Фитохимический состав листьев артишока колючего выращиваемого в Узбекистане

Определено содержание основных групп биологически активных соединений в листьях артишока колючего выращиваемого в Узбекистане. Проведено количественное определение флавоноидов, органических кислот, кофеина и витаминов методом ВЭЖХ, определено количественное содержание суммы дубильных веществ, а также определено количественное содержание суммы оксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту СФ методом.

Ключевые слова: артишок колючий, оксикоричные кислоты, витамины, дубильные вещества, ВЭЖХ.

Потребность в открытии новых активных веществ и в получении на их основе лекарственных средств сохраняется до сих пор, поскольку человек по-прежнему остается безоружным перед значительным числом заболеваний. В непрерывном поиске лекарств растения оказываются ценнейшим исходным материалом. Анализ и стандартизация лекарственно растительного сырья отличается от анализа синтетических лекарственных препаратов своеобразием и трудоемкостью, так как в лекарственно растительном сырье содержится ряд биологически активных веществ относящихся по химическому строению к различным группам [1]. Для стандартизации каждой группы нужен индивидуальный подход. Разработка методик количественного определения и его применение к другим лекарственным объектам является весьма актуальным.

Целью данного исследования является фитохимическое изучение листьев артишока колючего выращиваемого в Узбекистане.

Материалы и методы. Объектами исследования служили листья артишока колючего, заготовленные в начале июля 2013 г. в Ташкентской области. Количественное определение биологически активных веществ в листьев артишока колючего изучали методом обращено - фазной ВЭЖХ на приборе AgilentTechnologies 1100 серии укомплектованного дегазатором G1379A, 4-х градиентным насосом 1311А и детектором VWDG1314 [2]. Колонка

AgilentZorbaxEclipseXDB-C8 (4,6х250 мм), предколонка 2,1x12,5 мм, размером частиц 5 мкм, подвижная фаза: раствор А- 10% ацетонитрил в 0,1% фосфорной кислоте (рН 2,2), раствор В- 50% ацетонитрила в 0,1% фосфорной кислоте (рН 2,2). Разделение проводили используя линейный градиент концентрации раствора В от 0 до 100% в течение 25мин. Скорость потока 1 мл/мин, температура колонки комнатная (20°С), давление в стартовых условиях градиента не более 100 бар, детектирование пиков проводили при УФ 300 нм. Объем инъекции на колонку - 10 pl.

Для проведения анализа использовано спиртовое (70% спирт этиловый, соотношение 1:100, температура 50°С, 2 часа) извлечение из листьев артишока колючего.

Приготовление стандартных образцов проводили следующим образом; точную навеску стандартных образцов растворяли в соответствующем растворителе. Затем из равных объемов (200 мкл) исходных растворов готовили стандартную смесь. Для проверки или уточнения калибровки использовали стандартные растворы, полученные разведением исходных.

Растворители и условия растворения, исходная и конечная концентрации приведены в таблице 1.

Таблица 1

Условия приготовления стандартных образцов

Вещество (стандарт)

Растворитель, условия растворения

Исходная концентрация, мкг/мл

Конечная концентрация, мкг/мл

1

Хлорогеновая кислота

Метанол

1300

130

2

Кофеин

Метанол: HCOOH (95:5)

2000

200

3

Рибофлавин

96% этанол

500

50

4

Кофеиновая кислота

Метанол (нагревание при тем. 50°С)

1100

110

5

Рутин

96%этанол (нагревание при тем. 30°С)

2000

200

6

Циннарозид

Метанол (нагревание при тем. 30°С)

1100

110

7

Скутелярин

96% этанол (нагревание при тем. 50°С)

600

60

8

Салициловая кислота

Метанол

2200

220

9

Лютеолин

96%этанол (нагревание при тем. 30°С)

1000

100

10

Кверцетин

Метанол

1200

120

11

Коричная кислота

Метанол

1000

100

Результаты и их обсуждения.Количественный состав биологически активных веществ в листьев артишока колючего установленный методом ВЭЖХприведены в таблице 2 и на рис. 1.

