Определение флавоноидов ocimum basilicum l. травы

Образцы травы базилика благородного заготовлены с экспериментального участка ботанического сада ПМФИ в июле 2018 года. Для обнаружения флавоноидов из сырья были получены водно-спиртовые извлечения (экстрагент – 70% этанол), с которыми были проведены качественные реакции. Также изучение флавоноидов в извлечениях осуществляли методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) восходящим способом на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-Ф- УФ» в системе бутанол – уксусная кислота ледяная – вода в соотношении 4:1:2. В результате проведенных качественных реакций было установлено присутствие в траве базилика благородного флавоноидов. Методом ТСХ в спиртовом извлечении из травы базилика благородного были идентифицированы 4 соединения флавоноидной природы: кверцетин, рутин, гиперозид, лютеолин.

Ключевые слова: Ocimum basilicum L., Lamiaceae, флавоноиды, тонкослойная хроматография.

Растения семейства яснотковые (Lamiaceae) всегда представляли интерес для фармакогнозии. В России в медицине и фармации используется около 10 только официальных растений семейства Lamiaceae. Это мята перечная, шалфей лекарственный, душица, чабрец, тимьян обыкновенный, мелисса, пустырник, лаванда. Не говоря о таких, еще не ставших фармакопейными, но уже достаточно изученных представителях Lamiaceae как розмарин, иссоп, котовник, лофант (многоколосник) и многих других [1].

В настоящее время в России и сопредельных странах СНГ, характеризующихся умеренным континентальным климатом с четко выраженными временами года, очень популярно культивирование различных растений семейства Lamiaceae. Это связано с тем, что яснотковые в основном травянистые растения, которые могут быть введены в культуру как однолетние. Для их выращивания достаточно нескольких месяцев безморозного периода. Одним из таких растений является базилик благородный (Ocimum basilicum L.). Исторической родиной базилика благородного считаются Индия и Иран, однако еще в древности базилик стали выращивать как пряность в странах Южной Европы, а затем и в более северных регионах [2].

В России культура выращивания базилика насчитывает более 300 лет. В процессе селекции были выведены различные сорта Ocimum basilicum, которые можно разделить на 2 фенотипа: фиолетовый – всё растение имеет ярко-фиолетовую окраску, и зеленый – всё растение имеет зеленую окраску. Базилик благородный имеет сильный ароматный запах и своеобразный пряный вкус, широко используется в пищевой промышленности, может употребляться также в свежем виде как зелень [3].

О лечебных свойствах базилика известно давно. Его применяют при заболеваниях желудочнокишечного тракта: спазмы желудка и желчевыводящих путей, различные нарушения пищеварения. Кроме того базилик благородный известен в народной медицине различных народов Европы и Азии при заболеваниях сердечно-сосудистой системы, нервных расстройствах, связанных с утомлением, общей слабостью. Имеются сведения, что употребление базилика в больших количествах может оказывать мочегонный эффект [4].

Ранее нашими исследованиями травы базилика благородного были определены органические соединения извлекаемые водой: аскорбиновая кислота, органические кислоты, дубильные вещества [5, 6]. Проведено исследование эфирного масла и определен его компонентный состав [7]. Однако определенный интерес представляет изучение фенольных соединений травы базилика извлекаемых спиртом этиловым. В этом отношении важной группой биологически активных веществ, проявляющей биологическую активность являются флавоноиды. Основные фармакологические эффекты флавоноидов – это капилляроукрепляющее действие, мочегонное и желчегонное. В последние годы флавоноиды все больше представляют интерес как природные антиоксиданты, которые обычно оказывают свое целебное действие в комплексе с другими фенольными соединениями какого-либо лекарственного растения [8]. Именно полный комплекс биологически активных веществ (БАВ) таких растений семейства Lamiaceae как шалфей лекарственный, душица обыкновенная, мелисса лекарственная, проявляет свое лечебное действие.

