Исследование стабильности образцов противомаститного препарата «Аргоцид»

Аннотация

Исследование стабильности ветеринарного препарата необходимо осуществлять на этапе разработки лекарственного средства. Нами проведены исследования с целью получения данных об изменении показателей качества противомаститного средства с цитратом серебра «Аргоцид», с течением времени под влиянием различных факторов. Для лекарственных форм в стеклянной первичной упаковке, к которым относится разрабатываемый препарат, этими факторами являются температура и свет. Полученные данные позволяют обосновать рекомендуемые условия и срок хранения для ветеринарного препарата в течении 1 года и 3-х месяцев в защищенном от света месте. Результаты исследования могут быть использованы при разработке методик контроля качества на препарат для интрамаммарного введения для предотвращения субклинического мастита у крупного рогатого скота.

Ключевые слова: раствор для интрамаммарного применения, цитрат серебра, стабильность

Воспаление молочной железы у крупного рогатого скота (мастит) считается одной из главных проблем ветеринарной медицины и молочного скотоводства. Маститное молоко приводит к заболеваниям и гибели телят, а также токсикоинфекциям у людей [2].

Другая проблема, связанная с маститом - наличие ингибирующих веществ в молоке во время и после лечения больных животных. Основная доля этих веществ это - антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и гормоны, которые содержатся в комплексных противомаститных препаратах и широко применяются в ветеринарной практике [7,8,10].

К настоящему времени основными средствами для лечения больных маститом животных в Украине являются препараты на основе антибиотиков, как в виде инъекционных, так и в виде интрамаммарных лекарственных форм. Сейчас на украинском рынке ветеринарныъх препаратов представлены средства для терапии мастита, как отечественного производства: Бровамаст-1Д, Бровамаст-2Д, Бровамаст-С, Декамаст (Бровафарма, Киев), Демаст, Мастисан-А, Мастисан-А-форте, Мастисан-Б (Харьковская государственная биологическая фабрика), так и импортного: Нафпензал MC, Мастижет FORT, Нафпензал DC, Мастиет форте, CEFA SAFE (Intervet) Синулокс LC, Ампиклокс LC, Орбенин EDC (Pfizer) Ланколак, Ланкодрай (Elanko animal) Клоксерат Plus LC, Клоксерат Plus DC (Fort dodge animal) Мастилекс (Invesa) Мастипен L, Мастипен Z, Мастицеф (Biowet Drwalew) Линкомицин F (LEK) Кодилак, Кодимицин (Kodifar HB) Мультиджект.

Ввиду сложившейся экономической ситуации в Украине применяются в основном генерические препараты для лечения и профилактики мастита в периодах запуска и сухостоя, поэтому разработка отечественного противомаститного комбинированного препарата антимикробного действия является актуальной задачей фармацевтической технологии.

Цель исследования состоит в изучении стабильности опытных образцов раствора для интрацистернального введения под условным названием «Аргоцид» для установления срока и условий хранения ветеринарного лекарственного препарата с цитратом серебра.

Материалы и методы.

В качестве объекта исследования были наработаны 3 серии препарата в стеклянных ампулах оранжевого стекла объемом 10 мл в асептических условиях научно-исследовательской лабораториии парентеральных и оральных жидких лекарственных средств при Национальном фармацевтическом университете (г. Харьков, Украина). Образцы каждой серии были поделены на две части и заложены на хранение в условиях, которые правилами GMP принимают для «общего случая». Это температура 25±2^оС для долгосрочных испытаний и температура 40±2 ^оС для ускоренных [5].

Количественное содержание ионов серебра в препарате определяли тиоцианометрично. Количественное определение декспантенола проводили методом жидкостной хроматографии. Определение прозрачности и степени препарата «Аргоцид» проводили согласно методике Государственной Фармакопеи Украины (ГФУ) п.2.2.1., стр.47. Раствор должен бать прозрачным по сравнению с водой для инъекций.

Определение степени окраски жидкостей в ряду коричневый - желтый - красный проводили визуально путем сравнения с соответствующими эталонами одним из двух методов, указанном в ГФУ п.2.2.2., стр. 49.

Тест по показателю «pH» выполняли на рН-метре METTLER TOLEDO S20 KS. Испытания проводили в соответствии с ГФУ 2.2.3., стр. 51 [3].

Объем содержания контейнера с номинальным объемом 10 мл определяли следующим образом: отбирали шесть контейнеров, пять для проведения испытания и один для ополаскивания. Набирали в шприц небольшой объем испытуемого лекарственного средства из контейнера, предназначенного для ополаскивания, и выливали жидкость с шприца, удерживая его вертикально иглой вверх для извлечения воздуха. Извлекали максимально возможный объем содержимого одного из пяти контейнеров, удаляли пузырьки и переносили этот объем в сухой мерный цилиндр такой емкости, чтобы измеряемый объем заполнил не менее 40% номинального объема цилиндра. Препарат выдерживает испытание на объем, если объем, измеренный в каждом из пяти контейнеров, не менее номинального.

