РЕЗЮМЕ
Как известно, фенольные соединения являются основной группой веществ, которые обеспечивают фармакологическую активность. Поскольку сахара могут образовывать гликозиды с фенольными соединениями, а их качественный и количественный состав будет влиять на растворимость, биодоступность и общий фармакотерапевтических эффект экстракта, то целесообразно изучить моносахаридный состав жидкого экстракта из листьев брусники обыкновенной. Предварительную идентификацию моносахаридов в экстракте проводили с помощью бумажной хроматографии. Так же анализ моносахаридов также проводили методом ВЖХ. В результате исследования моносахаридного состава водно-спиртового жидкого экстракта из листьев брусники обыкновенной методом бумажной хроматографии и ВЖХ было идентифицировано 4 моносахарида и установлено их количественное содержание. В жидком экстракте листьев брусники обыкновенной было идентифицировано 4 моносахарида - глюкоза, рамноза, рибоза, арабиноза, и установлено их количественное содержание. Моносахарид арабиноза в экстракте в основном находится в связанном виде (78 % от общего количества арабинозы), что свидетельствует о наличии специфических гликозидов - арабинозидов. После гидролиза увеличивается содержание всех моносахаридов, что свидетельствует о наличии в экстракте гликозидов фенольных соединений.
Ключевые слова: лист, брусника обыкновенная, жидкий экстракт, моносахарид.
В народной и официнальной медицине отвар из листьев брусники обыкновенной используют как высокоэффективное средство для лечения болезней почек и мочевыводящих путей. Но эта лекарственная форма имеет ряд недостатков: сложности в приготовлении, отсутствие стандартизации и невозможность длительного хранения. Поэтому создание нового стандартизированного лекарственного средства на основе биологически активных веществ листьев брусники обыкновенной. является актуальным. Как известно, фенольные соединения являются основной группой веществ, которые обеспечивают фармакологическую активность. Поскольку сахара могут образовывать гликозиды с фенольными соединениями, а их качественный и количественный состав будет влиять на растворимость, биодоступность и общий фармакотерапевтических эффект экстракта, то целесообразно изучить моносахаридный состав жидкого экстракта из листьев брусники обыкновенной.
Методы: Для получения жидкого экстракта 0,5 кг листьев брусники обыкновенной, измельченных до размера частиц 2-3 мм, помещали в колбу, заливали 3 литрами 50% этанола, экстрагировали в течение суток при комнатной температуре. Экстракцию повторяли трижды с новыми порциями экстрагента (1,0 л). Полученные извлечения объединяли, отстаивали в течение суток, отфильтровывали, стерилизовали. Фильтрат упаривали с помощью ротационного вакуум-испарительного аппарата до 1 л жидкого экстракта.
Предварительную идентификацию моносахаридов в экстракте проводили с помощью бумажной хроматографии нисходящим способом в системе н-бутанол - кислота уксусная - вода (4:1:2) с
достоверными образцами нейтральных моносахаридов. Хроматограмы проявляли раствором кислого анилина фталата при нагревании до 100-105 оС.
Анализ моносахаридов также проводили на хроматографе фирмы Agilent Technologies (модель 1100), который укомплектован проточным вакуумным дегазатором G1379A, 4-х канальным насосом
градиента низкого давления G13111А, автоматическим инжектором G1313A, термостатом колонок G13116А и рефрактометрическим детектором G1362A. Для проведения анализа была использована карбогидратная хроматографическая колонка размером 7,8 х 300мм «Supelcogel-C610H». Для проведения анализа был установлен такой режим хроматографирования: скорость подачи подвижной фазы 0.5 мл/мин, элюент 0.1% водный раствор H3PO4, рабочее давление элюента 33-36 кПа, температура термостата колонки 30 °С, объем пробы 5 мкл. Параметры рефрактометрического детектирования были такие: масштаб измерения 1.0, время сканирования 0.5с. Идентификацию моносахаридов проводили по времени удержания стандартов [1].
Гидролиз проводили следующим образом. Аликвоту 300 мкл спиртового экстракта смешивали с 300 мкл раствора 6N соляной кислоты в этаноле (1:1 по объему) в 2 мл виале. Виала герметично закрывали и выдерживали в термошкафу 1 час при 100 °С. После охлаждения содержимое виалы центрифугировали и переносили в виалу для анализа.
Результаты: В жидком экстракте методом бумажной хроматографии были идентифицированы глюкоза и рамноза.
В результате исследования моносахаридного состава водно-спиртового жидкого экстракта из листьев брусники обыкновенной методом ВЖХ было идентифицировано 4 моносахарида и установлено их количественное содержание (рис. 1 и рис. 2). Содержание свободной глюкозы составило 4.11 г/л, рамнозы - 5.41 г/л, рибозы - 0.21 г/л и арабинозы - 0.98 г/л, а после гидролиза их количество увеличилось до таких значений: глюкозы - 4.72 г/л, рамнозы - 5.93 г/л, рибозы - 0.54 г/л и арабинозы - 4.42 г/л. Особенно, после гидролиза в исследуемом экстракте значительно увеличивается содержание арабинозы, что свидетельствует о наличии специфических гликозидов - арабинозидов.
Содержание свободных моносахаридов в жидком экстракте составляет 1,07 %, из них глюкоза - 0,41%, рамноза - 0,54%, рибоза - 0,02% и арабиноза - 0,1%, в связанном виде содержится 0,06% глюкозы, рамнозы - 0.05 %, рибозы - 0.03 % и арабинозы - 0.34 %, что составляет 0,48 %.
Выводы: Таким образом, в жидком экстракте листьев брусники обыкновенной было идентифицировано 4 моносахарида - глюкоза, рамноза, рибоза, арабиноза, и установлено их количественное содержание. Моносахарид арабиноза в экстракте в основном находится в связанном виде (78 % от общего количества арабинозы), что свидетельствует о наличии специфических гликозидов - арабинозидов. После гидролиза увеличивается содержание всех моносахаридов, что свидетельствует о наличии в экстракте гликозидов фенольных соединений.
Литература
1. Sensitive and Reliable Amino Acid Analysis in Protein Hydrolysates using the HP 1100 Series HPLC/ Технические заметки № 12-5966-3110E. - Angelika Gratzfeld-Huesgen, HP GmbH, Waldbronn. -2008.-12 с.