АННОТАЦИЯ
Установлено, что в тимусе у подопытных крыс, подвергшихся интоксикации фосфорорганическими соединениями наблюдается нарушение гематотимусного барьера, характеризующееся появлением лимфоцитов и плазматических клеток в ее корковом веществе.
Ключевые слова: фосфорорганические пестициды, тимус, лимфоциты, плазматические клетки.
В настоящее время в мировом сельскохозяйственном производстве сохраняется тенденция увеличения объемов применения пестицидов, при этом их качество постоянно совершенствуется. Синтезируются препараты с коротким периодом распада в объектах окружающей среды и полным разложением их в растениях (1,2,3,4).
Поступая в организм, пестициды и их соединения изменяют ход метаболических процессов, приводя к нарушению его морфофункционального состояния(5,6).
Следует подчеркнуть, что изучение кроветворения и иммунного статуса приобретает первостепенное значение, так как многие патологические процессы у человека могут быть как следствием, так и причиной различных нарушений работы системы иммунитета, особенно при вторичных иммунодефицитных состояниях (7, 8,9). Структурные изменения тимуса у животных в эксперименте с хронической интоксикацией фосфорорганическими пестицидамиизучены недостаточно.
Цель исследования - изучение морфологических изменений в тимусе у подопытных животных, подвергшихся воздействию фосфорорганических пестицидов.
Материал и методы исследования. В соответствии с поставленными задачами объектами исследования послужили 36 белых лабораторных крыс-самцов с исходной массой 80-120 г
находившихся в обычных условиях вивария. Подопытные животные содержались в отдельных клетках в комнатной температуре, естественном освещении, вентиляции. Питание было смешанным, сбалансированным.
Все подопытные животные были разделены на две группы. В первую группу были включены 12 интактных крыс-самцов, которым внутрибрюшинно вводили фосфорорганические пестициды в количестве 1,0 мл на 100 г массы в фосфат- цитратном буфера из расчета 11 мг/100 г массы тела. Во вторую группу были включены 24 половозрелых крыс-самцов, у которых было изучено влияние острого воздействия фосфорорганических пестицидов.
Для световой микроскопии брали ткань тимуса, из которой готовили образцы после фиксации в 10-12% растворе формалина в фосфатном буфере (по Лили). Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Для трансмиссионной электронной микроскопии фрагменты ткани тимуса объемом 1-2 мм фиксировали 2,5% раствором глутарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН-7,4), затем дофиксировали 1-2% раствором четырехокиси осмия (1час). После дегидратации в растворах этанола и ацетона в возрастающей концентрации, блоки заключали в эпоно-аралдитовую смесь. Ультратонкие срезы готовили на ультратомах "LKB-4880" "Ultracut" (Reichert-Jung). Полутонкие срезы (1 мкм) также получали на ультротомах "LKB-4880" "Ultracut" (Reichert-Jung) и окрашивали 1% раствором метиленового синего-фуксина. Ультратонкие срезы после двойного контрастирования в уранилацетате и цитрате свинца (микропроцессор "Ultrastainer", LKB) просматривали и фотографировали в ТЭМ "Hitachi Н-600".
Для сканирующей фотографии образцы ткани тимуса фиксировали в 2,5% глутаровом альдегиде на фосфатном буфере (рН-7,4). После дегидратации в растворах спирта-ацетона в возрастающей концентрации, срезы высушивали способом перехода через критическую точку закиси азота в аппарате "НСР-2" (Hitachi).
Образцы вмонтировали в алюминиевые подложки электропроводящим клеем. После ионного напыления золотом в аппарате "ЮЗ" ("Eiko", Japan) клетки просматривали и фотографировали в СЭМ "HitachiS-40SA". Затем препараты исследовали в электронном микроскопе "S-405 (Hitachi, Япония). Фотографирование осуществляли на цветной плёнке «KodakProfessionalProFoto100» или «Fujicolorsuperia100». Микрофотографии сканировали на сканере "ScanPrisa640" (Acer). Полученные данные подвергали компьютерной обработке на компьютере "ComputerPentiumIIIWindows2000".
Результаты и обсуждение. Через 7 суток после интоксикации фосфорорганическими пестицидами, корковое вещество долек тимуса было представлено плотно прилагающими друг к другу лимфоцитов с круглыми ядрами, содержащими крупные глыбкигетерохроматина и тонким ободком малодифференцированной цитоплазмы с единичными митохондриями. Т-лимфоциты плотно прилежали друг к другу, контактируя своими плазмолеммами. Иногда среди них встречались плазматические клетки, типичным признаком которых являются многочисленные узкие концентрически расположенные цистерны гранулярной эндоплазматической сети (рис.1).
