Энзимы клеток крови новорожденных

В данной статье представлены результаты по выявлению состояние энзимовклеток крови новорожденных от матерей с железодефицитной анемией. Изучить их информативность в определении характера компенсаторных реакций и адаптивных процессовноворожденных.Состояние защитных систем клеток крови определяет срыв адаптационных процессов с реализацией неотложных синдромов и заболеваний в неонатальном периоде. Цитохимические исследования нейтрофилов и лимфоцитов периферической крови могут быть использованы как в качестве массового скринингового обследования с целью выявления состояния защитных функций организма новорожденных от матерей с дефицитом железа, так и в случаях персонифицированного ведения пациентов с сопутствующей патологией.

Железодефицитные состояния у беременных и детей раннего возраста остаются одной из актуальных проблем в акушерстве и педиатрии[4]. Железодефицитная анемия (ЖДА) встречается как в развивающихся, так и в развитых странах, в среднем у 80%, скрытый дефицит железа еще чаще у 99%. Изолированный тканевый дефицит железа без анемии у беременных встречается в 48-100% наблюдений [3,4]. Дефицит железа в скрытой либо явной форме приводит к изменению метаболизма клеточных структур, развитию хронической гипоксии плода,дисбалансу в иммунной системе во время беременности их детей[2,5]. Универсальные механизмы клеточной компенсации и адаптации представлены в лимфоцитах, нейтрофилах, эритроцитах, тромбоцитах, так как клетки крови имеют единого родоначальника стволовую клетку. Это облегчает сложный, многокомпонентный ответ клеток крови на стресс, функционирование их в качестве системообразующего фактора, направленного на поддержание резистентности организма, формирование механизмов здоровья [3]. Важную роль в поддержаниигомеостаза организма отводят эритрону и его периферической эритроциту. разрушении структурной единице Высвобождающиеся, при мембран состарившихся эритроцитов, промежуточные продукты распада фосфолипидов оказывают трофическое влияние на лимфоциты, включаясь в их энергообмен и повышая в них синтез макроэргических соединений. Роль лимфоцитов в регуляции гемопоэза заключается в способности изменять миграцию, дифференцировку и пролиферацию кроветворных клеток [4]. Нарушение эритропоэза в условиях дефицита железа в значительной степени зависит от состояния лимфоидных клеток, что подтверждает лимфоцитозависимый характер нарушений регуляции кроветворения при ЖДА[3,5].

Нейтрофилы синтезируются и проходят первичную дифференцировку в костном мозге. Родоначальником служит стволовая клетка коммитированная в направлении лимфопоэза, дифференцируя до Ти В -лимфоцитов и миелопоэза, давая потомство нейтрофилам [6,14]. В регуляции и индукции этих процессов участвует спектр медиаторных молекул, продукты фагоцитов. Действуя по принципу обратной связи, они сопрягают периферийные отсеки с центрами кроветворения, вовлекая их в решение конкретных эффекторных задач [6]. Информированность клетки, аллолойз, позволяет осуществлять прогноз, опирающийся на изменения ультраструктур клетки и клеточных популяций до проявления железодефицитных состояний, достигать терапевтического эффекта, воздействуя на низший (регуляция метаболизма на уровне клетки) и высший (организм) уровень организации [7,8]. В этом плане цитохимические исследования клеток крови дают высокую информативность, тонко отражают состояние метаболизма,энергообеспеченности их роль в защитных реакциях. Следовательно, цитохимический анализ клеток крови может способствовать выявлению ранних доклинических признаков защитно- компенсаторныхреакций и адаптивных процессов у новорожденных [7]. 

В таком направлении процессы адаптации новорожденных изучались недостаточно, а полученные данные противоречивы.

Цель исследования выявить состояние защитных функций клеток крови у новорожденных от матерей с анемией. Изучить информативность цитохимических показателей для диагностики и прогноза нарушений адаптации новорожденных от матерей с железодефицитной анемией.

Материалы и методы.

Проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 150 рожениц и их новорожденных детей.У 130 обследованных,беременность протекала на фоне дефицита железа различной степени выраженности (основная группа) и у 20 без дефицита железа (контрольная группа). Из обследования исключены женщины с изоиммунизацией по АВО системе и резус фактору, инфекционной патологией, многоплодной беременностью. Согласно рекомендациям ВОЗ (1992 г.) выделена анемия легкой степени при уровне гемоглобина (Нв) в периферической крови матери от 119г/л до 110 г/л, средней тяжести от 110г/л до 90 г/л и тяжелая анемия от 90 г/л до 70 г/л. С учетом уровня гемоглобина (Нв), концентрации сывороточного железа (СЖ), общей и латентной железосвязывающей способности сывороткикрови (ОЖСС, ЛЖСС), коэффициента насыщения трансферрина железом (КНТЖ) были выделены группы: роженицы с нормальными показателями обмена железа и их новорожденные дети (контрольная группа 20 человек); роженицы с латентным дефицитом железа и их новорожденные дети (1 группа 15 человек); роженицы с железодефицитной анемией легкой степени и их новорожденные дети (2 группа 73 человек); роженицы с железодефицитной анемией средне-тяжелой и тяжелой степени и их новорожденные дети (3 группа-46 человек). Цитохимический анализ периферической крови новорожденных проводили на 1,3,7 сутки жизни после родов путем окраски полученных мазков и выявления ферментов:сукцинатдегидрогеназа (СДГ)в лимфоцитах по методу Нарциссова Р.П.(1969), нейтрофильных гранулоцитов:

миелопероксидаза (МПО), модифицированным методом Quagliano (1958), кислая фосфатазав лимфоцитах (КФЛ) и нейтрофилах (КФН) методом Golderg-Barka(1962) и щелочная фосфатаза в лимфоцитах (ЩФЛ) и нейтрофилах(ЩФН) методом азосочетания, вмодификации Нарциссова Р.П.(1973). Забор крови для цитохимических исследований осуществлялся из большого пальца нижней конечности новорожденных в объеме 0,1 мл на 1,3,7 дни после рождения. От пар: матьноворожденный на проводимое исследование,получено информированное согласие. Этические вопросы при проведении исследования соблюдены. Мазки периферической крови, приготовленные на обезжиренных предметных стеклах высушивали, фиксировали, окрашивали, микроскопировали под водной иммерсией (увеличение в 750 раз). Активность ферментов выражали в виде среднего цитохимического коэффициента. Был использован биометрический метод изучения энзиматической структуры популяции клеток крови с применением математической обработки по Урбах В.Ю. (1975). Полученные данные обработаны методом вариационной статистики с использованием критерия достоверности Стьюдента, корреляционного анализа, компьютерной программой MicrosoftExcel, версия 2010.

Результаты исследования и обсуждение.

У новорожденных контрольной группы результаты цитохимических исследований лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови свидетельствовали об энергоемкости, что способствовалоподдержанию высоких энерготрат в раннем неонатальном периоде на процессы трофики адаптации. Снижение активности СДГ на 3-й день совпало с фазой напряженной метаболической адаптации в связи с переходом на анаболические характеристики обмена веществ. Но «срыв» адаптации не происходил, что характеризовалось повышением активности КФ как в лимфоцитах, так и в нейтрофилах.

Характер распределения ферментной активности лейкоцитов у здоровых новорожденных отличался разнородностью лимфоцитов, связанную с «возбуждением» некоторых клеток в ответ на родовой стресс и изменившиеся условия внеутробной жизни. Активность ферментов клеток крови изменялась соответственно процессам адаптации новорожденных, способствуя их «физиологическому» течению, без «срывов» и без реализации заболеваний и неотложных синдромов.

Цитохимический анализ клеток кровиноворожденных 1 группы характеризовался сниженной активностью СДГ в лимфоцитах, наиболее выраженную на 3-й день жизни, что сопровождалось высокой (чем в контроле) разновидностью клеточных элементов, наиболее выраженную на 3-й день, отрицательным значением коэффициента асимметрии и повышением коэффициента клеточного резерва.

