АННОТАЦИЯ
Установлено, что при хронической фосфорной интоксикации у подопытных крыс происходит угнетение иммунологической реактивности, а использование кобавита в качестве иммуностимулятора приводит к значительной коррекции иммунного ответа у экспериментальных животных.
Ключевые слова: желтый фосфор, иммунный ответ, кобавит, селезенка.
Интенсивная добыча, производство фосфора и его соединений в хлопкосеющих районах Южного Казахстана проводятся на фоне ультрафиолетовой инсоляции и перегревания организма, что усугубляет патогенное действие на организм даже самых малых концентраций этого токсического вещества и способствует возникновению скрытых, малосимптомных форм хронической интоксикации, что делает особенно необходимым поиск новых методов диагностики и лечения (1,2,3,4)
В настоящее время изучение кроветворения и иммунного статуса приобретает первостепенное значение, так как многие патологические процессы у человека могут быть как следствием, так и причиной различных нарушений работы системы иммунитета, особенно при иммунодефицитных состояниях (5,6,7,8,9). Вместе с тем иммунная реакция - сложный и многоэтапный процесс, включающий в себе распознование антигена, пролиферацию, дифференцировку, миграцию и кооперацию разных типов клеток, а также образование эффективных иммуноцитов.
Цель исследования - изучить функциональное состояние иммунопоэза при хронической фосфорной интоксикации у экспериментальных животных.
Материал и методы исследования. Исследования проводились на 18 половозрелых беспородных белых крысах с начальной массой 120-140 г. Животных содержали в условиях вивария на обычном пищевом рационе и перед началом опытов их выдерживали в карантине 12-14 дней. Взвешивание крыс проводили один раз в неделю, желтый фосфор в хлопковом масле вводили крысам в желудок ежедневно с помощью зонда, в дозе 0,3 мг/кг массы тела в течение 6 месяцев. Животных разделили на 3 группы: 1-я группа - контрольная (интактная); 2-я группа - отравленные желтым фосфором; 3-я группа - отравленные желтым фосфором, получавшие кобавит per os в дозе 0,05 мг/кг массы тела подопытных животных в течение 10 дней.
Иммунный ответ на эритроциты барана определяли по количеству антителообразующих клеток (АОК) прямым методом локального гемолиза (10). Принцип метода основан на способности антиэритроцитарных антител, секретируемых антителообразующими клетками иммунизированных животных лизировать в присутствии комплемента эритроцитов барана, помещенных вместе с клетками в агарозный гель. Для постановки АОК использовали 350 мг сахарозы, которую разводили в 100 мл раствора Хенкса и помещали вводяную баню до полного просветления раствора, затем его рН доводили до 7,2 раствором едкого натрия; горячую сахарозу разливали по 2,8 мл в большие стеклянные чашки Петри.
Результаты и обсуждение. Установлено, что у подопытных крыс через месяц после хронической фосфорной интоксикации (ХФИ) угнеталась иммунологическая реактивность организма. Так, если у контрольных крыс на 5-е сутки после иммунизации эритроцитами барана (ЭБ) формируется 2210+123,9 АОК в селезенке, то у животных с ХФИ антителообразование угнетается в 2,9 раза (770+46,4 АОК). Аналогичные результаты были получены при расчете АОК на 1 млн. клеток селезенки: в контроле - 3,9+0,2 АОК, в опытной группе - 1,8+0,1 АОК, т.е. в 2,2 раза меньше, по сравнению с контролем. При ХФИ в 1,4 раза достоверно уменьшалось число ядросодержащих клеток селезенки (ЯСКС). Эти данные свидетельствует о том, что уже через месяц после ХФИ угнетается не только иммунный ответ к ЭБ, но и общая клеточность селезенки иммунизированных подопытных крыс.