Не смотря на то, что вышеуказанные эфиромасличные растения давно введены в медицинскую практику, включены в фармакопеи СССР и РФ, в том числе новейшую ГФ РФ XIV изд. (год выхода 2018) [9], в последние годы эти растения снова стали предметом изучения фармакогностами не столько как источники эфирного масла (компонентный состав которого давно изучен), а как источники фенольных соединений (флавоноиды, фенилпропаноиды, дубильные вещества и др.).

В этой связи изучение флавоноидов травы базилика благородного становится особо актуальным, тем более что Ocimum basilicum относится к семейству Lamiaceae, которое нам уже дало десятки ценных лекарственных растений.

Цель исследования. Изучение флавоноидов травы базилика благородного, культивируемого в Ставропольском крае Российской Федерации.

Материалы и методы. Образцы травы базилика благородного 2 сортов: «фиолетовый» и «зеленый», заготовленные с экспериментального участка ботанического сада ПМФИ в фазу активного цветения в июле 2018 года, высушенная в проветриваемом помещении, без попадания прямых солнечных лучей при комнатной температуре 25-26º C. Условия сушки подобраны в соответствии с требованиями для предотвращения потери эфирного масла.

Сырье измельчали до размеров частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 1 мм.

Результаты и обсуждения. На первом этапе важно было определить наличие флавоноидов в исследуемом сырье. Для этого были выбраны и проведены качественные реакции с извлечениями из травы базилика благородного.

Учитывая, что флавоноиды в растениях могут находиться как в форме гликозидов (например рутин, цинарозид, гиперозид), так и в форме агликонов (например кверцетин, лютеолин), наиболее полное извлечение всей суммы флавоноидов наблюдается при использовании в качестве экстрагента спирта этилового 70% [8, 10]. Поэтому для качественного определения флавоноидов из сырья было получено водно-спиртовое извлечение (экстрагент – 70% этанол). Сырье заливали экстрагентом в соотношении 1:10 и кипятили в колбе с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 минут, затем полученное извлечение фильтровали.

Было получено 2 извлечения:

1) Образец №1 – из травы базилика благородного, сорт «фиолетовый»;

2) Образец № 2 – из травы базилика благородного, сорт «зеленый».

С полученными извлечениями проводили следующие реакции: цианидиновая проба; реакция с алюминия хлорида раствором; реакция с аммоня гидроксида раствором; реакция с железа (III); хлоридом раствором 3%; реакция с ацетата свинца основного раствором; борно-лимонная реакция – специфическая реакция на 5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы.

Результаты проведенных качественных реакций на флавоноиды в извлечениях из травы базилика благородного представлены в таблице 1.

Таблица 1- Результаты качественных реакций на флавоноиды в извлечениях из травы Ocimum basilicum

Дальнейшее изучение флавоноидов в извлечениях из травы базилика благородного, в том числе идентификацию соединений флавоноидной природы путем сравнения со стандартными образцами осуществляли с помощью метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) восходящим способом на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-Ф-УФ» (г. Краснодар, Россия). Метод ТСХ является известным и доступным, позволяющим в извлечениях установить индивидуальные химические соединения, включая соединения фенольной природы.

Для нанесения на линию старта, отмеченной на расстоянии 10 мм от края пластинки, использовали специальные капилляры. Наносили точечно спиртовые извлечения из травы базилика благородного, а также растворы «свидетелей» – стандартные образцы индивидуальных веществ, соединений фенольной природы. В качестве «свидетелей» были использованы: рутин (ООО «Фармамедикал», Россия); кверцетин (ООО «Сигмабиосинтез», Россия); гиперозид (Fluka, Германия) и лютеолин (ООО «Сигмабиосинтез», Россия).

После нанесения всех растворов пластинку высушивали досуха и помещали в хроматографическую камеру с системой растворителей.

Для хроматографирования была выбрана система бутанол – уксусная кислота ледяная – вода (БУВ) в соотношении 4:1:2 [10].

