Актуальность. Флавоноиды - это многочисленный класс природных биологически активных веществ, обладающих широким спектром фармакологического действия: противовоспалительным, кровоостанавливающим, гепатопротекторным, противоязвенным, капилляроукрепляющим, желчегонным, антиоксидантным.
В современном мире постоянно увеличивается интерес к поиску новых источников лекарственных растительных средств. В традиционной медицине Китая и Тайланда широко применяется гиностемма пятилистная. Ареалом произрастания изучаемого растения является Дальний Восток (остров Кунашир). Из семян дикорастущего растения на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии БГМУ была выращена гиностемма пятилистная. Оказалось, что растение хорошо адаптируется к условиям Урала.
По литературным данным растение обладает рядом ценных фармакологических свойств: нормализует уровень холестерина в крови, улучшает мозговое кровообращение, оказывает противодиабетическое, адаптогенное и антиоксидантное действие, может использоваться для профилактики онкологических заболеваний и др.
Целью наших исследований явилось изучение антиоксидантного действия сырья гиностеммы пятилистной.
Материалы и методы исследования
В качестве объекта исследования служили листья гиностеммы пятилистной -Gynostemma pentaphyllum Thunb., интродуцированной в Уфимском районе Республики Башкортостан.
Качественное и количественное содержание аскорбиновой кислоты в сырье было определено ранее и составило 0,38%±0,01 [2].
Нами было изучено качественное и количественное определение флавоноидов. Качественный анализ проводили в спиртовом извлечении (1:10) характерными для флавоноидов химическими реакциями и с использованием тонкослойной хроматографии. Количественное определение суммы флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом в пересчете на рутин [1].
Второй этап заключался в исследовании антиоксидантной активности водного и спиртовых извлечений различных концентраций in vitro хемилюминесцентным методом [3]. Настой и настойки из листьев гиностеммы пятилистной готовили по известным фармакопейным методикам]. В качестве препарата сравнения использовали плоды шиповника как источника известного антиоксиданта - аскорбиновой кислоты.
Извлечения (от 0,01 до 1 мл) вносили в модельные системы, в которых генерировалось образование активных форм кислорода и протекали реакции перекисного окисления липидов, являющиеся наиболее распространенными процессами свободно-радикального окисления.
Результаты исследования
При выполнении качественных реакции (цианидиновая проба, с раствором алюминия хлорида и др.) получены характерные результаты в исследуемом образце, подтверждающее присутствие флавоноидов.
По результатам проведения тонкослойной хроматографии наилучшее разделение 95% спиртового извлечения произошло в системе этилацетат: уксусная кислота:вода (12:1:1). Выявлено два видимых пятна и два, невидимых невооруженным глазом. Видимые пятна имеют светло-желтую и желтую окраску, а невидимые - в ультрафиолетовом свете имеют голубую, светло-коричневую флюоресценцию. После обработки 5% спиртовым раствором алюминия хлорида произошло окрашивание трех пятен, что свидетельствует о принадлежности пятен к флавоноидной природе. У полученных пятен рассчитывали значения Rf. Второе пятно со значением Rf=0,30±0,01 идентифицировано относительно свидетеля как рутин (0,33±0,02), а пятно четвертое со значением Rf=0,94±0,05 идентифицировано относительно свидетеля как кверцетин (0,94±0,05).
В ходе определения количественного содержания суммы флавоноидов спектрофотометрическим методом использовали реакцию комплексообразования с 5% спиртовым раствором алюминия хлорида. Данная реакция является специфичной и дает стабильные результаты. Оптическую плотность испытуемого раствора и раствора сравнения рутина измеряли на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин составило 1,3±0,06%.
Анализируя на антиоксидантную активность хемилюминесцентным методом исследуемые образцы, выявлено снижение образования активных форм кислорода (светосумма свечения) в извлечениях от 20,7 до 86,6% в дозах от 0,01 до 1 мл, а в плодах шиповника в тех же дозах - от 57 до 101,6%. Водное и спиртовые извлечения также влияли и на скорость перекисного окисления липидов, снижая ее в среднем от 21,4 до 95,9% (плоды шиповника - от 62,7 до 97,5%) в зависимости от дозы. При исследовании антиоксидантной активности выявили зависимость снижения хемилюминесценции в модельных системах от количества добавленных исследуемых извлечении из листьев гиностеммы пятилистной и препарата сравнения.
На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:
- В результате проведения качественных реакций в листьях гиностеммы пятилистной, выращенной на территорий Республики Башкортостан, подтверждено присутствие флавоноидов. Методом тонкослойной хроматографии идентифицированы вещества: рутин и кверцетин. Количественное содержание суммы флавоноидов спектрофотометрическим методом в пересчете на рутин составило 1,3±0,06%.
- Исследуемые образцы, полученные из листьев гиностеммы пятилистной, проявляют антиоксидантные свойства при концентрации 0,01 мл, но не превосходят по действию препарат сравнения. Наиболее выраженной антиоксидантной активностью обладают настойки на 70% этиловом спирте.
- При проведении анализа влияния извлечений на активные формы кислорода и скорость перекисного окисления липидов показано, что антиоксидантная активность имеет линейный дозозависимый эффект.
Список литературы
- Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издания, том 1 - 3 [Электронный ресурс] - М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2015. - С. 1004. - Режим доступа: http://www.femb.ru/feml
- Низамова А.А., Галиахметова Э.Х., Кудашкина Н.В. Определение аскорбиновой кислоты спектрофотометрическим методом в листьях гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (thunb.)) / Сборник научных трудов научно-методический конференции «III Гаммермансикие чтения» - Санкт-Петербург: Изд-во СПХФА, 2017. - С. 99-100.
- Фахрутдинов Р.Р., Тевдорадзе С.И. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминометре ХЛ-003 / Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения: сборник докладов под ред. проф. Бурлаковой Е.Б. - М.: Изд-во РУДН, 2005. - С. 147-154.