Как известно, в норме в тимусе плазматические клетки не встречаются, и выявленный признак свидетельствует о нарушении проницаемости гематотимусного барьера, в состав которого входят эндотелиоциты стенки кровеносных капилляров, его непрерывная базальная мембрана
33периваскулярного пространства, базальная мембрана эпителиоретикулоцита и его цитоплазма (10). Ультраструктура ретикулоэпителиальных клеток характеризовалась удлиненными ядрами с фестончатыми контурами, содержащими преимущественно гетерохроматин. В их цитоплазме умеренно были развиты комплекс Гольджи и эндоплазматический ретикулум.
Вместе с тем особенно в мозговом веществе долек тимуса были обнаружены эпителиальные клетки со стромой с очень хорошо развитым комплексом Гольджи, которые располагались в околоядерной зоне и были представлены несколькими диктиосомами, лизосомами и множеством пузырьков. В таких клетках находились крупные, расширенные цистерны гранулярного эндоплазматического ретикулума с хлопьевидным содержимым в просвете, а также обнаруживались специфические для ретикулоэпителиоцитов вакуоли.
Эти данные свидетельстуют о том, что ультраструктура лимфоцитов тимуса и ретикулоэпителиальных клеток на данном сроке исследования не характеризуется какой-либо патологией и наиболее заметным изменением при этом является наличие в паренхиме органа плазмацитов, как следствие нарушения проницаемости гематотимусного барьера, что согласуется с данными литературой (11).
Через месяц после интоксикации фосфорорганическими пестицидами корковое вещество долек тимуса было представлено скоплениями лимфоцитов в петлях, образованных ретикулоэпителиальной стромой. Лимфоциты характеризовались округлым гетерехроматиновым ядром и тонким ободком цитоплазмы, в некоторых лимфоцитах тимуса были обнаружены изменения в виде расширения перинуклеарных цистерн и признаков апоптоза (рис.2).
Таким образом, на основании полученных данных можно заключить, что в тимусе деструктивные изменения, в первую очередь, отмечаются в паренхиматозных и стромальных элементах органа, располагающихся в непосредственной близости к стенке кровеносных капилляров. Учитывая что, при интоксикации фосфорорганическими пестицидами в плазме крови обнаруживаются токсины, можно предположить, что эти изменения являются, по-видимому, проявлениями прямого цитотоксического, повреждающего эффекта пестицидов.
Выводы.
- Под влиянием фосфорорганических пестицидов деструктивные изменения в тимусе отмечаются в паренхиматозных и стромальных элементах органа, располагающиеся в непосредственной близости к стенке кровеносных капилляров.
- Выявленные изменения обусловлены, по-видимому, прямым цитотоксическим эффектом фосфорорганических пестицидов.
ЛИТЕРАТУРА
- Мельников Н.Н., Мельникова Б.М. Мировое потребление пестицидов.-Ташкент.-1997.-26 с.
- Искандарова Г.Т. Меры профилактики при применении нового пестицида ХС-2. //Бюлл.ассоц. врачей Узбекистана. - Ташкент.-2000. - №1. - С.56-58.
- Каримов Х.Я., Дадажанов Ш.Н., Гильдиева М.С. Репродуктивные клетки крыс как биологические индикаторы влияния факторов окружающей среды. //Морфология. - 2003.-№1-С. 56-58.
- Ибраев С.А. Токсическая миокардиодистрофия при хронической интоксикации промышленными ядами (фосфор и его неорганические соединения) //Тез.докл.ІІІ-съезда терапевтов Казахстана. - Караганда. - 1990. - С.146-148.
- Шарманов Т.Ш., Мамырбаев А.А. Токсикология фосфора и их неорганических соединений. - Алма-Ата. -1992.- С.141.
- Кулкибаев Г.А. Общие механизмы токсического действия промышленных ядов в зависимости от характера питания. //Алма-Ата. - 1992. - С.86.
- Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные представления о защите организма от инфекции. // Иммунология.- 2000. - №1. - С.61-64.
- Ковалев И.С. Иммунитет как функция системы организма, инактивирующего чужеродные химические соединения. //Хим.-фарм.журнал.-1997.-№21.- С.3-14.
- Искандаров Т.И., Элинская О.Л. Гигиенические особенности безопасного применения пестицидов для сельскохозяйственных пищевых культур./Гигиенические аспекты охраны окружающей среды, укрепление здоровья и благополучие населения - приоритетные направления здравоохранения Узбекистана. Научно-практ.конф. с междунар. участием. - Ташкент. -2014. - С-47- 49.
- Жунисова М.Б. Современное состояние проблемы изучения токсического поражения печени при интоксикации соединениями фосфора. //А.Ясауиатындағы халықаралық қазақ-түрік университетінің Хабаршысы. - 2010. - №6 (72) - 258-261 бб.
- Бобова Л.П., Кузнецов С.Л., Сапрыкин В.П. Гистофизиология крови и органов кроветворения и иммуногенеза - М.: «Новая волна». -2003.