Определено содержание основных групп биологически активных соединений в листьях артишока колючего выращиваемого в Узбекистане. Проведено количественное определение флавоноидов, органических кислот, кофеина и витаминов методом ВЭЖХ, определено количественное содержание суммы дубильных веществ, а также определено количественное содержание суммы оксикоричных кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту СФ методом.
Ключевые слова: артишок колючий, оксикоричные кислоты, витамины, дубильные вещества, ВЭЖХ.
Потребность в открытии новых активных веществ и в получении на их основе лекарственных средств сохраняется до сих пор, поскольку человек по-прежнему остается безоружным перед значительным числом заболеваний. В непрерывном поиске лекарств растения оказываются ценнейшим исходным материалом. Анализ и стандартизация лекарственно растительного сырья отличается от анализа синтетических лекарственных препаратов своеобразием и трудоемкостью, так как в лекарственно растительном сырье содержится ряд биологически активных веществ относящихся по химическому строению к различным группам [1]. Для стандартизации каждой группы нужен индивидуальный подход. Разработка методик количественного определения и его применение к другим лекарственным объектам является весьма актуальным.
Целью данного исследования является фитохимическое изучение листьев артишока колючего выращиваемого в Узбекистане.
Материалы и методы. Объектами исследования служили листья артишока колючего, заготовленные в начале июля 2013 г. в Ташкентской области. Количественное определение биологически активных веществ в листьев артишока колючего изучали методом обращено - фазной ВЭЖХ на приборе AgilentTechnologies 1100 серии укомплектованного дегазатором G1379A, 4-х градиентным насосом 1311А и детектором VWDG1314 [2]. Колонка
AgilentZorbaxEclipseXDB-C8 (4,6х250 мм), предколонка 2,1x12,5 мм, размером частиц 5 мкм, подвижная фаза: раствор А- 10% ацетонитрил в 0,1% фосфорной кислоте (рН 2,2), раствор В- 50% ацетонитрила в 0,1% фосфорной кислоте (рН 2,2). Разделение проводили используя линейный градиент концентрации раствора В от 0 до 100% в течение 25мин. Скорость потока 1 мл/мин, температура колонки комнатная (20°С), давление в стартовых условиях градиента не более 100 бар, детектирование пиков проводили при УФ 300 нм. Объем инъекции на колонку - 10 pl.
Для проведения анализа использовано спиртовое (70% спирт этиловый, соотношение 1:100, температура 50°С, 2 часа) извлечение из листьев артишока колючего.
Приготовление стандартных образцов проводили следующим образом; точную навеску стандартных образцов растворяли в соответствующем растворителе. Затем из равных объемов (200 мкл) исходных растворов готовили стандартную смесь. Для проверки или уточнения калибровки использовали стандартные растворы, полученные разведением исходных.
Растворители и условия растворения, исходная и конечная концентрации приведены в таблице 1.
Таблица 1
Условия приготовления стандартных образцов
|
№ |
Вещество (стандарт) |
Растворитель, условия растворения |
Исходная концентрация, мкг/мл |
Конечная концентрация, мкг/мл |
|
1 |
Хлорогеновая кислота |
Метанол |
1300 |
130 |
|
2 |
Кофеин |
Метанол: HCOOH (95:5) |
2000 |
200 |
|
3 |
Рибофлавин |
96% этанол |
500 |
50 |
|
4 |
Кофеиновая кислота |
Метанол (нагревание при тем. 50°С) |
1100 |
110 |
|
5 |
Рутин |
96%этанол (нагревание при тем. 30°С) |
2000 |
200 |
|
6 |
Циннарозид |
Метанол (нагревание при тем. 30°С) |
1100 |
110 |
|
7 |
Скутелярин |
96% этанол (нагревание при тем. 50°С) |
600 |
60 |
|
8 |
Салициловая кислота |
Метанол |
2200 |
220 |
|
9 |
Лютеолин |
96%этанол (нагревание при тем. 30°С) |
1000 |
100 |
|
10 |
Кверцетин |
Метанол |
1200 |
120 |
|
11 |
Коричная кислота |
Метанол |
1000 |
100 |
Результаты и их обсуждения.Количественный состав биологически активных веществ в листьев артишока колючего установленный методом ВЭЖХприведены в таблице 2 и на рис. 1.
Таблица 2
Количественный состав основных биологически активных веществ в листьях артишока колючего установленный методом ВЭЖХ
|
№ |
Идентифицированные вещества |
Время удерживания, мин |
Площадь пика, |
Содержание веществ, мкг/мл |
|
1 |
Кофеин |
7,107 |
23,42 |
1,1985 |
|
2 |
Хлорогеновая кислота |
7,320 |
1139,97 |
88,1806 |
|
3 |
Рибофлавин |
8,430 |
41,61 |
5,2976 |
|
4 |
Кофейная кислота |
9,068 |
187,46 |
1,8748 |
|
5 |
Рутин |
9,983 |
48,13 |
1,4586 |
|
6 |
Цинарозид |
10,764 |
707,13 |
36,9495 |
|
7 |
Скутеларин |
11,791 |
10,45 |
0,7011 |
|
8 |
Салициловая кислота |
16,327 |
20,12 |
2,3540 |
|
9 |
Лютеолин |
16,526 |
4,47 |
0,2262 |
|
10 |
Кверцетин |
16,793 |
2,49 |
0,2066 |
|
11 |
Коричная кислота |
18,661 |
3,59 |
0,1048 |
Результаты количественного определения биологически активных веществ методом ВЭЖХ в листьях артишока колючего показало высокое содержание хлорогеновой кислоты, цинарозида, рибофлавина и кофейной кислоты.
