Заболевания сердечно-сосудистой системы широко распространены среди людей различного возраста, являются причиной частичной или полной утраты трудоспособности большого контингента населения. Поэтому в настоящее время широко внедряются в медицинскую практику препараты, применяемые для лечения сердечно-сосудистой системы, в частности антиаритмические средства, которые нашли широкое применение для лечения различных видов аритмий. В настоящее время потребность в антиаритмических препаратах все больше возрастает. Широкая популярность препаратов этой группы среди населения обуславливает вероятность возникновения отравлений при передозировке этими препаратами.
Объектом наших исследований был выбран этмозин – производное фенотиазина, который нашел широкое применение в клинической практике в качестве антиаритмического средства. Этмозин – 2- карбэтоксиамино-10-(3-морфолинопропионил)-фенотиазина гидрохлорид – относится к антиаритмическим препаратам I класса (хинидиноподобного действия) [1]. Оказывает умеренный коронарорасширяющий, спазмолитический, м-холинолитический эффект. Применяют при экстрасистолиях, пароксизмальной тахикардии и пароксизмах мерцательной аритмии, возникающих при ишемической болезни сердца, а также при аритмиях другой этиологии. Эффективен при аритмиях, вызываемых передозировкой сердечных гликозидов. Сравнительные исследования показывают, что этмозин является эффективным препаратом при желудочковых аритмиях.
Этмозин относится к препаратам списка Б и представляет значительный интерес в химикотоксикологическом отношении, так как кроме терапевтического эффекта может проявлять побочное и токсическое действие. Введение препарата в организм в дозах, превышающих терапевтические (медицинские ошибки, бытовые и суицидальные отравления), нередко приводит к летальным исходам. Судебно-медицинская диагностика интоксикаций этмозином представляет трудную задачу, особенно при комплексном лечении антиаритмическими средствами. Поэтому разработка методов судебно-химического анализа этмозина совместно с другими препаратами аналогичного действия, которые до настоящего времени были недостаточно разработаны, является актуальной задачей.
В связи с вышеизложенным, мы поставили задачу разработать наиболее чувствительные химические и физико-химические методы идентификации этмозина, пригодные для целей химикотоксикологического анализа [2].
Химическую идентификацию этмозина проводили с помощью осадительных и цветных реакций. Для выполнения осадительных реакций готовили 0,05% раствор препарата в этаноле и использовали наиболее часто используемые в химико-токсикологическом анализе осадительные реактивы: Драгендорфа, Драгендорфа (модифицированный по Мунье), Бушарда, Марме, соль Рейнеке, пикриновую кислоту и др. [2]. На предметное стекло наносили 1 каплю 0,05% раствора препарата в этаноле, упаривали досуха и прибавляли 1 каплю соответствующего реактива, после чего осторожно соединяли стеклянной палочкой. Если тотчас не наблюдалось видимых изменений, то предметное стекло помещали во влажную камеру и проводили наблюдения через 10-30 минут. Параллельно на предметное стекло наносили каплю соответствующего реактива в качестве контрольного опыта. По истечении указанного времени осадки рассматривали под микроскопом. Ни с одним из приведенных реактивов не наблюдалось образования характерных кристаллических осадков. Нами также была установлена чувствительность реакций и рассчитано предельное разбавление. Наиболее чувствительными из изученных реактивов явились реактив Драгендорфа (открываемый минимум 5 мкг в пробе) и реактив Драгендорфа (модифицированный по Мунье) (открываемый минимум 2,5 мкг в пробе).