Результаты и обсуждение

При разработке современных отечественных лекарственных средств для ветеринарии необходимо учитывать тенденции, сложившиеся на украинском рынке ветеринарных препаратов. А именно, необходимость перехода разработки и производства ветеринарных препаратов на соблюдение норм Европейского Союза (Good Manufacturing Practice (GMP) - Надлежащая производственная практика (НПП)), которые обеспечат их высокое качество и конкурентноспособность.

В настоящее время инициировано проведение гармонизации отечественной нормативной базы с законодательством ЕС. Поэтому при проведении данной разработки лекарственного препарата для ветеринарии мы руководствовались правилами GMP, принятыми в ЕС, а также Настановой СТ-Н МОЗУ 42-4.0:2016, принятой в Украине для фармацевтической отрасли [4,6].

Правила GMP для новых лекарственных средств предполагают контроль их стабильности и установление даты истечения срока годности, которая должна основываться на результатах оценки данных, полученных при изучении стабильности. Правила GMP требуют осуществления мероприятий, гарантирующих, что качество лекарственных средств поддерживается в течение всего срока годности при их хранении, распространении и последующем обращении, а также испытаний продукции в процессе хранения.

Исследование стабильности необходимо осуществлять уже на этапе разработки лекарственного средства. Такие исследования проводят с целью получения данных об изменении качества действующих веществ или лекарственного препарата с течением времени под влиянием различных факторов окружающей среды. Для лекарственных форм в стеклянной первичной упаковке, к которым относится разрабатываемый ветеринарный препарат «Аргоцид», этими факторами являются температура и свет. Полученные данные позволяют обосновать рекомендуемые условия хранения и срок хранения для лекарственного средства [5,9].

В результате проведенных ранее исследований, был разработан качественный состав и оптимальное соотношение компонентов антимикробного интрамаммарного препарата, состоящего из трех активных фармацевтических ингредиентов (цитрат серебра, декспантенол и аргинин) и одного вспомогательного вещества (повидон).

Были получены образцы препарата, представляющие собой прозрачные растворы светло-желтого цвета с приемлемым уровнем рН (6,52 - 6,70), с количественным содержанием действующих веществ, соответствующим регламентированным для них пределам.

Периодически проводили контроль серий по показателям, которые могут быть подвержены изменениям при хранении и могут повлиять на качество, безопасность и/или эффективность лекарственного средства. Это показатели физической, химической и микробиологической стабильности (таблица 1,2). При этом ускоренные испытания посредством влияния особенно неблагоприятных условий хранения могут выявить нестабильность действующего вещества либо лекарственного средства за счет увеличения скорости возможного химического разложения или физического изменения.

Данные таких испытаний как дополнение к результатам долгосрочных исследований стабильности позволят оценить более отдаленные химические эффекты, которые могут быть отсрочены при условияхнеускоренных испытаний, а также оценить влияние кратковременных отклонений от испытуемых условий хранения. Но следует учитывать, что результаты, полученные при ускоренных испытаниях, не всегда позволяют прогнозировать изменения, которые возникают или не возникают при долгосрочных испытаниях. Результаты контроля серий в процессе хранения в указанных условиях представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 - Результаты изучения стабильности препарата «Аргоцид» в процессе хранения при температуре (25 ±2) ⁰С в ампулах из оранжевого стекла в течение 1 года и 3-х месяцев

Примечание: Р±95%, n=5.

Из данных таблицы видно, что в условиях долгосрочного хранения в образцах наблюдалась неизменность их физико-химических свойств в течение 15 месяцев, но по нашим наблюдениям, к 17 месяцу в ампулах обнаруживалась взвесь и раствор приобретал сероватый оттенок. В условиях ускоренных испытаний (результаты в таблице 2) аналогичные изменения наблюдались уже после 15,5 месяцев хранения, а к 16-му месяцу в ампулах выпал осадок черного цвета.

Получение стабилизированного серебра, решается способом, включающим взаимодействие ионов серебра со стабилизирующим агентом в водном растворе при комнатной температуре. Под действием света видимого диапазона, в качестве стабилизирующего агента используют додецилсульфат натрия или полимерный продукт, выбранный из группы: поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, крахмал, а в качестве источника света видимого диапазона используют источник искусственного освещения. Процесс осуществляют на воздухе при массовом избытке стабилизатора-восстановителя без дополнительного нагрева при интенсивном перемешивании и без введения в систему специальных восстанавливающих агентов. При этом реакционная система может включать, наряду с полимерными стабилизирующими агентами: повидоном, поливиниловым спиртом, поверхностно-активные вещества.

Для стабилизации комбинированного раствора на основе цитрата серебра использовали высокомолекулярное соединение повидон К 16-18, с молекулярной массой 8 000, порошок светло-жёлтого цвета, хорошо растворимый в теплой и холодной воде.

