Целью работы было определение антимикробных свойств некоторых растворов, рекомендуемых для антисептики рук. Исследованы антимикробные свойства растворов для антисептической обработки рук, содержащие спирт этиловый, один из которых приготовлен по рецептуре рекомендуемой ВОЗ. Установлено, что данные растворы обладают высокой антимикробной активностью в отношении грамположительных стафилококков, грамотрицательных кишечной и синегнойной палочки, однако практически не проявляют бактерицидного эффекта по отношению к грибам рода Candida, а также спорообразующим бактериям рода Bacillus.
Ключевые слова: антисептик, антимикробная активность, спирт этиловый.
Введение. На сегодняшний день в Украине с каждым годом увеличивается количество инфекционных заболеваний, передаваемых при контакте с больными людьми через кожу рук. Зонами риска становятся салоны красоты, маникюрные салоны и парикмахерские, часто использующие в своей работе операции, повреждающие верхний слой эпидермиса. При этом снижается защитная функция кожи клиента и повышается возможность инфицирования его самыми различными заболеваниями: кандидоз, псориаз, псевдомониа и т.д. [2, 4, 7].
Важным этапом предупреждения развития любого инфекционного заболевания является разрыв цепи передачи болезнетворных микроорганизмов за счет применения, например, антисептических препаратов. На фармацевтическом рынке Украины предлагается целый спектр антисептиков, в состав которых в основном входят спирты, в том числе спирт этиловый. Кроме того, они предлагаются в основном в жидкой форме, что не всегда удобно и экономически выгодно [3, 4, 7, 8].
ВОЗ было разработано руководство по организации производства антисептиков в аптеках, в котором рекомендуется использовать рецептуры на основе этилового или изопропилового спиртов, однако, широта спектра антимикробного действия данных антисептиков не указывается. Поэтому целью данного исследования стало изучение антимикробных свойств антисептического раствора по рецептуре № 1 (ВОЗ) и раствора спирта этилового 80 % для возможного дальнейшего использования в качестве активного фармацевтического ингредиента при разработке антисептического препарата в мягкой лекарственной форме [5, 6].
Материалы и методы. Объектами исследования были выбраны 2 антисептических раствора: 1 - содержит спирт этиловый - 833,3 мл, перекись водорода - 41,7 мл, глицерин - 14,5 мл, вода очищенная - 110,5 мл; 2 - это 80 % раствор спирта этилового. При этом следует указать, что образец 1 был приготовлен в соответствии с рекомендациями ВОЗ и содержал кроме основного антимикробного компонента (этанола) перекись водорода для уничтожения микробных спор бактерий-контаминантов, и глицерин для увлажнения и смягчения кожи рук. Антимикробную активность экспериментальных образцов изучали методом «диффузии в агар», используемого при исследованиях гелей, кремов, растворов и суспензий [1]. Суть метода заключается в использовании двух слоев питательной среды в чашке Петри, при этом при исследовании антибактериального эффекта используется мясо-пептонный агар, а фунгицидного - агар Сабуро. При этом первый слой - основа, а второй содержит взвесь рефернт-штамма микроорганизма и лунки, в которые вносят исследуемый образец антисептического средства.
Исследования проводили с использованием следующих референс-штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 8739, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Proteus vulgaris ATCC 4636, Bacillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans ATCC 10231, Candida glabrata ATCC 90018, Candida tropicalis NCYC 1393. При приготовлении инокулята тест-штамма микроорганизма применяли суточную культуру, выросшую на плотной питательной среде. Плотность инокулята доводили до 0,5 по стандарту МакФарланда, инокулят использовали в течение 15 мин после приготовления. Сначала проводили контроль стерильности первого слоя питательной среды в чашках Петри, после чего на поверхности размещали стеклянные цилиндры, отступая от центра чашки на 2-3 см.
