Резюме

Впервые в листьях бузины черной, культивируемой в Узбекистане было определено содержание остаточного количества пестицидов. Определение хлорорганических пестицидов (ХОП) проводили методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ). В результате проведенного исследования были установлены экологическая чистота и безопасность исследуемого сырья листья бузины черной. Указанные в таблице хлорорганические пестициды в испытуемом сырье не обнаружены.

Ключевые слова: бузина черная, газо-жидкостная хроматография, экологическая чистота, безопасность, пестициды.

Введение. Бузина черная (Sambucus nigra) - это ветвистый кустарник семейства жимолостных (Caprifoliaceae). Посаженная на просторе, бузина черная образует куст округлой формы, густо облиственный и покрытый крупными (до 20 см в диаметре) белыми, душистыми щитковидными соцветиями до самого основания. Бузина относится к лекарственным растениям официально используемым в медицинской практике. Всего в мире насчитывается около 40 видов, которые сильно различаются не только по внешним признакам, но и по химическому составу. В республиках Центральной Азии бузина черная культивируется как декоративное растение [1]. Листья бузины черной —супротивные, крупные, длиной 25—30 см, непарноперистые, состоят из трех—семи продолговато яйцевидных длиннозаостренных листочков на очень коротких черешках. Листочки в числе (3) - 5 - 7 - (9), длиной до 12 см, с широко клиновидным основанием, по краям неравно пильчатые, с верхней стороны темно-зеленые, снизу более светлые [2].В свежих листьях бузины содержится большое количество аскорбиновой кислоты - витамин С, каротин. В листьях найдены также самбунигрин, тритерпеноиды, стероиды и высшие алифатические углеводороды [3].В народной медицине молодые листья бузины черной, отваренные в молоке, применяют наружно как противовоспалительное средство при ожогах, фурункулах, опрелостях и воспалении геморроидальных узлов. Мы проводили фармакогностичес- кое и фармакологическое исследование бузины черной культивируемой в Узбекистане.

Цель исследования. Определения содержания остаточных пестицидов в сырье бузины черной. Как известно, на химический состав растений оказывают влияние ряд факторов окружающей среды, как температура и влажность воздуха, минеральный состав почвы, вредители растений и их болезни. Поэтому рекомендуется обращать должное внимание на состояние почвы, ее загрязненность остаточными количествами пестицидов и их количество перешедшее в лекарственное растение. При обработке пестицидами для защиты лекарственных растений нужно помнить о том, что они могут быть причиной загрязнения лекарственного растительного сырья и накапливаются в лекарственных растениях в больших количествах. Поэтому необходимо контролировать содержание пестицидов в лекарственных растениях и в сырье, заготовленном из этих растений.

В связи с этим контроль за содержанием остаточных количеств пестицидов должен проводится в обязательном порядке, который не допускает применения в медицинских целях лекарственное растительное сырье с содержанием тяжелых металлов и пестицидов превышающих допустимый предел. Это позволит значительно повысить качество сырья и обезопасить его, внесет вклад в обеспечении населения республики качественным и безопасным лекарственным растительным сырьем.

Загрязнение окружающей среды привело к изменению экологических условий во многих районах заготовок дикорастущего лекарственного растительного сырья. Это привело к необходимости проведения на современном уровне оценки качества сырья лекарственных растений с учетом не только фармакопейных показателей, но и требований экологической чистоты.

Материалы и методы. Объектом исследования служили листья бузины черной, заготовленные весной и собранные на территории ботанического сада института генофонда растительного и животного мира АН РУз. Анализу подвергались средние пробы сырья, отобранные в соответствии с указаниями статьи ГФ ХІ «Правила приемки лекарственного растительного сырья и метода отбора проб для анализа» [4].

Определение остаточных количеств хлорорганических пестицидов проводили методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ) [5].

Подготовка проб. Методом квартования выделяли часть средней пробы измельченного сырья, масса которой после высушивания должна быть не менее 150 г. Пробу высушивали в сушильном шкафу при температуре 65°С до воздушно сухого состояния.

После высушивания воздушно сухую пробу размалывали на лабораторной мешалке и просеивали через сито после ручного измельчения ножницами, добавляли к просеянной части и тщательно перемешивали. Приготовленные для испытания пробы хранили в стеклянной банке с плотно закрывающейся пробкой в сухом месте.

Определение хлорорганических пестицидов (ХОП) проводили методом газо-жидкостной хроматографии (ГЖХ) [6]

Метод основан на извлечении остаточных количеств пестицидов органическим растворителем, с последующим определением на хроматографе (Модель - 3700) с детектором электронного захвата (ДЭЗ), колонка 1,0 м х 3, заполненная хроматоном N-AW-DMCS размером 0,120-0,20 mm с массовой долей 5 % неподвижной фазы OV-17. Температура термостата колонки 210⁰С, температура испарителя 240⁰С, температура детектора 270⁰С. Расход газа носителя 40 мл/мин.