Для выполнения цветных реакций использовали белые фарфоровые пластинки с углублениями, в которые вносили 0,05% растворы этмозина, новокаинамида и этацизина в этаноле, содержащих от 0,05 до 20 мкг препаратов в пробе. Растворитель упаривали досуха, к остатку прибавляли 1 каплю соответствующего реактива (Марки, Манделина, Фреде, Либермана, Эрдмана и др.), перемешивали стеклянной палочкой и наблюдали изменение окраски, определяли чувствительность реакций. Параллельно проводили контрольный опыт, в качестве раствора сравнения использовали этанол. Наблюдения проводили сразу и через 10-20 минут. Из всех изученных реактивов наиболее чувствительными для обнаружения этмозина являются реактивы Манделина и Либермана (открываемый минимум 10 мкг в пробе). Для препаратов, которые могут назначаться совместно с этмозином, наиболее селективными реактивами оказались Манделина и Либермана, позволяющие отличить этмозин от других веществ.
Для идентификации и разделения исследуемых веществ методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) использовали хроматографические пластинки Sorbfil (силикагель СТХ-1 ВЕ, тип подложки – ПЕТФ, связующее вещество – силиказоль, фракция – 8 ÷ 12 мкм, толщина слоя – 100 мкм, размер пластинок 10 х 10 см) и системы растворителей кислого, нейтрального и основного характера. Хроматографирование проводили в камере объемом 2000 см3,в которую вносили по 100 мл смеси растворителей. Камеру насыщали 30 минут. На линию старта хроматографической пластинки (2 см от края) наносили по 10 мкг 0,1% спиртовых растворов этмозина, новокаинамида, этацизина и амиодарона. Параллельно помещали 1 каплю смеси анализируемых веществ. Длина пробега растворителей 7 см. Затем после хроматографирования пластинки высушивали при комнатной температуре и проявляли одним из реактивов. В качестве проявителей использовали следующие проявители: реактив Драгендорфа (модифицированный по Мунье), 10% раствор FeCl3, 10% раствор H2SO4 в этаноле, реактивы Либермана и Манделина. Наиболее чувствительными реактивами для проявления пятен этмозина оказались 10% раствор FeCl3, 10% раствор H2SO4 в этаноле (открываемый минимум 0,05 мкг препарата в пробе).
При проведении исследований с помощью метода хроматографии в тонких слоях сорбента (ТСХ) наиболее подходящими системами растворителей для идентификации этмозина оказались системы гексан- ацетон-аммиак (20:20:1) и циклогексан-хлороформ-диэтиламин (5:4:1), при использовании которых получаются надежные значения величины Rf (0,2-0,8). Среднее значение Rf составляет 0,42-0,46. Наиболее эффективное разделение этмозина от препаратов аналогичного действия новокаинамида, этацизина и амиодарона было достигнуто в системах гексан-ацетон-аммиак (20:20:1), толуол-ацетон-хлороформ- пропанол-2 (30:15:5:1), гексан-толуол-диэтиламин (20:15:5) и циклогексан-хлороформ-диэтиламин (5:4:1).
Также нами было исследовано поведение этмозина в УФ-области спектра в различных растворителях: 0,1М растворе HCl, этаноле и метаноле. Спектры этмозина измеряли на приборе СФ-46 в кювете с толщиной слоя 10 мм при λmax = 200 до 350 нм, т.к. при λmax = 300-350 нм чувствительность метода снижается. Концентрация исследуемых растворов составила 150 мкг в 1 мл.
Таким образом, нами были изучены условия обнаружения этмозина с помощью осадительных и цветных реакций с различными реактивами и установлена их чувствительность. Также изучены условия обнаружения этмозина с помощью метода хроматографии в тонких слоях сорбента и исследовано поведение препарата в УФ-области спектра в различных растворителях. Изученные методы идентификации могут быть использованы для обнаружения препарата при химико-токсикологических исследованиях.
Список литературы
[1] Машковский, М. Д. Лекарственные средства: 15-е узд. – М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2006. – С. 429 – 430.
[2] Токсикологическая химия. Метаболизм и анализ токсикантов: учебное пособие для вузов / Под ред. Н. И. Калетиной. – М.: ГОЭТАР-Медиа, 2008. – 1016 с.