Газохроматографический анализ амино- и жирных кислот phlomi̇s sali̇ci̇foli̇a.

Научные исследования в области химии природных соединений постоянно увеличивают число лекарственных видов растений. В связи с этим изыскание новых видов лекарственного растительного сырья, их внедрение в научную медицину и расширение сырьевой базы остается актуальной задачей [1].

Растения семейства яснотковых - Lamiaceae обладают широким спектром биологической активности и используются как в официальной, так и в народной медицине. К числу таких представителей принадлежат виды рода Зопник - Phlomis L., широко распространенные на территории Южного Казахстана.

Ключевые слова: Южный Казахстан; Phlomis salicifolia; биологически активные вещества; фитохимический анализ.

Введение. Впервые проведено предварительное фитохимическое исследование надземной части Phlomis salicifolia, собранного в Южно-Казахстанской области. Фитохимический анализ экстрактов надземной части показал наличие основных групп биологически активных веществ: флавоноиды, полифенольные соединения, аминокислоты, фенолокислоты, альдозы, кетозы, алкалоиды, ксантоны, наличие аминогрупп, карбокси, орто- и дигидроксигрупп, непредельные связи, эфирные масла, сапонины [2-3]. Проведено количественное определение аминокислот и жирных кислот. Определены основные районы распространения Phlomis salicifolia в Южном Казахстане и выявлен сырьевой потенциал.

Целью работы явилось определение качественного и количественного содержания аминокислот и жирных кислот в надземной части Phlomis salicifolia, произрастающего в Южном Казахстане.

Методом газохроматографического анализа на газожидкостном хроматографе «Карло-Эрба-4200» (Италия-США) впервые определен аминокислотный состав сырья и состав жирных кислот (мг / в 100 г сырья). Установлено наличие 20 аминокислот, из них 8 незаменимых. Установлено процентное содержание насыщенных и ненасыщенных жирных кислот.

Экспериментальная часть. Объектом исследования были выбраны листья, соцветия и стебли Phlomis salicifolia, собранного в районах Южно-Казахстанской области - Каскасу, Боралдай, Машат.

В результате фитохимического анализа в Phlomis salicifolia было обнаружено наличие аминокислот и жирных кислот. Количественное определение содержания аминокислот и жирных кислот в сырье проводили методом газохроматографического анализа на газожидкостном хроматографе «Карло-Эрба- 4200» (Италия-США) [4-5].

Для определения связанных и свободных аминокислот 1 г надземной части Зопника иволистного гидролизовали в 5 мл 6 Н соляной кислоты при 105°С в течение 24 ч в ампулах, запаянных под струей аргона. Полученный гидролизат трижды выпаривали досуха на роторном испарителе при температуре 40- 50°С и давлении 1 атм. Образовавшийся осадок растворили в 5 мл сульфосалициловой кислоты. После центрифугирования (1500 об/мин) в течение 5 мин надосадочную жидкость пропускали через колонку с ионно-обменной смолой со скоростью 1 капля в сек. После этого смола промывалась 1-2 мл деионизированной воды и 2 мл 0,5 Н уксусной кислоты, затем до нейтральной рН деионизированной водой.

Таблица 1. Количественное содержание аминокислот в надземной части Phlomis salicifolia

Для элюирования аминокислот с колонки через нее пропускали 3 мл 6 Н раствора NН4ОН со скоростью 2 капли в сек. элюат собирался в круглодонную колбу вместе с деионизированной водой, которую использовали для отмывания колонки до нейтральной рН. Затем содержимое колбы досуха выпаривали на роторном испарителе под давлением 1 атм. и температуре 40-50°С.

После добавления в эту колбу 1 капли свежеприготовленного 1.5 % раствора SnCl2, 1 капли 2,2- диметоксипропана и 1-2 мл насыщенного соляной кислотой пропанола, ее нагревали до 110°С, выдерживая эту температуру в течение 20 мин, затем содержимое вновь выпаривали из колбы на роторном испарителе.