Средний коэффициентКФ был выше, чем в контроле во все дни исследования (р<0,05). Содержание КФ нейтрофилов, ЩФ нейтрофилов и лимфоцитов достоверно не отличалось от контрольных показателей.Энзиматическая активность миелопероксидазы нейтрофилов повышалась в динамике раннего неонатального периода, превышая контрольные показатели (р<0,05).

Таким образом, результаты цитохимического исследования клеток периферической крови свидетельствовали о компенсаторноприспособительном характере их изменений [5,6,7,11], направленном на поддержание гемопоэза и неспецифической защиты организма. Экспериментальными исследованиями [9,11] доказано, что при дефиците железа в организме нарушаются функциональные свойства субпопуляции лимфоцитов, ответственных за контрольэритропоэза.

В исследованиях, несмотря на снижение энергоемкости лимфоцитов, выявлялись лимфоциты с максимальным содержанием гранул фермента. Это дало нам право считать, что скрытый дефицит железа в организме новорожденных сопровождается компенсаторным повышением функциональной активности лимфоцитов с высокими метаболическими характеристиками.

У матерей 1 группы во время беременности отмечалось обострение хронических воспалительных заболеваний мочеполовых органов, что обусловило патологическую колонизацию новорожденных,но ни в одном случае не было реализации инфекционного процесса. Этому способствовала активация бактерицидной системы нейтрофилов, как защитнокомпенсаторная реакция.

Ферментный статус лейкоцитов у новорожденных детей 2 группы, рожденных матерями с ЖДА легкой степени характеризовался значительным снижением активности СДГ, которая с первого дня была достоверно ниже, чем в контроле (р<0,05) и продолжала снижаться в динамике раннего неонатального периода (Таблица 1.).Сниженный энергопотенциал лимфоцитов сопровождался высокими показателями активности КФ, ЩФ и МПО в нейтрофилах, по отношению к контрольным уровням (р<0,05). По отношению к данным 1 группы они достоверно не изменялись. Это свидетельствовало о «напряженности» процессов эритропоэза у детей, рожденных матерями с ЖДА легкой степени и возможности его «срыва» при экстремальных ситуациях[8,10], что подтвердилось патологическими уровнями гемоглобина и количества эритроцитов у детей, реализацией заболеваний и неотложных синдромов (респираторный дистресссиндром (РДС), пневмония и др.).

Таким образом, напряженность гемопоэза и низкая энергоемкость лимфоцитов у детей, родившихся у матерей с ЖДА легкой степени, обусловили нарушение фазы острой респираторно гемодинамической адаптации, пролонгирование фазы аутосенсибилизации и синхронизации основных функциональных систем во времени и метаболической адаптации, а также срыв адаптации у 32,4% детей в виде развития церебральной ишемии (ЦИ), пневмонии, РДС, геморрагического синдрома[3,10].

Таблица 1 Энзимы клеток крови у новорожденных от матерей с дефицитом железа (M±m)

ЖДА среднетяжелой и тяжелой степени (3 группа) материнского организма, являясь процессом длительным,труднообратимым, приводит в состояние декомпенсации защитные функции клеток крови. Это проявилось снижением энергопотенциала (СДГ) лимфоидных клеток их новорожденных,которое стойко удерживалось в течение всего раннего неонатального периода, поэтому и адаптационные процессы у новорожденных данной группы, требующие больших энергозатрат, протекали неблагоприятно[2, 13]. Наряду с низкой активностью СДГ в лимфоцитах (Таблица 1) отмечалось повышение активности КФЛ, то есть в клетке нарушался баланс процессов синтеза и распада в пользу последнего. Бактерицидная активность МПО в нейтрофилах, была высокойна протяжении

Примечание: *достоверность различий с показателями контрольной группы (р<0,05)

**достоверность различий с показателями контрольной группы (р<0,001)

всего раннего неонатального периода (р<0,001).Таким образом, новорожденные, развивающиеся в условиях дефицита железа материнского организма подвержены действию инфекционных агентов с самого рождения. И даже сапрофитная флора матери на новорожденных может оказать патогенное действие[5,7,12].