Вторичный иммунодефицит сохранялся и через 2 месяца после ХФИ. Так, число АОК у крыс с ХФИ было в 2,7 раза меньше, чем у соответствующего контролю расчета на всю селезенку, и в 2,3 раза меньше при расчете на 1 млн. спленоцитов. При этом число ЯСКС, также было достоверно ниже, чем в контроле. Выраженный иммунодефицит сохранялся и на 3-м и 4-м месяцах после ХФИ. Число АОК в селезенке было соответственно меньше в 2,5 и 2,1 раза, чем в контроле. Такая жекартина наблюдалась при расчете АОК на 1 млн. клеток селезенки (показатели в 2,1 и 1,7 раза ниже, чем в контроле). Общая клеточность селезенки в эти сроки оставалась достоверно ниже нормативных значений. На 5-м месяце после ХФИ вторичный иммунодефицит также сохранялся, хотя глубина его была не столь выражена, как в первые месяцы. Так, число АОК на 1 млн. АОК антителообразование угнетался в 1,5 раза. Спустя 6 месяцев с момента моделирования ХФИ сохранялась достоверная разница между опытной и контрольной группами: число АОК в селезенке снижалось в 1,5 раза, а на 1 млн. спленоцитов - в 1,3 раза.
Следует отметить, что во все сроки исследований число ЯСКС у подопытных крыс было достоверно низким, чем в контроле. На основании полученных данных можно предположить, что ХФИ приводит к формированию вторичного иммунодефицитного состояния, которое сохраняется вплоть до шести месяцев. Как видно из таблицы, уже через месяц после ХИФ в селезенке образовалось 720,0+46,4 АОК. При проведении курса лечения с использованием кобавита число АОК повысилось до 1800+110,7, что в 2,5 раза больше, чем при ХФИ.
Таблица - Влияние кобавита на иммуногенез у подопытных животных при ХФИ (M+m)
|
Группы животных* |
Число ядер, содержащееся в клетках селезенки |
Кол-во АОК селезенку |
на всю |
Кол-во АОК на 10 клеток селезенки |
|||
|
M+m |
n |
ИС |
M+m |
ИС |
M+m |
ИС |
|
|
Контроль ХФИ 3. Кобавит |
864+23 415.0+7,6 428,7+10,6 Р2-1>0,05 Р3-1<О,01 Р3-2>0,05 |
5 5 5 |
- - +1,03 |
2210,0+123,9 720,0+46,4 1800,0+110,7 Р2-1<0,01 Р3-1<0,01 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
3,9+0,2 1,8+0,1 4,2+0,2 Р2-1<0,01 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
|
4. Контроль ХФИ 3. Кобавит |
544,1+14,3 473,9+12,5 489,5+13,5 Р2-1<0,05 Р3-1<0,05 Р3-2<0,05 |
5 5 5 |
- - +1,03 |
2480+136,6 880,0+53,9 2020,0+125,1 Р2-1<0,01 Р3-1>0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
4,6+0,2 1,9+0,1 4,1+0,3 Р2-1<0,01 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,2 |
|
Контроль ХФИ 3. Кобавит |
552,6+14,2 459,6+10,8 470,2+9,7 Р2-1<0,05 Р3-1<0,05 Р3-2<0,05 |
5 5 5 |
- - +1,02 |
2600,0+70,7 950,0+36,4 1880,0+75,2 Р2-1<0,01 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
4,7+0,1 2,1+0,1 4,0+0,2 Р2-1<0,01 Р3-1>0,05 Р3-2<0,01 |
|
|
Контроль ХФИ 3. Кобавит |
517,7+13,5 417,0+11,3 426,0+11,8 Р2-1>0,05 Р3-1<0,05 Р3-2>0,05 |
5 5 5 |
- - +1,02 |
2300,0+114,0 1050,0+57,0 1580,0+81,5 Р2-1<0,01 Р3-1>0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
4,5+0,2 2,5+0,1 3,7+0,2 Р2-1<0,01 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
|
|
Контроль ХФИ 3. Кобавит |
496,9+15,1 395,4+10,2 406,3+10,0 Р2-1>0,05 Р3-1<0,05 Р3-2>0,05 |
5 5 5 |
- - +1,03 |
2200,0+66,0 1160,0+53,0 1610,0+57,9 Р2-1<0,01 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
- - +2,3 |
4,5+0,3 2,9+0,1 4,0+0,1 Р2-1<0,01 Р3-1>0,05 Р3-2<0,01 |
|
|
Контроль ХФИ 3. Кобавит |
501,4+17,6 424,4+12,2 436,7+13,5 Р2-1>0,05 Р3-1<0,05 Р3-2>0,05 |
5 5 5 |
+1,03 |
1890.0+78,1 1210,0+53,4 1450,0+61,2 Р2-1<0,05 Р3-1>0,05 Р3-2<0,01 |
+2,3 |
3,8+0,2 2,9+0,1 3,4+0,2 Р2-1<0,05 Р3-1<0,05 Р3-2<0,01 |
|
|
^Примечание. n- |
число крыс, ИС - индекс соотношения к контролю, Р - степень достоверности |
||||||
При расчете АОК на 1 млн. клеток селезенки под действием кобавита показатель этот повысился в 2,3 раза. Иммуностимулирующий эффект кобавита проявился и через 2 месяца: число АОК в селезенке повысилось в 2,3 раза, а при расчете на 1 млн. спленоцитов - в 2,2 раза.