Количественное содержание действующих веществ: цитрата серебра, аргинина и декспантенола соответствовало критериям приемлемости. Следует отметить, что количественное содержание ионов серебра при обоих температурных режимах выявило «значительное изменение» после 15,5 месяцев хранения, что является следствием деструкции цитрата серебра в исследуемых образцах.

По показателям: прозрачность, цветность, механические включения, стерильность, объем содержания контейнера и герметичность, препарат «Аргоцид» отвечает требованиям нормативной документации, как при долгосрочных испытанях ( температура хранения 25±2^оС ), так и при ускоренных (температура 40±2 ^оС).

Выводы.

1. В процессе научной работы были использованы современные физико-химические и технологические методы исследования.
2. Исследовали количественное содержание активных фармацевтических ингредиентов - цитрата серебра, аргинина и декспантенола, входящих в состав ветеринарного препарата «Аргоцид». Полученные данные свидетельствуют о стабильности препарата в течение всего срока хранения.
3. В результате исследования образцов установлено, что по органолептическим и физикохимическим свойствам препарат соответствует показателям, указанным в ГФУ как сразу после изготовления, так и после всего срока хранения в ампулах оранжевого стекла.

Таблица 2 - Результаты изучения стабильности препарата «Аргоцид» в процессе хранения при температуре (40 ±2) ⁰С в ампулах из оранжевого стекла в течение 1года и 3-х месяцев

Примечание: Р±95%, n=5.

4. Результаты исследования могут быть использованы при разработке методик контроля качества на препарат «Аргоцид» для интрамаммарного введения для предотвращения субклинического мастита у крупного рогатого скота.

5. Полученные данные позволяют обосновать рекомендуемые условия хранения и срок хранения для ветеринарного препарата в течении 1 года и 3-х месяцев в защищенном от света месте.

Конфликт интересов. Авторы данной статьи подтверждают отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.

Источники финансирования. Исследование выполнено в рамках научно-исследовательской работы кафедры управления и экономики фармации с технологией лекарств Тернопольского государственного медицинского университета им. И.Я. Горбачевского, на тему: «Маркетинговые, фармакоэкономические и технологические исследования по созданию лекарственных средств» (№ государственной регистрации 0115U001530).

Литература

1. Commission Directive 91/412/EEC of 23 July 1991 laying down the principles and guidelines of good manufacturing practice for veterinary medicinal products // Official Journal L 228, 17/8/1991 p. 70 - 73.
2. Борисевич В.Б. Лікування корів, хворих на мастит, наноаквахелатами колоідів металів / Борисевич В.Б., Борисевич Б.В., Каплуненко В.Г., Косінов М.В., Ткаченко С.М., Дорощук В.О., Солонін П.К., Литвиненко Д.Ю. // Ветеринарна медицина Украіни. - 2009. - №7. - С. 20-22.
3. Державна Фармакопея Украіни: в 3 т. / Державне підприемство «Украінський науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». - 2-е вид. - Харків: Державне підприемство «Укранський науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів», 2015 - Т. 1. - 1128 с.
4. Методичні рекомендаціі щодо основних правил належноі практики виробництва та контролю якості ветеринарних препаратів. - Електронний ресурс. - Режим доступу: http://www.vet.gov.ua/node/1819.
5. Настанова 42-3.3:2004. Настанови з якості: Лікарські засоби. Випробування стабільності / Георгіевський В., Ляпунов М., , Безугла О. [та ін.] - Киів : МОЗ Украіни, 2004. - 60 с.
6. Настанова. Лікарські засоби. Належна виробнича практика. СТ-Н МОЗУ 42-4.0:2016 / М. Ляпунов, О.Безугла [та ін.] - Киів: МОЗ Украіни, 2016. - 335 с.
7. Решетка М.Б. Профилактика и лечение мастита без применения химиотерапевтических средств: автореф. дис. канд. ветеринар. наук / М.Б.Решетка. Краснодар, 2013.- 24 с.
8. Слободяник В.И. Эффективность комплексной терапии больных маститом лактирующих коров / В.И. Слободяник, Е.В. Зверев // Сб. науч. тр. СПб, 2003. - С.109-110.
9. Шевченко В.О., Рибачук Д.В. Вивчення стабільності комбінованого лікарського засобу для парентерального застосування протимікробноі діі // Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичноі галузі Украни: Матеріали VI Нац. з’ізду фармац. Украіни. - Харків, 2005. - С. 313314.
10. Эффективные отечественные препараты для профилактики и терапии мастита у коров / В.А. Париков, Н.Т. Климов, Н.В. Притыкин, Д.М. Пониткин // Матер. Международной научно-практ. конф., посвящ. 35-летию организации ВНИВИПФиТ «Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных», Воронеж, 2005. - С. 375-378.