Таблица 2

Количественный состав основных биологически активных веществ в листьях артишока колючего установленный методом ВЭЖХ

Идентифицированные вещества

Время удерживания, мин

Площадь пика,

Содержание веществ, мкг/мл

1

Кофеин

7,107

23,42

1,1985

2

Хлорогеновая кислота

7,320

1139,97

88,1806

3

Рибофлавин

8,430

41,61

5,2976

4

Кофейная кислота

9,068

187,46

1,8748

5

Рутин

9,983

48,13

1,4586

6

Цинарозид

10,764

707,13

36,9495

7

Скутеларин

11,791

10,45

0,7011

8

Салициловая кислота

16,327

20,12

2,3540

9

Лютеолин

16,526

4,47

0,2262

10

Кверцетин

16,793

2,49

0,2066

11

Коричная кислота

18,661

3,59

0,1048

Результаты количественного определения биологически активных веществ методом ВЭЖХ в листьях артишока колючего показало высокое содержание хлорогеновой кислоты, цинарозида, рибофлавина и кофейной кислоты.

Количественное содержание дубильных веществ в листьях артишока колючего (табл.3) определяли методом перманганатометрии согласно методике описанной ГФ [3].

Таблица 3

Результаты количественного определения дубильных веществ в листьях артишока
колючего методом перманганатометрии

Найдено дубильных веществ, %

Метрологические характеристики

1

5,05

Х=5,09 3=0,03162 3^=0,01414 AX=O,0879 A X=O,0393 8=1,72% 8=0,77%

2

5,07

3

5,09

4

5,11

5

5,13

Количественное определение суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего проводили спектрофотометрическим методом. Методика количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего заключалась в следующем: точную навеску сырья измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм помещали в колбу емкостью 200 мл и добавляли 60 мл 50 % этилового спирта. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После охлаждения содержимое колбы фильтровали через вату в колбу емкостью 100 мл. Экстракцию проводили еще дважды. Полученные экстракты количественно переносили в колбу емкостью 200 мл и доводили объем колбы до метки 50% этиловым спиртом (раствор А). 0,5 мл раствора А помещали в колбу емкостью 25 мл и доводили объем колбы до метки 50 % этиловым спиртом.

Оптическую плотность раствора измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 329±2 нм. Раствором сравнения служил 50%- ный этиловый спирт [4].

Параллельно в аналогичных условиях измеряли оптическую плотность раствора РСО хлорогеновой кислоты, приготовленного аналогично испытуемому раствору из навески массой около 0,00700 г (точная навеска).

69

Содержание суммы оксикоричных кислот в процентах в пересчете на кислоту хлорогеновую вычисляли по формуле:

Д 1 * 111 о * C1 * IOO

“ “ До - nil • (IOO-W)

Д1 - оптическая плотность спиртового извлечения из листьев артишока колючего;

Д0 - оптическая плотность РСО хлорогеновой кислоты;

m1- навеска стандартного образца, г;

m0 - навеска сырья, г;

C - чистота стандартного образца, %

W - потеря в массе при высушивании анализируемого образца листьев артишока колючего, %.

Таблица 4

Содержание оксикоричных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту в

листьях артишока колючего

Оптическая Плотность

Найдено оксикоричных кислот, %

Метрологические характеристики

1

0,233

1,89

X= 1,86 3=0,0212 Sx=O,0095 AX=O,0544 AX= 0,0242 5 = 2,90% 5 = 1,30%

2

0,228

1,85

3

0,230

1,86

4

0,232

1,88

5

0,227

1,84

Выводы. Таким образом, установлено количественное содержание основных групп биологически активных веществ в листьях артишока колючего ВЭЖХ, СФ и титриметрическим методами анализа. По результатам количественного определения основных действующих веществ методом ВЭЖХ в сырье показали высокое содержание хлорогеновой кислоты (57,1457 мкг/мл), цинарозида (34,4802 мкг/мл), рибофлавина (5,2883 мкг/мл), кофеина (42,3348 мкг/мл) и кофейной кислоты (1,7315 мкг/мл). Сумма оксикоричных кислот установленная СФ методом в пересчете на хлорогеновую кислоту составило в среднем 1,86%. Сумма дубильных веществ в пересчете на танин определенная перманганатометрическим методом в среднем составило 5,09%.

Литература:

  1. Энциклопедия лекарственных растений: пер. /с испан., под ред. ЖерараШенюэ.- Испания: РидерзДайджест, 2004.- 351 с.
  2. High Performance Liquid Chromatography in Phytochemical Analysis /еdited by M.W. Hajnos, J. Sherma. - New York: Marcel Dekker, 2011. - 975 р.
  3. Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11 изд. - М.: Медицина, 1990. - Вып. 2. - 398 с.
  4. Мусиенко Е.С., Кисличенко В.С. Количественное содержание основных групп БАВ в сырье бирючины обыкновенной //Фармацевтический журнал.-Ташкент, 2013.- №2.-С.21-25.
Теги: СССР
Год: 2017
Город: Шымкент
Категория: Медицина