Обоснование подходов к повышению эффективности этиотропной терапии бруцеллёза

С использованием E-теста мы провели изучение активности invitro в отношении клинических изолятовбруцелл традиционно применяемых для лечения бруцеллёза в Казахстане антибиотиков (доксициклин, рифампицин, гентамицин) и сульфаниламидов (ТМП/СМ), а также фторхинолона, введённого в схему этиотропной терапии данной инфекции в последнее время — ципрофлоксацина.

В целом все изучавшиеся штаммы бруцелл оказались чувствительными к исследуемым антибактериальным препаратам. В соответствии с МИК90 наиболее эффективным invitro в отношении бруцелл препаратом оказался доксициклин (0,07 мг/мл). Второе место по эффективности занял ципрофлоксацин (0,098 мг/мл). Несмотря на то, что рифампициніпуПго оказался эффективен в отношении клинических изолятовбруцелл, настораживают его относительно высокие МИК, необходимые для подавления бактериального роста.Доксициклин как по МИК50, так и МИК90 оказался наиболее эффективен в отношении клиническихизолятовбруцелліиуійо. В нашем исследовании рифампицин, хотя и оказался эффективен в отношении клинических изолятовбруцелл, потребовал относительно более высоких концентраций по сравнению с другими препаратами. Гентамицин показал относительно низкую эффективность в отношении бруцелл. В этой связи и в связи с его известной ототоксичностью следует пересмотреть практику частого включения данного антибиотика в схему лечения бруцеллёза у детей. ТМП/СМ показал достаточно высокую эффективность в отношении бруцелл. Его низкая стоимость и простота применения (перорально) делает его перспективным для лечения неосложнённых форм бруцеллёза. Наше исследование, проведённое в отношении ципрофлоксацина, показало, что этот фторхинолон более эффективен в отношении бруцелл, нежели другие препараты, хотя и уступает доксициклину. В этой связи случаи клинической неэффективности ципрофлоксацина (invitro) нуждаются в дополнительном изучении.

Кроме того, нами было проведено изучение внутриклеточной активности ряда антибактериальных препаратов в отношении Brucellamelitensis 1251 на модели инфицированных моноцитов человека Mono MAC 6.

Инфицированная культура клеток была пролечена 8, 4, 1 и 0,25 х минимальными подавляющими концентрациями (МИК) каждого из следующих препаратов: рифампицин, ципрофлоксацин, тетрациклин, доксициклин, гентамицин и стрептомицин. Инкубация осуществлялась в течение 2 часов, после чего клеточный пул собирался посредством центрифугирования при 200 х g в течение 6 минут. Среда, содержащая антибактериальный препарат, удалялась посредством отсасывния. Клетки дважды отмывались фосфатным буфером для удаления остатка антибактериального препарата. После этого к клеткам добавляли 0,1% Triton X100 (Sigma-Aldrich) для провокации их лизиса и высвобождения внутриклеточного возбудителя. Об уровне эрадикациивнутриклеточныхбруцелл судили по числу КОЕ после посева клеточного лизата на твёрдую питательную среду.

Внутриклеточнойэрадикациибруцелл удалось достичь лишь при использовании 8 МИК гентамицина и стрептомицина, поскольку эти антибиотики практически не проникали внутрь клеток. Рифампицин и тетрациклины успешно снижали число внутриклеточных бактерий уже при 0,25 МИК, а ципрофлоксацин - при 1 МИК.

Таким образом, стрептомицин и гентамицин, входящие в рекомендуемые ВОЗ схемы этиотропного лечения бруцеллёза, не позволяют достичь эффективной эрадикации внутриклеточного возбудителя. Наибольшую эффективность в отношении внтутриклеточныхбруцелл показали тетрациклины и рифампицин.

Было также проведено изучение чувствительности invitro к антибактериальным препаратам Brucellamelitensis при различных значениях pH с использованием 126 штаммов Brucellamelitensis, взятых ранее для изучения чувствительности к антибактериальным препаратам в E-тесте при различных значениях pH среды: кислой (5,0) и нейтральной (7,0). Исследование МИК в E-тесте проводилось в парах сред, кислотность которых доводилась до значений pH 5,0 и 7,0.

Все взятые в работу антибактериальные препараты показали достаточную ктивность в отношении большинства клинических изолятовбруцелл при pH 7,0 с МИК, при которой 90% штаммов подавлялись (МИК90) согласно пороговым значениям ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute (CLSI) США.

Полученные значения МИК для индивидуальных противобруцеллёзных препаратов приведены на слайде.

Только доксициклин и рифампицин сохраняли активность в отношении бруцелл в кислой среде. Фторхинолоны (ципрофлоксацин и офлоксацин) были достаточно эффективны при pH 7,0, но в условиях кислой среды снижали активность в 4 раза. Гентамицин также терял активность в отношении бруцелл при pH 5,0.

Таким образом, полученные результаты не позволяют отказаться от традиционно используемой комбинации доксициклин плюс рифампицин в лечении бруцеллёза.

Год: 2013
Город: Шымкент
Категория: Медицина