Изучение цитотоксичности координационного соединения иода (аддукта иода) in vitro

Координационные соединения иода, как биологически активные вещества, представляют большой интерес для исследования. Однако, как каждое новое химическое соединение, если в перспективе предполагается его использование в качестве лекарственного препарата, должно быть безопасным для макроорганизма. Изучение цитотоксичности является одним из важнейших этапов раннего доклинического испытания безопасности любого нового химического соединения. В ходе исследования изучается механизм и характер цитотоксической активности, оценивается диапазон цитотоксических концентраций, появляется возможность прогнозировать токсические дозы для лабораторных животных [1, 2].

Целью данного исследования явилось изучение цитотоксичности in vitro координационного соединения или аддукта иода -субстанции D1 (ди(трииодидо)-ди-2,6-диаминогексановой кислоты моногидрат), проявляющей высокую противомикробную активность.

Оценку цитотоксичности исследуемого вещества invitroпроводили используя МТТ-тест [3]. В работе была использованы линии клеток MDCK (клетки почек собаки (Canis familiaris) и RD (эмбриональная рабдомиосаркома человека), полученные из коллекции ATCC. Клетки рассевали в 96- луночные плашки в концентрации 2x105 клеток в 1,0 мл.

Плашки инкубировали в термостате при (37 ± 1) ºС, 5 %-ным СО2. Из лунок планшета через 24 часа инкубации удаляли ростовую среду, и вносили по 200,0 мкл среды DMEM, содержащей исследуемое вещество в исследуемых концентрациях от 5,0 до 0,004 мг/мл. В лунки с отрицательным контролем вносили по 200,0 мкл неполной питательной среды DMEM.

Через 72 ч среду с веществом удаляли из лунок, и добавляли 200,0 мкл свежей питательной среды и 50,0 мкл рабочего раствора МТТ, плашку инкубировали 4 ч при (37± 1)°С. После окончания срока инкубации, удаляли надосадочную жидкость. В каждую лунку вносили по 100,0 мкл DMSO. Оптическую плотность в лунках измеряли на микропланшетном ридере Tecan Sunrise RC.4 (Австрия), при длине волны основного фильтра - 540 нм и референс-фильтра – 620 нм [4, 5, 6, 7].

В результате проведенных исследований, было показано, что исследуемое вещество - субстанция D1 (ди(трииодидо)-ди-2,6-диаминогексановой кислоты моногидрат) является нетоксичным в отношении культур клеток MDCK и RD. Однако, при сравнении результатов токсичности исследуемого вещества в отношении культур клеток RD и MDCK, было показано, что субстанция D1 обладает большей токсичностью в 1,4 раза в отношении культур клеток MDCK (ЦТК50 = 1,55 мг/мл). ЦТК50 субстанции D1 в отношении культур клеток RD составило 2,17 мг/мл.

Список литературы

  1. Riss TL, Moravec RA, Niles AL. (2011) Cytotoxicity testing: measuring viable cells, dead cells, and detecting mechanism of cell death, Methods Mol Biol, 740:103-114. DOI: 10.1007/978-1-61779-108-6-12.
  2. OECD Environment, Health and Safety Publications Series on Testing and Assessment No. 129. (2010) Guidance document on using cytotoxicity tests to estimate starting doses for acute oral systemic toxicity tests. Paris, OECD.
  3. Оптимизация критических параметров МТТ-теста для оценки клеточной и лекарственной цитотоксичности / В. С. Черепович, Е. В. Волочник, Е. В. Антоненко, Е. С. Лоткова, Т.В. Романовская и др. // Медицинский журнал. – 2006. – № 2.
  4. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: Application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunological Methods. – 1983. – Vol. 65. – P. 55-63.
  5. Altman, F. P. Tetrazolium salts and formazans. Prog Histochem Cytochem. – 1976. – Vol.9, P.1-56.
  6. Barile, F. A. Introduction to in vitro cytotoxicology: mechanisms and methods, Boca Raton, FL, CRC Press. – 1994.
  7. Lee, M. K., Cheng, B. W. H., Che, C. T., and Hsieh, D. P. H.. Cytotoxicity Assessment of Ma-huang (Ephedra) under Different Conditions of Preparation. Toxicol Sci. – 2000. – Vol 56, P.424-430.
Год: 2018
Город: Шымкент
Категория: Медицина