АННОТАЦИЯ
Впервые изучен аминокислотный состав надземной части клевера земляничного методом ВЭЖХ, произрастающего в Узбекистане. Установлено, что специфический набор аминокислот изучаемого растения включает 20 аминокислот, из которых 9 являются незаменимые.
Ключевые слова: клевер земляничный, свободные аминокислоты, связанные аминокислоты, высоко эффективная жидкостная хроматография.
Аминокислоты имеют выраженные фармако-терапевтические свойства. Некоторые из ных оказывают положительное влияние на сердечно-сосудистою систему, участвуют в процессах нервной регуляции, влияют на сосудистой тонус. Так, аргинин и глутаминовая кислота обладают антиоксидантным и гепатопротекторным действием, а также оказывают мембраностабилизирующий эффект. Они повыщают жизнеспособность тромбоцитов на моделях токсического воздействия тетрациклина и четыреххлористого углерода. Аланин и глицин регулируют уровен сахара в крови, участвуют в регенерации тканей. Серин обеспечивает запасы гликогена в печени и мышцах; он также важен для процессов обмена жиров и др. [1].
Лекарственные растения как потенциальные источники аминокислот изучены пока недостаточно, например, клевер земляничный (Trifolium fragiferum L.) [2]. В странах Востока применялось как
диуретическое и при болезнях селезенки.
Цель исследования – изучить состав аминокислот в траве клевера земляничного.
Экспериментальная часть. Для исследования аминокислотного состава использовали воздушно– сухую траву клевера земляничного, заготовленную в июле 2018г. в Джаркурганском районе Сурхандарьинской области.
Качественное определения аминокислот проводили в водных извлечениях с помощью нингидриновой реакции и хроматографически. Для этого 10 г воздушно-сухого измельченного сырья заливали 100 мл воды очищенной и нагревали на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Извлечение фильтровали, сырье вновь заливали 75 мл воды очищенной и экстракцию повторяли еще дважды. Водные извлечения объединяли и упаривали под вакуумом до 50 мл и использовали для проведения для качественных и хроматографического анализа.
При качественном анализе смешивали равные объемы исследуемых извлечений и 0,1% раствор свежеприготовленного раствора нингидрина и осторожно нагревали. При охлаждение появлялось краснофиолетовое окрашивание, что указывало на присутствие аминокислот в сырье клевера земляничного.
Хроматографический анализ проводили в тонком слое сорбента. Полученные извлечения наносили на подготовленные хроматографические пластинки «Силуфол» и хроматографировали в системе растворителей (концентрированный аммиак – 96% спирт этиловый в соотношении 9:32) параллельно с достоверными образцами аминокислот. Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали 0,2% спиртовым раствором нингидрина и нагревали в сушильном шкафу при 1050 С в течение нескольких минут. Аминокислоты проявлялись в виде красно-фиолетовых пятен. В траве клевера земляничного обнаружено 20 аминокислот, в том числе – 9 незаменимых.
Определение свободных аминокислот: Для проведения анализа измельчали сырье с помощью кофемолки и около 400 мг (точная навеска), воздушно–сухого образца суспендировали в пластиковых пробирках с помощью виброустановки Eppendorf (США) в 10 мл 10% -ТХУ (трихлор уксусная кислота) в комнатной температуре в течение 30 мин. Суспензию центрифугировали с помощью центрифуги Eppendorf (США) 14000 об/мин, 3 мин для удаления нерастворимых частиц.
Идентификацию и количественное определение аминокислот в осветленном растворе проводили после их превращения в фенилтиокарбамоильные (ФТК) производные методом ВЭЖХ на обращено- фазовой колонке [3]. Количественные расчеты проводили относительно хроматограмм ФТК-производного стандартной смеси аминокислот (Sigma, США). Хроматографию проводили с помощью хроматографа Beckman System Gold (Beckman,США) (рис.1).
Условия хроматографии:
- Column – Ultrasphere ODS 0.46 Ч 25cm, 5µm, Beckman;
- Mobile phase – «A» - 5% acetonitrile in 20 mM Na-acetate (pH 6.4),
«B» - 60% acetonitrile in water, flow 1 ml/min, pump program 0-min 2% B, 1-17 min linear gradient B from 2 to 48%, 17-20 min 100%B.
- Detection – 280 nm, 0.01 AUFs.
- Thermosta – 400C.
Связанные аминокислоты определяли после гидролиза хлористоводородной кислотой.
55
Таблица 1 – Аминокислотный состав надземной части клевера земляничного
|
Заменимые аминокислоты |
Содержание свободных аминокислот, мг % |
Содержание связанных аминокислот, мг % |
|
Аланин |
0,087 |
0,17 |
|
Аспарагиновая кислота |
0,217 |
0,27 |
|
Глицин |
0,146 |
0,20 |
|
Глутаминовая кислота |
0,499 |
0,13 |
|
Aспарагин |
0,120 |
- |
|
Пролин |
0,007 |
- |
|
Серин |
0,075 |
0,16 |
|
Тирозин |
0,183 |
0,14 |
|
Цистеин |
0,005 |
- |
|
Аргинин* |
0,051 |
0,18 |
|
Валин* |
0,183 |
0,15 |
|
Гистидин* |
0,003 |
0,09 |
|
Изолейцин* |
0,021 |
0,18 |
|
Лейцин* |
0,042 |
0,28 |
|
Лизин* |
0,008 |
0,17 |
|
Метионин* |
0,009 |
0,04 |
|
Триптофан |
0,040 |
- |
|
Треонин* |
0,042 |
0,15 |
|
Фенилаланин* |
0,077 |
0,14 |
|
Глутамин |
0,080 |
- |
|
Сумма аминокислот |
1,712 |
2,13 |
|
* Незаменимые аминокислоты |
Выводы:
1. В результате проведенного исследования впервые установлен состав аминокислот надземной части клевера земляничного.
2. Показано, что общее содержание аминокислот в траве клевера земляничного идентифицировано 20 свободных и 15 связанных аминокислот, суммарное содержание которых составляет 1,712% и 2,13% соответственно (в том числе – 9 незаменимых).
Список литературы
- Халилова Ш.Р., Пулатова Д.К., Урманова Ф.Ф. Изучение аминокислотного состава травы клевера лугового // Фармацевтический журнал, 2013. – №2. – С.29-33.
- Флора Узбекистана. 3 т. – Ташкент: изд. АН УзССР, 1955. – С. 439-445.
- Darbe A. Practical protein chemistry, a hand book, Jonh Wiley and Soans Ltd. – 1987. – P.250-275.