Стандартизация противовоспалительного средства «Уроконит»

Аннотация

Определены подлинность и количества флавоноидов аскорбиновой кислоты, дубильных веществ в сырьях и субстанции уроконита.

Ключевые слова: субстанция уроконита, качественная реакция, флавоноиды, аскарбиновая кислота, дубильные вещества, кверцетин.

Цель исследования: изучение содержание суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин и аскарбиновой кислоты в составе лекарственного средства «Уроконит». Сырьем для получения «Уроконита» - сухого экстракта служили кукурузные рыльцы, смесь листьев, стеблей крапивы двудомной, плоды шиповника и надземная часть травы эрвы шерстистой. Экстракция проводилась очищенной водой. Сушка экстракта осуществлена методом распыления.

Сухой экстракт представляет собой порошок коричного цвета, с приятным ароматным запахом, слегка слизистого и горьковатого вкуса, влажность 9 %. Растворим в воде, мало растворим в спирте.

Введение: мочекаменная болезнь является широко распространенным заболеванием в условиях Средней Азии и создание высокоэффективного лекарственного средства природного происхождения её для лечения представляет большой интерес.

Мочекаменная болезнь-заболевание характеризующая наличием камня или нескольких камней в почках или мочевых путях. Это одно из наиболее распространеных урологических заболеваний и встречается не менее чем у 1-3 % населения, причем наиболее часто в возрасте 20-50 лет. Больные составляют 30-40 % всего континента урологических стационаров. В современной нефрологии

профилактика и медикаментозная терапия мочекаменной болезни является одной из основных задач. Несмотря на достигнутое в последние годы успехи в этом направлении поиск эффективных и безопасных лекарственных средств продолжается. Использование лекарственных растений и препаратов растительного происхождения в комплексном лечении мочекаменной болезни приводили к предупреждению прогрессирования заболевания и развития его осложнений. Растительные препараты обладают более мягким действием, менее токсичны, чем синтетические и не вызывают привыкания и аллергии.

Методы и материалы: сухой экстракт «уроконита»; мягкие шелковистые нити столбики с рыльца кукурузы обыкновенной - Zea maes L. сем. Мятликовых - Роасеае, листья крапивы двудомной - Urtica dioica L., сем. крапивных - Uricaceae, трава эрвы шерстистой Aerva lanata (L) Juse, семейства амарантовых - Amaranthaceae, - спектрофотометры Agilent 8453 UV IVIS, ФС, ФСП.

Качественная реакция: 1. Измельченной субстанции в количестве 1 г помешали в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 20 мл 50% спирта и нагревали на водяной бане при температуре 60 ⁰С в течение 15 мин. Затем извлечение охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через бумажный фильтр и упаривали до 1 мл. К полученному извлечению прибавляли 1 мл 96% спирта, 0,1 г порошка магния и 1 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; постепенно появляется красное окрашивание (флавоноиды).

2. Из измельчённых субстанции получали извлечение (см. «Количественное определение») и на линию старта хроматографической пластинки «Сулуфол» размером 15х10 см наносят на две точки в отдельности по 0,1 мл извлечения и 0,1 % водного раствора аскорбиновой. Пластинку с нанесенными пробами высушивали на воздухе в течение 5 мин хроматографировали восходящим способом в системе растворителей: бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5). После прохождения фронта растворителей, примерно 13 см , пластинку внимали из камеры, высушивали в вытяжном шкафу в течение 10 мин. Затем хроматограмму проявляли 0,001 моль/л раствором 2,6 дихлорфенол индофенолята натрия. На синем фоне хроматограммы, на уровне пятна свидетеля появиться пятно белого цвета (аскорбиновая кислота).

Количественное определение аскорбиновой кислоты. Около 0,2 г (точная навеска) мелко растертого порошка субстанции, помещали в коническую колбу вместимостью 500 мл, постепенно добавляли 100 мл воды и взбалтывали в течение 10 минут. Раствор фильтровали через плотный бумажный фильтр ”Синяя лента”, отбрасывая первые 10 мл фильтрата [1]. В коническую колбу вместимостью 100 мл вносили 1 мл полученного фильтрата, 1 мл 2 % раствора хлористоводородной кислоты, 13 мл воды, перемешивали и титровали из микробюретки 0,001 моль/л раствором 2,6 - дихлорфенол-индофенолята натрия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30-60 с. Титрование продолжали не более 2 мин. В случае интенсивного окрашивания фильтрата или высокого содержания в нем аскорбиновой кислоты (расход 0,001 моль/л раствора 2,6 - дихлорфенолиндофенолята натрия более 2 мл). обнаруженного пробным титрованием, исходное извлечение разбавляли водой в 2 раза или более.