Выводы.

1. Клеточные ресурсы испытывают напряжение гомеостаза и адаптация организма новорожденных от матерей с ЖДА к агрессивным стимулам является несостоятельной. Напряженность защитных систем клеток крови определяет пролонгирование и срыв адаптационных процессов с реализацией неотложных синдромов и заболеваний в неонатальном периоде.
2. Цитохимическое исследование нейтрофилов и лимфоцитов периферической крови могут быть использованы как в качестве массового скринингового обследования с целью выявления состояния защитных функций организма новорожденных от матерей с дефицитом железа, так и в случаях персонифицированного ведения пациентов с сопутствующей патологией.
3. Новорожденные дети от матерей с ЖДА легкой, среднетяжелой и тяжелой степенями, должны быть выделены в группы риска по нарушению процессов адаптации и реализации заболеваний.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ахмадеева Э.Н., Каюмов Ф.А. Цитохимические исследования клеток крови новорожденных // Лабораторное дело. 1989. №6. -С. 19-21.
2. Володин Н.Н. Перинатология. Исторические вехи, перспективы развития // Вопросы практической педиатрии. 2006. Т.1., №3. С. 5-24.
3. Вахрамеева С.Н., Денисова С.Н., Хотимченко С.А., Алексеева И.А. Латентная форма железодефицитной анемии беременных женщин и состояние здоровья их детей // Российский вестник перинатологиии педиатрии. 1996. №33., Т.41. С. 26-30.
4. Каюпова Н.А. Анемия беременных в патогенезе акушерских и перинатальных осложнений и их профилактика. Железодефицитная анемия как региональная проблема. Эпидемиологический и нутрициональный аспекты. Алматы: 1990. С.49-58.
5. Кулаков В.И., Фролова О.Г. Здоровье матери и новорожденного // Акуш. и гин. 1994. №1. С. 3-6.
6. Мамедов С.Б. Ферментный статус нейтрофилов и моноцитов крови у здоровых детей раннего возраста // Педиатрия и детская хирургия. 2011. №1(63). С. 22-24.
7. Нарциссов Р.П., Петричук С.В., Духова З.Н., Крепец В.В. Новые возможности цитохимического анализа в оценке здоровья ребенка и прогнозе его развития // Педиатрия. 1998. №4. С.96-101.
8. Нарциссов Р.П. Анализ изображения клетки-следующий этап развития клинической цитохимии в педиатрии // Педиатрия.-1998. №4. С.101-105.
9. Рослый И.М.,.Абрамов С.В, Покровский В.И. Ферментемия адаптивный механизм или маркер цитолиза? // Вестник Российской Академии Медицинских наук. М.:Медицина, 2002. №8. C. 3-8.
10. Санчихина М.Е., Санчихин С.П. Факторы риска развития перинатальной патологии при дефиците железа у беременных//Материалы ежегодного конгресса специалистов перинатальной медицины // Вопросы практической педиатрии. 2006. Т.1., №4. С. 57-64.
11. Фрелих Г.А., Поломеева Н.Ю., Васильев А.С., Удут В.В. Современные методы оценки функционального состояния митохондрий // Сибирский медицинский журнал. 2013. Т.28., №3. С. 7-13.
12. Шишенко В.М., Петричук С.В., Духова З.Н., Крепец В.В. Новые возможности цитохимического в оценке здоровья и прогнозе его развития // Педиатрия. 1998. №4. С.96-101.
13. Mayevsky А., ^апсе В. ОхіСайоп^еСисйоп states ой NADH inv^: йгот anirnals to сііпісаі ^е // MitochoпСгioп. 2007. Ѵоі.7., №5. P. 330-339.
14. Quarato G., Ғіссоіі C., .5сгіта R. et al. Fun^to^l irnaging ой тетЬгапе ройпНаі at Ше siпgіe ткосһопСгіоп іeveі: Possibіeappіicatioп йог Сiagпosis ой humaп Сiseases / / MitochoпСгioп. 2011. Ѵоі. 11., №5. P. 764773.