Начиная с 3-го месяца, иммуностимулирующая активность кобавита несколько ослабевала, при этом число АОК на селезенку повысилось в 2 раза, а на 1 миллион клеток - в 1,9 раза. Возможно, это связано с постепенным восстановлением иммунологической реактивности с первого по третий месяцы у крыс полсе ХФИ. В 4-м 5-м месяцах ХФИ кобавит способствовал повышению
антителообразования в селезенке в 1,5 и 1,4 раза соответственно.
Следует отметить, что даже спустя 6 месяцев после ХФИ наблюдалась достоверная (в 1,2 раза) стимуляция антителообразования. Во все сроки исследования введение кобавита не привело к существенным изменениям со стороны общей клеточности селезенки. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что кобавит обладает свойством корригировать угнетенный иммуный ответ у крыс с ХФИ.
ВЫВОДЫ.
1. У подопытных живтных с хронической фосфорной интоксикацией наблюдается угнетение иммунологической реактивности, что проявляется снижением антителообразования в селезенке.
2. У подопытных животных с хронической фосфорной интоксикацией кобавит оказывает иммунокорригирующий эффект, о чем свидетельствует усиление антителообразования в селезенке.
ЛИТЕРАТУРА
- Белоскурская Г.И., Бердыходжин М.Т., Айтбембетов Б.Н. К вопросу о клинике профессиональной хронической фосфорной интоксикации //Гигена труда и профессиональной фосфорной интоксикации. - Чимкент. - 1985. - С.19.
- Белоскурская Г.И., Бердыходжин М.Т., Айтбембетов Б.Н. Клиника, диагностика и экспертиза трудоспособности при хронической фосфорной интоксикации. /Методические указания. - Алма-Ата. -1980. -17 с.
- Даулетбакова М.И., Орманов Н.Ж., Бердыходжин М.Т. и др. Хроническая интоксикация соединениями фосфора: вопросы патогенеза, клиники, диагностики и экспертизы трудоспособности. //Методические рекомедации. -Алма-Ата. -1991. -22 с.
- Беклемишев Н. Д., Цой И.Г. Иммунопатогенез в инфекционном процессе. - Алма-Ата. - 1992. -352 с.
- Калашников А.А., Ахметов Ж.Б., Дауреханов А.М. Результаты морфологических перестроек силизистой оболочки желудка на воздействие вредных факторов фосфорного производства //Вестник ЮКГМА - Шымкент. - 2000. -№3. - С. 22-23.
- Хаитов Р..М., Пинегин Б.В. Современные представления о защите организма от инфекции. //Иммунология. - 2001. - С. 61-64.
- Дмитриев Д.А., Румянцева Е.Г. Современные методы изучения влияния загрязнения окружающей среды на иммунную систему //Гигиена и санитария. - 2002. - №3. - С.68-71.
- Каримов Х.Я., Дадажанов Ш.Н., Гильдиева М.С. Репродуктивные клетки крыс как биологические индикаторы влияния факторов окружающей среды //Морфология. -2003. - №1.-С. 69-72.
- Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение. //Иммунология. - 2003.- №4.- С.196-203.
- Jerne N.K.,Nordin A.A. Plaque formation in Agar by single antibody producsion cells. //Science. - 1963. - 140. - 3565. - P. - 405-406.
ТҮЙІН