На следующем этапе в колбу вводили 1 мл свежеприготовленного ацилирующего реагента (1 объем уксусного ангидрида, 2 объема триэтиламина, 5 объемов ацетона) и нагревали при температуре 60°С в течение 1,5-2 мин. Затем образец снова выпаривали на роторном испарителе досуха и добавляли в колбу 2 мл этилацетата и 1 мл насыщенного раствора NaCl. Содержимое колбы тщательно перемешивали и по мере того, как отчетливо образуется 2 слоя жидкостей – брали верхний (этилацетатный) для газохроматографического анализа, который проводили на газо-жидкостном хроматографе (таблица 1).

Условия хроматографирования: - температура пламенно-ионизационного детектора – 300°С;

температура испарителя – 250°С; начальная температура колонки – 110°С; конечная температура колонки – 250°С; скорость программирования температуры колонки: от 110°С до 185°С – 6°С в мин; от 185°С до 250°С – 32°С в мин. При достижении температуры колонки 250°С она должна сохраняться такой до полного выхода всех аминокислот.

Как видно из приведенных данных, при определении количественного содержания аминокислот в надземной части Phlomis salicifolia выявлено наличие 20 аминокислот, из них 8 незаменимых: лейцин, изолейцин, валин, треонин, метионин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

Для определения жирных кислот 1 объем образца экстрагируют 20 кратным объемом смеси хлороформа и метанола (2:1) в течение 5 минут. Затем содержимое фильтруют через бумажный фильтр до получения чистого экстракта, который выпаривают в круглодонной колбе на роторном испарителе при температуре бани 30-40 ⁰С досуха. После этого добавляют в колбу 10 мл метанола и 2-3 капли хлористого ацетила и метилируют при температуре 60-70⁰С в специальной системе в течение 30 минут. Затем метанол выпаривают на роторном испарителе, а образец экстрагируют из колбочки 5 мл гексана и впрыскивают в газовый хроматограф (таблица 2).

Условия хроматографирования: температура инжектора – 188⁰С, температура детектора - 230⁰С, температура печи - 188⁰С, время анализа – 1 час. Содержимое колонки: полиэтиленгликольадипинат (20%) на целите – 545.

Таблица 2. Количественное содержание жирных кислот в надземной части Phlomis salicifolia

Результаты проведенных исследований расширяют существующие сведения об аминокислотном составе и количественном содержании жирных кислот представителей рода Phlomis L. и могут быть использованы при анализе лекарственных средств, полученных из растений данного рода.

В целях выявления перспективных видов растений впервые исследовано ранее не изученное растение Phlomis salicifolia, которое широко произрастает в районах Южно-Казахстанской области. В народной медицине Phlomis salicifolia применяют для лечения заболеваний кровеносной системы – повышенную артериальную гипертензию, плохую свертываемость крови, анемию, отеки сердечного происхождения, повышенную проницаемость сосудов и другие. Кашель, простудные заболевания, воспаление легких, туберкулез – все эти заболевания помогает победить Phlomis. Широкий спектр действия данного растения делает его перспективным сырьем для разработки лекарственных средств.

Список литературы

1. Лосева И.В. Сырьевая база лекарственных растений Казахстана и ее рациональное использование. – Учебно-методическое пособие. – Караганда. – 2008. – 110 с.
2. Музычкина Р.А., Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А. Качественный и количественный анализ основных групп БАВ в лекарственном растительном сырье и фитопрепаратах. –Алматы, 2004. – 48с.
3. Туребекова Г.А., Патсаев А.К., Махатов Б.К., Дауренбеков К.Н. Фармакогностическое изучение Зопника иволистного (Phlomis salicifolia), произрастающего в Южном Казахстане.- Материалы международной научно-практической конференции «Фармацевтическое образование, наука и производство-ориентир на стратегию «Казахстан-2020», Шымкент, 2014. С. 109-111.
4. Adams R. Determination of aminoacids profiles biological samples by gas chromatography // J. Chromatography.1974.Vol. 95. № 2 . P.188-212.
5. Горяева М.И., Евдикова Н.А. Справочник по газожидкостной хроматографии, 1977, Алма-Ата, 550 с.