5 г высушенного и измельченного сырье помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, приливали 15 мл смеси ацетона с водой (1:1) и оставляли закрытую колбу на 18 ч. Затем к увлажненной пробе приливали 20 мл извлечения гексана. Содержимое колбы энергично перемешивали на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Экстракт осторожно декантировали в стакан, оставляя сырье в колбе. После в колбу вновь прилили 20 мл гексана и экстракцию повторяли в течение 30 мин.Полученный второй экстракт также осторожно декантировали в стакан. Экстракты объединяли, фильтровали небольшими порциями через воронку, заполненную натрия сульфатом безводным и оксидом алюминия, в круглодонную колбу ротационного вакуумного испарителя вместимостью 50 мл. Порциями отгоняли растворитель до объема ~ 1 мл. Остаток переносили в пробирку вместимостью 10 мл, колбу омывали 1 мл гексана, который также переносили в пробирку. Содержимое пробирки испаряли на воздухе при комнатной температуре до 2 мл. В хроматограф вводили 8 мл полученного раствора.

Результаты и обсуждение. При экстракции хлорорганических пестицидов из растений извлекается много сопутствующих химических веществ, которые детектируются электроннозахватным детектором и мешают хроматографическому разделению. Устранение их влияния осуществляли очисткой экстрактов серной кислотой.

Алфа-изомер гескахлорциклогексан (а-ГХЦГ), гамма-изомер гексахлорциклогексан (ү- ГХЦГ), 4,4'-дихлордифенилдихлорэтилен (ДДЭ), 4,4'-дихлордифенилдихлорэтан (ДДД), 4,4'- дихлордифенилтрихлорэтан (ДДТ) и альдрин идентифицировали среди других компонентов (появляющихся на хроматограмме в виде пиков) по времени удерживания. В качестве параметра при расчетах использовали высоту пика.

Содержание каждого ингредиента в анализируемой пробе определяли методом соотношения с аналогичным компонентом градуировочного раствора смеси ХОП. Из подготовленных экстрактов отбирали микрошприцем по 8 pL и последовательно вводили в испаритель хроматографа. Затем вводили такое же количество (8 pL) раствора смеси (ХОП). После идентификации а-ГХЦГ, ү-ГХЦГ, n, n' -ДДЭ, n, n' -ДДД, n, n' -ДДТ (альдрина) ина хроматограммах анализируемых проб измеряли высоты соответствующих пиков. Одновременно измеряли высоты пиков этих компонентов, полученных для раствора сравнения.

Массовую долю а-ГХЦГ, ү-ГХЦГ, n, n'-ДДЭ, n, n'-ДДД, n, n'-ДДТ, альдрина в пробе растений (ppm mg/kg) рассчитывали по формуле:

где с - концентрация пестицида вградуировочном растворе смеси, мг/мл; һст - высота пика пестицида на хроматограмме градуировочного раствора смеси, мм; hx - высота пика пестицида на хроматограмме анализируемой пробы, mm; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографического анализа, мл; R - кратность разбавления экстракта для пестицида; m - навеска пробы, г.

Результаты остаточное содержание пестицидов приведен в таблице 1.

Таблица 1- Остаточное содержание пестицидов в листьях бузины черной

Примечание: * предельное содержание пестицидов в соответствии с требованиями Европейской фармакопеи 6 изд., 2008 и директивами Европейского сообщества 76/895 и 90/642 [7].

Полученные данные свидетельствуют о том, что остаточное количество пестицидов в листьях бузины черной не обнаружено.

Выводы:

В листьях бузины черной, культивируемой в Узбекистане, впервые определено содержание остаточного количества пестицидов. В результате проведенного исследования показано, что исследуемое сырье экологически чистое и безопасное. Степень содержания остаточных количеств пестицидов, установленной для сырья изучаемого растения, может быть использован в качестве ориентировочного критерия чистоты сырья в последующих экологических исследованиях.

Литература

1. .Х.Х. Халматов, И.А. Харламов, З.И. Мавланкулова //Лекарственная растения центральной Азии. Ташкент,- Абу Али ибн Сино, 1998. С.47-48.
2. .Флора Узбекистана Т., 5. Ташкент, 1961. С. 560.
3. .В.Л. Комарова //Растительные ресурсы. Ленинград,- Наука, 1990. С.13.
4. .Государственная фармакопея: Вып.1.-11-еизд.,доп.-М.: Медицине, 1987. -С.267.
5. .ГОСТ 31481 - 2012, Межгосударственный стандарт. Метод определение остаточных количеств хлорорганических пестицидов.
6. .М.А. Клисенко //Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Т., 1, 2. -М.,1992.
7. .European Pharmacopeia, 6^th edition. -Council of Europe Strasburg. 2008.