Одновременно смешивали 1 мл взвеси тест-штамма микроорганизма и 12 мл расплавленной и охлажденной до 40 °С соответствующей питательной среды. Полученную смесь выливали в чашку Петри так, чтобы образовался второй слой с лунками. Чашки Петри выдерживали определенное время при комнатной температуре, после чего вынимали цилиндры и в образовавшиеся лунки вносили исследуемые растворы.
В течение 2 час чашки Петри оставляли в покое для лучшей диффузии препарата, после чего инкубировали в термостате в течение 18 час при нужной температуре (грибы - (24±2) °С, бактерии - (36±2) °С). После окончания времени культивирования отмечали и измеряли величину зоны задержки роста культуры тест-штамма и делали вывод об антимикробных свойствах исследуемых образцов.
Результаты и обсуждение. Результаты проведённых исследований показали, что диаметр зоны задержки роста Staphylococcus aureus для образца 1 составляет (29±0,2) мм, а 2 - (26±0,4) мм; Escherichia coli для образца 1 - (20±0,5) мм, 2 - (16±0,3) мм; Pseudomonas aeruginosa для образца 1 - (26±0,3) мм, 2 - (20±0,2) мм; Proteus vulgaris для образца 1 - (32±0,5) мм, 2 - (26±0,7) мм.
Также было выявлено, что исследуемые антисептические растворы не проявляют антибактериальной активности по отношению к грамположительным спорообразующим бактериям Bacillus subtilis, а также фунгицидной активности по отношению к Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, что существенно ограничивает спектр их действия.
Выводы. Проведенные исследования показали, что антисептические растворы, содержащие спирт этиловый в концентрациях рекомендуемых ВОЗ, обладают высокой антимикробной аткивностью в отношении грамположительных стафилококков, грамотрицательных кишечной и синегнойной палочки, однако практически не проявляют бактерицидного эффекта по отношению к грибам рода Candida, а также спорообразующим бактериям рода Bacillus. Таким образом, при фармацевтической разработке антисептического средства на основе выше указанных растворов является обоснованным и необходимым введение дополнительного компонента с антимикробным действием для расширения спектра действия разрабатываемого препарата, что явлется целью дальнейших исследований.
Литература
- Вивчення специфічноі активності протимікробних лікарських засобів: Метод. реком. / Ю.Л. Волянський, І.С. Гриценко, В.П. Широбоков і інш.. - Киів, 2004. - 38 с.
- Качан Р.В. Антисептика рук / Р.В. Качан, О.А. Андреэва, А.П. Строкань // ВІСНИК КНУТД. - 2014. - №1. - С. 25-29.
- Никульшина Л.Л., Фоменкова Д.Д. Асептика и антисептика от Склифосовского до наших дней / Л.Л. Никульшина, Д.Д. Фоменкова // Вестник Совета молодых учёных и специалистов Челябинской области. - 2016. - Т.2. - №2(13). -С. 93-95.
- Нечипоренко Н.М. Некоторые аспекты применения антисептиков в дерматологии / Н.М. Нечипоренко // Клінічна імунологія. Алергологія. Інфектологія. - Спецвып., 2014. - № 1. - С. 50-55.
- Рекомендованные ВОЗ рецептуры антисептиков для рук. Руководство по организации производства на местах/ ВОЗ. - режим доступа: http://www.moz.gov.ua/docfiles/guide local production ru.pdf
- Руководство ВОЗ по гигиене рук в здравоохранении: Резюме/ ВОЗ. - режим доступа: http://apps.who.int/iris/bitstream/10665/70126/21/WHO IER PSP 2009.07 rus.pdf?ua=1
- Curran E. Using data effectively to prevent and control infection / E. Curran, J. Wilson. - British Journal of Infection Control. - 2008. - 9: 26. - vol. 9, №. 3, P. 31
- Williamson D.A. Current and Emerging Topical Antibacterials and Antiseptics: Agents, Action, and Resistance Patterns / D.A. Williamson, G.P. Carter, B.P. Howden // Clinical Microbial Reviews. - July 2017. - 30(3). - P. 827-860.