Содержание аскорбиновой кислоты в пересчете на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляли _v _ V 0.00 00 88-100-100 '

по формуле: г— ,

m-l-(ion-w)

где : 0,000088 - количество аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 моль/л раствора 2,6 - дихлорфенолиндофенолята натрия, в граммах; V - объем 0,001 моль/л раствора 2,6 -

дихлорфенолиндофенолята натрия, прошедшего на титрование, мл; m - масса порошка, г; w - потерия массе при высушивании порошка, %.

Количественное определение суммы флавоноидов, в пересчете кверцетина.

Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помешали в колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 100 мл хлороформа, затем присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Экстракцию хлороформом проводится трижды по 100 мл. Хлороформные сливы отбрасывали.

Навеску, обработанную хлороформом, раскладывали тонким слоем на лист пергаментной бумаги и высушивали до полного исчезновения запаха хлороформа в сушильном шкафу при 60 ⁰С.

Навеску количественно переносят в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 80 мл 70% спирта, присоединяли обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Колбу охлаждали до комнатной температуры под струей холодной воды, и извлечение фильтровали через вату и мерную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию повторяли еще 2 раза указанным выше способом [2,3].

Объединенные извлечения повторно фильтровали через бумажный фильтр в ту же мерную колбу, и объем фильтрата доводили до метки 70 % спиртом и перемешивали (раствор А). К 2 мл раствора А добавляли 2 мл 2% водного раствора алюминия хлорида и 6 мл 5% раствора натрия ацетата. Через 1 ч измеряли оптическую плотность раствора на фотоколориметре при длине волны 440 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

В качестве раствора сравнения использовали раствор, состоящий из 2 мл раствора А, 2 мл очищенной воды и 6 мл 5% раствора натрия ацетата. По калибровочному графику находят концентрацию кверцетина в мкг в 2 мл раствора А.

Содержание суммы флавоноидов, в пересчете на кверцетин в абсолютно сухом сырье, в процентах (Х) вычисляли по формуле:

С-250-100-100

Y

m (100- W) -2’ где: С- содержание кверцетина в 2 мл раствора А, найденное по калибровочному графику, в г; m - масса навески сырья, г; w - потеря массе при высушивании порошка субстанции, %.

Построение калибровочного графика. Около 0,05 г СО кверцетина помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 70% спирте и доводили объем раствора спиртом до метки. Из исходного раствора готовили ряд разведений с концентрацией кверцетина от 20 до 100 мкг в 2 мл. Из каждого разведения берут по 2 мл. Прибавляли по 1 мл 2% водного раствора алюминия хлорида и 6 мл 5% раствора натрия ацетата. Спустя 1 ч измеряли их оптическую плотности на фотоколориметре при длине волны 440 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве раствора сравнения смесь 2 мл 2 % водного раствора алюминия хлорида и 6 мл 5% раствора натрия ацетата.

Результаты их обсуждение: сумма флавоноидов в пересчете на кверцетин обнаружено в сырье кукурузного рыльца- 0,5 %, в листьях крапивы - 0,083 %, траве эрвы шерстистой - 0,22%, а в субстанции уроконита - 1,27 %

Содержание аскорбиновой кислоты субстанции уроконита составляет - 1.65 %, в кукурузных рыльцах- 0,73 %, в листьях крапивы - 0,30 %, в траве эрвы шерстистой - 0,52%, Перманганотометрическим методом установлено содержание дубильных вешеств в субстанции уроконита -1,78 %, в траве эрвы шерстистой - 0,22%, в листьях крапивы - 1,83 %.

Выводы. 1. Впервые получен сухой экстракт из водных экстрактов кукурузных рыльцев, листьях крапивы, траве эрвы шерстистой и плодов шиповника методом распылительной сушки, который условно был назван «Уроконитом».

2. Установлено количественное содержание сумма флаваноидов, аскорбиновой кислоты и дубильных веществ в сухом экстракте.

Литература

1. Плоды шиповника ФС 42 Уз - 0209-2012;
2. Столбики с рыльцами кукурузы ФСП 42 Уз 20900059-1564-2010;
3. Листья крапивы ФСП 42 Уз 20900059-1616-2010;