Препарат «Тонзилат» получен на основе сырья алтея обыкновенного, шалфея и грецкого ореха, ромашки и тысячелистника обыкновенного, одуванчика и хвоща полевого [1,2].
Цель исследования. Разработать критерии идентификации компонентов препарата «Тонзилат» на основе анализа летучих веществ, характерных для входящих в состав препарата отдельных растений.
Материалы и методы. Растительные сырьё измельчали до требуемой величины (1-3 мм), отделяли от мелкой и крупной фракции, перемешивали, загружали в экстрактор и помещали сверху него двухслойную фильтровальную бумагу с фарфоровыми кусочками. Свер-ху по стенкам экстрактора при открытом нижнем кране заливали 60% этиловым спиртом [3].
Как только экстрагент начинает вытекать из нижнего крана, кран экстрактора закрывали, вытекшее излечение обратно заливали в экстрактор и оставляли на определенный промежуток времени, циркулируя извлечение с определенной частотой. При этом частота циркуляции составляла от 2 до 9 раз в сутки. В результате исследований было установлено, что оптимальная частота циркуляции равна 4 раза в сутки, а время настаивания -5 суток. Так как цветки ромашки и корень алтея содержит много слизистых веществ, из них получали водный настой [4]. К водной вытяжке добавляли спиртовое извлечение, перемешивали и фильтровали. Полученный препарат имеет коричневую окраску запахам ромашки.
Летучих веществ хлороформного извлечения из препарата «Тонзилат» и отдельных растений исследовали с помощью хромато-масс-спектрометрии (ХМС) на приборе GC-MS/HP 6890 (Hewlett-Packard, США), с применением колонки —HP-5-MS”, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм (Agilent Technologies, США. Условия хроматографии: температура инжектора - 270оС, детектора - 230оС; температура термостата колонки начальная - 80оС, конечная - 270оС, со скоростью 10оС/мин и скоростью потока газа носителя - 1.5 мл/мин. Идентификацию компонентов проводили, пользуясь программой ChemStation (Agilent Technologies, США). Количественную оценку компонентов проводили по площади пиков хроматограммы хромато- масс-спектрометрии, построенной на основе полного ионного тока (ордината) и времени выхода (абсцисса).
Для извлечения суммы летучих компонентов эфирных масел из сухих растительных образцов измельченную навеску (5 г) однократно экстрагировали хлороформом в соотношении 1 г растения: 1 мл хлороформа, жидкую фазу смеси фильтровали через плотный стеклянный фильтр. В фильтрат добавляли 1-2 г безводного сульфата-натрия для обезвоживания.
Жидкий растительный экстракт «Тонзилат» для ХМС исследований экстрагировали хлороформом в объемном соотношении 1:1 трехкратно. Для уменьшения экстрагирования свободных жирных кислот в препарат добавляли несколько капель 2 М NaOH перед смешиванием с экстрагентом. Хлороформную фазу отделяли от водной и обезвоживали безводным сульфатом натрия.
Специфика сырья, включающего растения различных семейств предопределила необходимость получения хроматограммы с широким диапазоном времени удерживания при температурном режиме от 85о С до предельных для данной колонки. В литературе есть сведения о летучих маркерных веществах для шалфея (эвкалиптол, туйон, камфара), тысячелистника (камфара), ромашки (азулен). В то же время многие описанные вещества являются характерными для широкого круга растений, что снижает их ценность в качестве маркерных компонентов. По этой причине мы учитывали количественное содержание конкретного компонента в самом растительном материале и в сборе для оценки его значения в качестве маркерного вещества для данного растения.
Результаты и обсуждения. В результате анализа установлено наличие (идентифицированы по времени удерживания), относительное содержание и происхождение следующих веществ в препарате: эвкалиптола, туйона, камфоры, L-борнеола, фуранкарбоксальдегида, пиколина, гумулена циклического, фарнезола, фенантриолина, азарона, бисаболола оксида, этилантрацена, нафталенона, азулена, 2-гидрокси-бензпирана, фарнезил ацетата, кариофиллена оксида, геранил ацетата, 1,5-нафтален диола, эукозана, фарнезола, дигидрокарвона, фитола, цисдигидроксикарвона, фарнезала, прегнана, кариофиллана, токоферола, стигмастерола, пентакозана или докозана.
Вывод. Таким образом, разработанным методом можно идентифицировать заявленные в препарате «Тонзилат» компоненты по соответствующим характерным летучим веществам.
Список литературы
- Холматов Х.Х.; Ахмедов У.А.; //Фармакогнозия//-Т.: Ибн Сино номидаги НМБ, 1995.- 623б.
- Губанов И.А.; Киселова К.В.; Новиков В.С. Дикорастущие полезные растения.-М.: Московского университета,1993-302с.
- Государственная фармакопея. Вып. 1. 11-е изд. доп. - М.: //Медицина//.1987.С.320.
- Пулатова Т.П.; Холматов Х..Х.; //Фармакогнозия амалиёти//-Т.: Ибн Сино номидаги тиббиёт нашр,2002.-360б.