Актуальность. За последние десятилетия микозы стали важной клинической проблемой и предметом для обсуждения послужили инфекции, вызванные грибами рода Candida [2]. Внутри биопленок дрожжевые грибы приобретают качественно новые свойства и повышенную устойчивость к воздействию факторов иммунной системы человека и антимикотическим средствам по сравнению с небиопленочными формами. Способность к образованию биопленок объясняет высокую выживаемость дрожжевых грибов, способность к рецидивированию и хронизации инфекционного процесса [1, 5].
Данная работа посвящена оцениванию активности биопленкообразования при хроническом кандидозе слизистой оболочки рта, что ранее не изучалось в научных исследованиях, [3,4], это позволит дополнить научные представления о морфологии и физиологии биопленок, обосновать новые подходы к диагностике и лечении биопленочных процессов.
Цель: Оценить количественную способность биопленкообразования грибов рода Candida на поверхности полистиролового планшета.
Материалы и методы: Объектами исследования служили 47 штаммов Candida выделенных от пациентов с хроническим кандидозом слизистой оболочки рта г. Караганды, на базе КГП «Областная клиническая больница». Исследование проводилось в Медицинском университете Караганды на кафедре клинической иммунологии, аллергологии и микробиологии.Выделение чистой культуры штаммов проводили общепринятыми методами. Идентификацию исследуемых штаммов выполняли на MALDI-TOF спектрометрии.
Количественную оценку способности биопленкообразования проводили на поверхности 96-луночных плоскодонных полистироловых планшетах иммуноферментным анализом по методу G.OʼToole и R. Kolter. Разведения грибов Candida готовили с помощью 0,9% раствора NaCl (10 ЕД по Тарасевичу, на ридере 450 нм = 0,5 ед. опт. плот.).По уровню адсорбции красителя этанолом, измеренному в единицах оптической плотности (OD450) на ИФА EVOLIS BIO RAD при длине волны 450 нм оценивали активность формирования биопленки. Для интерпретации полученных данных определяли критерии способности штаммами формировать биопленки в соответствии с классификацией доц. Рожко А.В., доц. Ю.И. Ярец и доц. Н.И. Шевченко: при значениях OD450 ниже 0,140 – считали, что штаммы не обладали способностью к образованию биопленки; при 0,140<ODпл≤0,280 – штаммы обладали слабой; при 0,280<ODпл≤0,560 – средней; при OD пл˃0,560 – высокой способностью к образованию биопленки. Полученные данные обрабатывались с помощью пакета программы IBM SPSS Statistics версия 25.
Результаты. По данным спектрофотометрического анализа штаммы Candida характеризовались
средней и высокой способностью к биопленкообразованию в соответствии с классификацией доц. Рожко А.В., доц. Ю.И. Ярец и доц. Н.И. Шевченко. Наиболее выраженная способность к образованию биопленки на поверхности полистиролового планшета у штаммов С.albicans.
Выводы. Проблема подавления или разрушения биопленок является перспективным направлением, поскольку в клинике классические методы антимикотекотерапии кандидозов слизистой оболочки рта малоэффективны или непредсказуемы из-за высокой устойчивости возбудителей в биопленках. В связи с этим, основным аспектом успешной диагностики и лечения кандидоза является изучение способности к формированию биопленок штаммами Candida.
Список литературы
- Бехало В.А., Бондаренко В.М., Сысолятина Е.В., Нагурская Е.В. Иммунобиологические особенности бактериальных клеток медицинских биопленок//Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2010.-№4. –C 97–105.
- Климко Н.Н., Козлова Я.И., Хостелиди С.Н. и др. Распространенность тяжелых и хронических микотических заболеваний в Российской Федерации по модели LIFE PROGRAM// Проблемы медицинской микологии. – 2014. – Т. 16, №1. – С. 3-8.
- Лисовская С.А., Халдеева Е.В., Глушко Н.И., Паршаков В.Р. Оценка способности к формированию биопленок клиническими штаммами Сandida albicans при острых и хронических формах кандидоза кожи и слизистых оболочек //Проблемы медицинской микологии-2017.-Т.19.-№1.- С.31-33.
- Ярец Ю.И. , Шевченко Н.И. Формирование биопленки INVITRO штаммами грибов рода CANDIDA// Успехи медицинской микологии.-2014.- С.74-76.
- Ramage G., Vande Walle K., Wickes B.L., López-Ribot J.L. Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.//Antimicrob. Agents Chemother. -2011-Vol. 45.-Р. 2475–9.