 0,82 |
|
4. |
0,28 |
0,0727 |
72,78 |
Δ x̅ = ± 2,29 |
|
5. |
0,30 |
0,0726 |
72,64 |
È = ± 3,19 |
В качестве модельного вещества для решения вопроса об экстрагируемости азотсодержащих веществ основного характера (таковым является Цикламетазол) в своей работе мы использовали нейтральный красный (Neutralrot, толуиленоый красный).
Таблица 2 - Результаты определения Цикламетазола в биологическом материале
|
Проба |
D исследуемого раствора |
Выделено Цикламетазола |
Метрологическая характеристика |
|
|
Мг |
% |
|||
|
1. |
0,47 |
0,0690 |
69,09 |
X̅ = ± 66,75 |
|
2. |
0,39 |
0,0666 |
66,64 |
S = ± 1,963 |
|
3. |
0,43 |
0,0657 |
65,74 |
S x = ± 1,12 |
|
4. |
0,45 |
0,0683 |
68,30 |
Δ x̅ = ± 1,99 |
|
5. |
0,35 |
0,0640 |
64,01 |
È = ± 2,98 |
Для проведения эксперимента с целью установления эффективности экстрагирования выбранной методики нами произведена затравка куриной печени (10г) нейтральным красным (0,1г), смесь выдержали при комнатной температуре в течение 5 суток. После чего измельченную печень настаивали на воде, подкисленной серной кислотой (pH=1-2) в течение двух часов, троекратно. Водные вытяжки процеживали и объединяли. Далее экстрагировали хлороформом три раза, предварительно обработав водное извлечение
25% раствором аммиака (pH=10-12). Хлороформные вытяжки объединяли и производили очистку центрифугированием при 8000 т\об в течение 3 мин. Количественную оценку эффективности экстракционной методики производили спектрофотометрическим методом.
По аналогичной методике нами выполнена пробоподготовка Цикламетазола. Результаты исследования приведены в таблице 2. Таким образом, разработанная нами методика изолирования из печеночной ткани новой биологически активной субстанции относительно не трудозатратна и достаточно эффективна.
Список литературы
- [1] Дианов В. М. Дигидрохлорид 3-циклогексиламинометилтиазоло[3,2-a]-бензимидазола, проявляющий иммунотропную и антиагрегационную активность: пат. 2405788 Рос. Федерация / Дианов В. М. Сибиряк С.
- В.., Алехин Е. К. - Заявл. 14.07.2009; опубл. 10.12.2010, Бюл №34
- [2] Дианов В. М. Новый синтетический иммуномодулятор из класса тиазолоазолов / В. М. Дианов, Е. К. Алехин, Д. А. Еникеев, М. Х. Зелеев, Д. М. Галимов, Р. Х. Алмаев, Г. Х. Ахтямова // Аллергология и иммунология. - 2011 - Т. 12, №1: Материалы XVI Международного конгресса по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (30 апреля - 3 мая 2011 г., Париж (франция)). - с. 160.