Количественное содержание дубильных веществ в листьях артишока колючего (табл.3) определяли методом перманганатометрии согласно методике описанной ГФ [3].
Таблица 3
Результаты количественного определения дубильных веществ в листьях артишока
колючего методом перманганатометрии
|
№ |
Найдено дубильных веществ, % |
Метрологические характеристики |
|
1 |
5,05 |
Х=5,09 3=0,03162 3^=0,01414 AX=O,0879 A X=O,0393 8=1,72% 8=0,77% |
|
2 |
5,07 |
|
|
3 |
5,09 |
|
|
4 |
5,11 |
|
|
5 |
5,13 |
Количественное определение суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего проводили спектрофотометрическим методом. Методика количественного определения суммы оксикоричных кислот в листьях артишока колючего заключалась в следующем: точную навеску сырья измельчённого до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм помещали в колбу емкостью 200 мл и добавляли 60 мл 50 % этилового спирта. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа. После охлаждения содержимое колбы фильтровали через вату в колбу емкостью 100 мл. Экстракцию проводили еще дважды. Полученные экстракты количественно переносили в колбу емкостью 200 мл и доводили объем колбы до метки 50% этиловым спиртом (раствор А). 0,5 мл раствора А помещали в колбу емкостью 25 мл и доводили объем колбы до метки 50 % этиловым спиртом.
Оптическую плотность раствора измеряли на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 329±2 нм. Раствором сравнения служил 50%- ный этиловый спирт [4].
Параллельно в аналогичных условиях измеряли оптическую плотность раствора РСО хлорогеновой кислоты, приготовленного аналогично испытуемому раствору из навески массой около 0,00700 г (точная навеска).
69
Содержание суммы оксикоричных кислот в процентах в пересчете на кислоту хлорогеновую вычисляли по формуле:
Д 1 * 111 о * C1 * IOO
“ “ До - nil • (IOO-W)
Д1 - оптическая плотность спиртового извлечения из листьев артишока колючего;
Д0 - оптическая плотность РСО хлорогеновой кислоты;
m1- навеска стандартного образца, г;
m0 - навеска сырья, г;
C - чистота стандартного образца, %
W - потеря в массе при высушивании анализируемого образца листьев артишока колючего, %.
Таблица 4
Содержание оксикоричных соединений в пересчете на хлорогеновую кислоту в
листьях артишока колючего
|
№ |
Оптическая Плотность |
Найдено оксикоричных кислот, % |
Метрологические характеристики |
|
1 |
0,233 |
1,89 |
X= 1,86 3=0,0212 Sx=O,0095 AX=O,0544 AX= 0,0242 5 = 2,90% 5 = 1,30% |
|
2 |
0,228 |
1,85 |
|
|
3 |
0,230 |
1,86 |
|
|
4 |
0,232 |
1,88 |
|
|
5 |
0,227 |
1,84 |
Выводы. Таким образом, установлено количественное содержание основных групп биологически активных веществ в листьях артишока колючего ВЭЖХ, СФ и титриметрическим методами анализа. По результатам количественного определения основных действующих веществ методом ВЭЖХ в сырье показали высокое содержание хлорогеновой кислоты (57,1457 мкг/мл), цинарозида (34,4802 мкг/мл), рибофлавина (5,2883 мкг/мл), кофеина (42,3348 мкг/мл) и кофейной кислоты (1,7315 мкг/мл). Сумма оксикоричных кислот установленная СФ методом в пересчете на хлорогеновую кислоту составило в среднем 1,86%. Сумма дубильных веществ в пересчете на танин определенная перманганатометрическим методом в среднем составило 5,09%.
Литература:
- Энциклопедия лекарственных растений: пер. /с испан., под ред. ЖерараШенюэ.- Испания: РидерзДайджест, 2004.- 351 с.
- High Performance Liquid Chromatography in Phytochemical Analysis /еdited by M.W. Hajnos, J. Sherma. - New York: Marcel Dekker, 2011. - 975 р.
- Государственная фармакопея СССР. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11 изд. - М.: Медицина, 1990. - Вып. 2. - 398 с.
- Мусиенко Е.С., Кисличенко В.С. Количественное содержание основных групп БАВ в сырье бирючины обыкновенной //Фармацевтический журнал.-Ташкент, 2013.- №2.-С.21-25.