Когда линия растворителя проходила до линии финиша, хроматограмму вынимали из камеры и высушивали досуха. Высушенную хроматограмму просмотривали в Уф-свете. Проводили обработку пластины парами аммиака (для увеличения интенсивности свечения пятен), высушивали и вновь просмотривали в Уф-свете. Затем пластину обрабатывали раствором железа (III) хлорида, высушивали и вычисляли значения Rf.

По результатам коэффициентов хроматографической подвижности и окраски зон адсорбции веществ на хроматограммах, сравнивая со стандартными образцами, в извлечениях из травы базилика благородного идентифицировали: кверцетин, рутин, гиперозид и лютеолин. Результаты анализа хроматографической пластинки приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Результаты хроматографирования извлечений травы Ocimum basilicum

Выводы. В результате проведенных качественных реакций было установлено присутствие в траве базилика благородного флавоноидов.

Методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей бутанол – уксусная кислота ледяная – вода в присутствии свидетелей в спиртовом извлечении из травы базилика благородного были идентифицированы 4 соединения флавоноидной природы: кверцетин, рутин, гиперозид, лютео- лин.

Также было установлено, что флавоноиды травы базилика благородного фиолетового сорта и зеленого сорта полностью идентичны. На основании этого можно сделать вывод, что сортовая принадлежность базилика благородного не влияет на компонентный состав флавоноидов.

Наличие флавоноидов в траве базилика благородного, делает данный вид сырья перспективным средством, обладающим антиоксидантными свойствами для лечения многих патологий.

Дальнейшие исследования будут направлены на изучение количественного анализа суммы флавоноидов травы Ocimum basilicum L.

Литература

1. Миролюбова О.В., Парфейников С.А., Попов И.В., Попова О.И. Инновации в создании сырьевой базы для производства фитопрепаратов в Южном Федеральном Округе // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. Пятигорск, 2008. С. 632-634.
2. Попов И.В., Попова О.И. Основные направления социально-гигиенического мониторинга при заготовке лекарственного растительного сырья на современном этапе // Новая Аптека. 2011. № 91. С. 15-18.
3. Попов И.В. Возможности реализации фармакопрофилактической помощи сборами для сохранения и укрепления здоровья населения на региональном уровне // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. Волгоград, 2013. С. 444-446.
4. Суржанская Т.А. Определение основных биологически активных веществ надземной части базилика благородного (Ocimum basilicum L.)// Беликовские чтения: материалы VI Всероссийской научно-практической конференции. Пятигорск, 2018. С. 267-271.
5. Суржанская Т.А. Исследование биологически активных веществ Ocimum basilicum L., извлекаемых водой // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки: Материалы VIII Международной научно-практической конференции. Владикавказ, 2018. С. 155-157.
6. Суржанская Т.А. Определение органических кислот в траве базилика благородного (Ocimum basilicum L.) // Во имя жизни и здоровья: Материалы 71-й Международной научно-практической конференции. Пятигорск, 2018. С. 201-208.
7. Попов И.В., Суржанская Т.А., Попова О.И., Папаяни О.И. Компонентный состав эфирного масла Ocimum basilicum L. и его антимикробная активность // Перспективы лекарственного растениеведения: сборник конференции. 2018. С. 513-517.
8. Тохсырова З.М., Попов И.В. Попова О.И. Исследование фенольных соединений листьев и побегов розмарина лекарственного (Rosmarinus officinalis L.), интродуцированного в ботаническом саду Пятигорского медико-фармацевтического института // Химия растительного сырья. 2018. № 3. С. 199-207.
9. http://femb.ru/femb/pharmacopea.php
10. Шейхмагомедова П.А. Фитохимическое исследование фацелии пижмолистной (Phacelia tanacetifolia Beth.) // Материалы 67-й Всероссийской научной конференции молодых ученых и студентов с международным участием. Махачкала: ИПЦ ДГМУ, 2019. С. 575-578.