АННОТАЦИЯ

Разработаны методы анализа полиацетиленовых соединений рода Полынь, произрастающих на юге Казахстана и в России. Методом планарной хроматографии установлено, что количественное содержание капиллена и капиллина в исследованных образцах Artemisia scoparia, A. dracunculus, A. arenaria варьирует существенно, однако метод позволяет с достаточной точность контролировать присутствие/отсутствие и количественное содержание этих соединений. Для проверки воспроизводимости методики проведено 6 независимых определений с использованием гексановых растворов эфирного масла A. scoparia, относительная погрешность составила ±5,1%.

Ключевые слова: Artemisia, полиацетилены, ТСХ, УФ, ИК спектроскопия.

Полиацетилены - это соединения, содержащие в своей структуре две или более тройные связи. В высших растениях идентифицировано более 2000 различных полиацетиленов и биогенетически связанных веществ. Полиацетилены являются относительно нестабильными, химически и биологически активными соединениями, которые биосинтезируются в растениях из ненасыщенных жирных кислот. Они локализуются в различных органах растений, встречаясь в составе эфирных масел. Полиины проявляют противовоспалительную, антикоагулянтную, антибактериальную, противотуберкулёзную, противогрибковую, противовирусную активности [1].

В видах рода Полынь, широко распространённых по территории Российской Федерации и Республики Казахстан, полиацетиленовые соединения - одна из основных групп биологически активных соединений [2, 3].

Целью исследования является разработка методов анализа полиацетиленовых соединений в видах рода Полынь, произрастающих в России и Казахстане.

Методы. Образцы эфирных масел Artemisia scoparia Waldst. et Kit., A. dracunculus L., A. arenaria DC. были получены из надземных частей указанных видов методом гидродистилляции с использованием прибора Клевенджера в модификации

Лошкарева. После выделения эфирные масла пропускали через слой натрия сульфата (2-3 см) и хранили в эксикаторе при температуре 0-4 °С. Обнаружение

полиацетиленовых соединений проводили в гексановых растворах эфирных масел методом УФ спектроскопии. УФ спектры поглощения регистрировали на спектрофотометре СФ-2000 в области от 200 до 400 нм.

Для идентификации индивидуальных полиацетиленовых соединений использовали метод тонкослойной хроматографии в системах растворителей различной полярности: гексан; петролейный эфир; гексан - этилацетат; гексан - эфир диэтиловый; в различных соотношениях. В качестве проявителей использовали: анисовый альдегид - кислота серная концентрированная; калия перманганат - кислота серная концентрированная.

Для количественного определения полиацетиленовых соединений использовали метод планарной хроматографии. Хроматографирование проводили с использованием пластин для ТСХ «Sorbfil ПТСХ-П-А» (Россия) 15*10 см. Элюировали в системах: гексан; гексан - этилацетат (9:1). Пробы наносили при помощи микрошприца в несколько приемов, так чтобы диаметр стартового пятна не превышал 2-3 мм. Хроматографировали при температуре 20-25 °С. После

прохождения фронтом растворителя 11-12 см от линии старта пластины удаляли из камеры и подсушивали на воздухе, обрабатывали детектирующим реагентом, выдерживали для проявления зон адсорбции при температуре 100-105 °С в течение 5 минут. В качестве детектирующего реактива использовали раствор ванилина в серной кислоте разведенной. После проявления пластину сканировали с помощью планшетного сканера с разрешением 200 dpi. Для цифровой обработки хроматограмм использовали компьютерную программу «Видеоденситометр Sorbfil» (г. Краснодар). Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки (внешнего стандарта). Абсолютное количество вещества в пробе определяли по графику градуировочной зависимости «масса вещества - площадь пика» (линейная аппроксимация) [4].

Для ИК-спектроскопии использовали ИК-Фурье-спектрометр с приставкой неполного поверхностного отражения (НПВО) [5]. Для этого образцы надземных частей Artemisia scoparia, A. dracunculus, A. arenaria измельчали. Далее полученный порошок (около 0,1 г) в течение 30 минут экстрагировали в колбе с обратным холодильником ДМФА (10 мл). Извлечение центрифугировали при 7000 мин^-1, в течение 5 минут. Регистрировали спектр суммарного извлечения. Для этого на призму приставки НПВО помещали 200 мкл ДМФА извлечения и регистрировали спектр поглощения в ИК области.

Анализ, полученных в процессе исследования гексановых растворов эфирных масел Artemisia scoparia, A. dracunculus и A. arenaria УФ спектров, показал, что они содержат характеристические максимумы поглощения, указывающие на присутствие в их составе ароматических полиацетиленовых соединений [2]. Наличие в УФ спектрах гексановых растворов характеристических максимумов поглощения при 200-250 нм свидетельствовало о присутствии соединений с сопряженными двойными связями, а в области 270-340 нм - сопряженными тройными связями.

Методом тонкослойной хроматографии, по показателям Rf и окраске зон сканирования в различных системах растворителей, а также по УФ спектрам индивидуальных соединений, обнаруженных и выделенных с хроматограмм, были идентифицированы ароматические полиацетиленовые соединения капиллен и капиллин [2]. Идентификация других, предположительно ароматических полиацетиленов, продолжается.

Рамановские спектры диацетиленов характеризуются сильным поглощением в области 2200-2300 см ¹ ввиду валентных колебаний -C=C-C=C- группировки. Анализ ИК спектров ДМФА извлечений из надземных частей исследованных видов полыней показал, что область 2200-2300 см^-1 этих спектров содержит характерные полосы поглощения.

Заключение:

В результате проведенных исследований показано, что присутствие ароматических полиацетиленовых соединений в эфирных маслах Artemisia scoparia, A. dracunculus, A. arenaria достаточно быстро и надежно можно устанавливать методом ТСХ и УФ спектрофотометрии. Разработан также экспрессный метод идентификации полиацетиленовых соединений в растительном сырье этих видов с помощью ИК-спектроскопии с Фурье преобразованием. Метод планарной хроматографии позволяет контролировать количественное содержание капиллена и капиллина в эфирном масле полыней.

Источники финансирования: Исследование выполнено в рамках НТП из внебюджетных средств ЮКГФА на тему «Фитохимические исследования растений родов Тысячелистник и Василек семейства Астровые» (№ государственной регистрации 044-01/14-772a от 07.07.2015 г.) кафедры фармакогнозии и химии, Южно-Казахстанская государственная фармацевтическая академия.

Конфликт интересов: Авторы данной статьи подтверждаю отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.

Литература

1. Natural polyacetilen compounds / Konavalov D.A.. //Pharmacy and Pharmacology. 2014. № 4 (5). P. 23-48.
2. Composition of essenial oil of Artemisia scoparia Waldst. et Kit. / Konovalova O.A., Konavalov D.A., Kabanov V.S., Rybalko K.S., Sheychenco V.I. // Plant recourses. 1989. V. 25. № 3. P. 404410.
3. Polyacetilen compounds of plants by genus Asteraceae (Review) / Konavalov D.A. // ChemicalPharmaceutical journal. 2014. V. 48. № 9. P. 36-53.
4. Quantitative determination of santonine and tauremisine in aerial part of Artemisia santonica (Asteraceae) / Vodozerova L.A., Mezenova T.D., Konavalov D.A.. // Plant recourses . 2007. V. 43. № 2. P. 106-110.
5. Pharmacognostical study of Brassica napus (Brassica napus L.) / Syedin A.V. // autoabstract of dissertation work on getting degree of candidate of pharmaceutical sciences Pyatigorsk State Pharmaceutical academy. Pyatigorsk, 2014 - 25 p.